一种实时荧光PCR分析方法与流程

本发明涉及一种生化检测分析仪，具体涉及一种实时荧光pcr分析方法。

背景技术：

1、面对hpv分型检测等呼吸道病原体检测的重大挑战，需要在非pcr实验室环境、短时间内简单方便地完成核酸检测，实现“样本进-结果出”的目的。核酸检测的流程主要分为核酸提取、核酸扩增、结果检测三部分。在实际的检测中，需要对样本进行裂解、清洗及洗脱等步骤，上述步骤一般需要专门设备和人工进行操作，尤其是样本与裂解液进行反应后，需要对带蛋白的磁珠微粒进行多次清洗。现有技术中的微流控芯片对样本进行裂解、清洗及洗脱时需要在不同的腔室进行，导致微流控芯片的结构复杂、可靠性低。

2、申请号为：cn202222107463.0，公开号为：cn218742049u的发明公开了一体式qpcr微流控芯片结构(下述称为现有技术1)，该微流控芯片结构包括qpcr微流控芯片本体、硬膜和软膜，qpcr微流控芯片本体上设置有样本加入口、工作腔、废液腔、裂解液腔、洗脱液腔和若干清洗液腔；样本加入口设置有可拆卸样本橡胶塞，样本加入口、裂解液腔、清洗液腔、洗脱液腔及废液腔分别通过样本流道、裂解液流道、清洗液流道、洗脱液流道及废液流道与工作腔连通；裂解液腔、清洗液腔、洗脱液腔内设置有液包和将液包刺破的刺破结构。

3、现有技术1中公开的微流控芯片结构，通过调节活塞的位置来实现在同一个工作腔内完成快速裂解、清洗及洗脱操作，现有技术中缺少能够匹配该微流控芯片进行荧光检测的分析仪；同时，在实际的检测中，需要对微流控芯片进行加热，并且需要对微流控芯片进行多次的加热和冷却，也就是实现高温加热和低温加热(冷却)循环切换，以使得样本达到荧光检测的需求；现有技术中的的测试仪在对微流控芯片进行加热和冷却的时候，采用一个工位进行操作，在同一个工位既要实现高温加热，也要实现低温加热，加热装置需要实现升温与降温的切换，升温与降温需要的时间长，导致加热装置的寿命降低；且实现升温与降温的切换，需要花费的时间长，微流控芯片高低温循环加热的过程中，耗费时间长。

技术实现思路

1、本发明的目的在于提供一种实时荧光pcr分析方法，其主要用于实现对现有技术1中的微流控芯片进行实时荧光检测，具有结构简单、操作便捷的优点，同时还能够有效缩短检测时间，提高检测效率。

2、为解决上述技术问题，本发明所采用的技术方案是：

3、一种实时荧光pcr分析方法，包括使用下述结构的分析仪进行pcr分析，分析仪包括底板、安装在底板上设置有微流控芯片驱动组件、高温加热组件、低温加热组件和荧光检测组件，荧光检测组件位于高温加热组件、低温加热组件之间；高温加热组件通过联动机构设置有超声波震动组件，底板上还设置有磁吸机构；位于高温加热组件上方还设置有挤液组件；

4、具体使用方法如下：

5、步骤1：将待检测样本置入至微流控芯片中，并将样本挤入微流控芯片中的工作腔内；

6、步骤2：将微流控芯片放置在微流控芯片驱动组件上，将微流控芯片进行固定在微流控芯片驱动组件上；

7、步骤3：微流控芯片驱动组件驱动移动至高温加热组件、低温加热组件、荧光检测组件、挤液组件以及超声波震动组件位置处；当微流控芯片移动至高温加热组件处时，高温加热组件对微流控芯片进行高温加热；当微流控芯片移动至低温加热组件处时，低温加热组件对微流控芯片进行低温加热；在进行高温加热的同时，超声波震动通过超声波的方式对微流控芯片中的样本进行搅拌；通过设置的挤液组件将微流控芯片中的液包进行挤破，使得液体能够进入至工作腔内；微流控芯片驱动组件在驱动微流控芯片中移动的同时，还用于实现对微流控芯片中活塞的驱动，实现微流控芯片中工作腔内两个活塞位置的调节。

8、其中，微流控芯片驱动组件包括导轨支架、第一安装板、微流控芯片支架和电机连接板，导轨支架用于安装在底板上，第一安装板滑动设置在导轨支架上并连接有用于驱动第一安装板移动的驱动机构a；

9、电机连接板滑动安装在第一安装板上并连接有用于驱动电机连接板移动的驱动机构b，

10、微流控芯片支架固定设置在第一安装板上，微流控芯片支架上设置有用于放置微流控芯片的放置槽；

11、电机连接板上连接有活塞驱动杆，活塞驱动杆端部设置有用于与微流控芯片中工作腔内设置的活塞相互匹配的连接部。

12、进一步优化，放置槽内设置有至少一个限位弹片，限位弹片用于将微流控芯片固紧在放置槽内，放置槽内设置有用于对微流控芯片进行限位的挡片。

13、其中，微流控芯片支架两侧设置有与所述放置槽连通的拿持缺口。

14、进一步限定，高温加热组件包括左侧高温加热组件、右侧高温加热组件和第一驱动机构，左侧高温加热组件固定设置在底板上，左、右侧高温加热组件之间形成高温加热区域，右侧高温加热组件滑动设置在底板上，第一驱动机构用于驱动右侧高温加热组件靠近或者远离微流控芯片；

15、右侧高温加热组件上还滑动设置有样本加热组件，样本加热组件滑动设置在右侧高温加热组件上端，样本加热组件与右侧高温加热组件之间设置有复位弹簧。

16、其中，左、右侧高温加热组件均包括加热板安装座和固定设置在加热板安装座上的加热单元，左侧高温加热组件中的加热板安装座固定设置在底板上；右侧高温加热组件还包括第二支撑座和第二弹簧，第二支撑座固定设置在底板上，右侧高温加热组件中的加热板安装座滑动安装在第二支撑座上，第二弹簧两端分别与第二支撑座及右侧高温加热组件中的加热板安装座连接，并在第二弹簧的作用下，右侧高温加热组件中的加热板安装座与第一驱动机构接触。

17、进一步优化，低温加热组件包括左侧低温加热组件、右侧低温加热组件和第二驱动机构，左侧低温加热组件用于固定安装在底板上，右侧低温加热组件用于滑动安装在底板上，左侧低温加热组件和右侧低温加热组件之间形成低温加热区域；第二驱动机构用于驱动右侧低温加热组件靠近或者远离左侧低温加热组件。

18、其中，超声波震动组件为超声波换能器，联动机构包括超声波安装支架和导向推杆，超声波换能器滑动设置在超声波安装支架上，且超声波安装支架上设置有缓冲机构，在缓冲机构的作用下，使得超声波换能器能够与离微流控芯片紧密接触；

19、超声波安装支架侧面垂直设置有一竖直部，竖直部用于铰接在左侧高温加热组件内的加热板安装座上，且在该加热板安装座上设置有导孔；

20、所述导向推杆用于固定安装在右侧高温加热组件内的加热板安装座上，所述导向推杆穿过导孔后与所述超声波安装支架接触，右侧高温加热组件内加热板安装座朝向左侧高温加热组件内的加热板安装座移动式时，导向推杆驱动超声波安装支架转动。

21、优选地，缓冲机构包括至少两个复位螺栓和第一复位弹簧，超声波换能器的安装盘上设置导向通孔，第一复位弹簧套装在复位螺栓上，复位螺栓穿过导向通孔后与超声波安装支架固定连接。

22、其中，挤液组件包括安装筒、挤液块、推杆、传动机构和驱动电机，推杆水平设置且滑动设置在安装筒上，挤液块固定设置在推杆的端部，驱动电机固定安装在所述安装筒上后并通过传动机构与推杆连接；

23、其中，传动机构包括驱动凸轮和拨动块，驱动凸轮上设置有让位槽，拨动块一端铰接在让位槽内，另一端与所述推杆上远离挤液块的一端铰接，安装筒用于安装在底板上。

24、与现有技术相比，本发明具有以下有益效果：

25、本发明主要由微流控芯片驱动组件、高温加热组件、低温加热组件和荧光检测组件组成，在实际的使用中，通过将样本添加至微流控芯片中，并将微流控芯片放置在微流控芯片驱动组件上，微流控芯片驱动组件驱动微流控芯片移动，使得微流控芯片能够移动至高温加热组件、低温加热组件、荧光检测组件、挤液组件以及超声波震动组件位置处，通过设置的高温加热组件和低温加热组件来实现对样本的高低温循环加热，以使得样本达到荧光检测组件的检测要求；同时，在超声波震动组件的作用下实现对微流控芯片中的样本进行搅拌；本发明能够实现对微流控芯片中的样本自动化检测，在检测的时候，能够有效的提高缩短时间，提高检测效率。