贝莱斯芽孢杆菌DF-08、生物制剂及其应用

本发明申请属于生物工程，具体涉及一种贝莱斯芽孢杆菌df-08、生物制剂及其应用。

背景技术：

1、随着吸烟与健康问题的提出，人们越来越关心烟草的品质问题，如何改善和提高烟草质量成为一个亟待解决的问题。烟草的组成成分极为复杂，其中，蛋白质是烟草中主要的含氮化合物，广泛存在于烟草的茎叶中，其与烟草品质密切相关。如若烟草中蛋白质含量过高，会导致在燃吸时产生似燃烧羽毛的臭味，并产生辛辣、苦涩感，严重影响烟丝整体质量。

2、为改善烟丝质量，提升卷烟原料品质，需要有效降解或消除烟丝中过量的蛋白质，使其含量保持在一定的合理范围之内；此外，发明人研究发现，采用适宜的微生物降解技术，能够将烟丝中的蛋白质降解成氨基酸等小分子物质，从而使还原糖等进一步参与美拉德反应，产生致香物质及致香前体物，是提高烟丝加工品质的有效途径之一。

3、由于现有研究仍然较为有限，技术效果也存在较大的差异，因而开发新的能够降低烟草制品中蛋白质含量的微生物制剂具有十分重要的应用意义。

4、公开于该背景技术部分的信息仅用于加深对本公开的背景技术的理解，而不应当被视为承认或以任何形式暗示该信息构成本领域技术人员所公知的现有技术。

技术实现思路

1、发明人研究发现，从2021年四川雪茄烟叶中分离得到的一种贝莱斯芽孢杆菌（ bacillus velezensis）df-08，通过选择性培养基诱导培养，能选择性分泌蛋白酶，其酶制剂可降解烟叶/烟丝中的蛋白质，进而有效改善烟叶/烟丝的品质。

2、根据本公开的一个方面，筛选鉴定得到一株贝莱斯芽孢杆菌（ bacillus  velezensis）df-08，于2023年4月3日保藏于中国典型培养物保藏管理中心（地址：湖北省武汉市武昌区八一路299号武汉大学校内，邮编：430072），保藏号为cctcc no：m 2023456。

3、根据本公开的又一个方面，提供一种生物制剂，含所述贝莱斯芽孢杆菌df-08和/或其代谢酶产物。

4、根据本公开的另一个方面，将所述贝莱斯芽孢杆菌df-08或所述生物制剂应用在烟叶/烟丝中蛋白质的降解当中。

5、根据本公开的再一个方面，将所述贝莱斯芽孢杆菌df-08或所述生物制剂应用在烟叶/烟丝品质的改善当中。

6、根据本公开的另一个方面，将所述贝莱斯芽孢杆菌df-08应用在蛋白酶的制备当中。

7、根据本公开的又一个方面，提供一种烟叶/烟丝处理方法，包括以下步骤：

8、（1）将所述生物制剂按照烟叶/烟丝重量的3～6%均匀添加到烟叶/烟丝中；

9、（2）调节烟叶/烟丝水分含量至15～30%，在温度28～32℃、湿度60～80%的条件下密封放置20～30 h；

10、（3）将烟叶/烟丝在75～85℃条件下烘干5～15min，即成。

11、根据本公开的再一个方面，提供一种所述生物制剂的制备方法，包括以下步骤：

12、（1）将所述贝莱斯芽孢杆菌df-08接种于lb固体培养基上，于36～38℃条件下培养20～30h；

13、（2）取步骤（1）中培养的菌体接种于lb液体培养基中，在34～36℃，170～190 r/min震荡培养20～30 h，得到种子液；

14、（3）取步骤（2）中种子液按照培养基重量的1～3%接种于产蛋白酶选择性诱导液体培养基中，在温度30℃～36℃、摇床转速200 r/min～240 r/min震荡培养8h～16h；

15、（4）取步骤（3）中培养后的培养基上清液，将所述上清液通过陶瓷膜部分过滤，而后超滤膜部分过滤，将得到的粗酶母液用无菌水按照1：8～10的体积比稀释，得生物制剂。

16、根据本公开的一个方面，所述步骤（3）中的液体培养基包含：牛肉膏5.0g/l、蛋白胨10.0g/l、nacl 5.0g/l、可溶性淀粉20.0g/l，且ph=7.0～7.2。

17、本申请实施例中提供的一个或多个技术方案，至少具有如下任一技术效果或优点：

18、1. 本申请中的贝莱斯芽孢杆菌（df-08）能选择性降低烟草中的蛋白质含量，可将烟叶中的蛋白质转化为氨基酸，从而使氨基酸进一步反应，生成致香物质及致香前体物，减少烟丝燃烧羽毛的臭味等杂气，改善口感。

19、2. 本申请工艺流程简便高效，烟丝处理成本较低，且处理周期较短、安全可靠，可选择性降低烟丝中的蛋白质大分子物质含量，并有效改善烟丝品质，在卷烟制造技术领域具有较高地推广应用价值。

技术特征：

1.一种贝莱斯芽孢杆菌（bacillus velezensis）df-08，其特征在于，其保藏号为cctccno：m 2023456。

2.一种生物制剂，其特征在于，含权利要求1所述贝莱斯芽孢杆菌df-08和/或其代谢酶产物。

3.权利要求1所述贝莱斯芽孢杆菌df-08或权利要求2所述生物制剂在降解烟叶/烟丝中蛋白中的应用。

4.权利要求1所述贝莱斯芽孢杆菌df-08或权利要求2所述生物制剂在改善烟丝品质中的应用。

5.权利要求1所述贝莱斯芽孢杆菌df-08在制备蛋白酶中的应用。

6.一种烟叶/烟丝处理方法，其特征在于，包括以下步骤：

7.权利要求2所述生物制剂的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：

8.根据权利要求7所述的制备方法，其特征在于，所述步骤（3）中的液体培养基包含：牛肉膏5.0g/l、蛋白胨10.0g/l、nacl 5.0g/l、可溶性淀粉20.0g/l，且ph=7.0～7.2。

技术总结
本发明申请公开了一种贝莱斯芽孢杆菌DF‑08、生物制剂及其应用，旨在解决当前因蛋白质含量过高从而严重影响烟草品质的技术问题。本申请从雪茄烟叶中分离得到贝莱斯芽孢杆菌DF‑08，保藏编号为CCTCC No：M 2023456，利用该菌株制备生物制剂的工艺流程简便高效，以其处理烟叶/烟丝的处理成本较低，且处理周期较短、安全可靠，可选择性降低烟草中的蛋白质大分子物质含量，并有效改善烟叶/烟丝品质，在卷烟制造技术领域具有较好地推广应用价值。

技术研发人员：付博,张有奇,王欢欢,武云杰,张晓平
受保护的技术使用者：河南农业大学
技术研发日：
技术公布日：2024/1/15