一种一步法制备卵黄抗体的方法与流程

本发明属于卵黄抗体制备领域，尤其涉及一种一步法制备卵黄抗体的方法。

背景技术：

1、卵黄抗体又称卵黄免疫球蛋白，是禽类蛋黄中存在的唯一的免疫球蛋白。卵黄抗体的形成过程：当机体受到外界特异性抗原(尤其是灭活抗原)的刺激后诱发一系列的免疫应答反应，激发b细胞分化成能分泌特异性抗体的浆细胞，分泌大量的特异性抗体进入血液中。同时在产蛋禽体内，血清中的特异性抗体igg由卵巢igg受体的介导逐步进入到卵巢滤泡和输卵管中，并在卵黄中蓄积起来，由于这种卵黄累积作用，使卵黄中的igg明显地高于血清中的含量，而血清中的其他抗体(主要是igm，iga)与输卵管中的卵白白蛋白一起混入到鸡蛋清中。

2、随着抗生素的大量使用，致病菌也在不断地进化和变异。为了消除滥用抗生素所带来的危害，减少和杜绝耐药菌株的出现和传播，卵黄抗体的发现和应用，是当今生物科学研究领域的一项重大发现。卵黄抗体以其动物种系发生距离远的优势，更适于作为一种生物制剂，为大批量开发抗细菌感染及抗病毒的预防和治疗等提供了一种新的选择，具有广阔的应用前景。

3、目前，产业化的卵黄抗体制备方法主要为酸化水-辛酸萃取方法。该方法主要流程为：由高免蛋收集卵黄，经一次灭活、盐酸或醋酸酸化处理、辛酸萃取、二次灭活、粗滤、除菌过滤、浓缩和三次灭活后，制备成卵黄抗体。该方法存在成本高、效率低、耗时较长等缺陷。同时，由于该方法存在诸多缺陷极大的影响了产品品质，一些粗制抗体产品回收率和抗体效价难以保证。

4、此外，中国专利申请cn101787080a公开一种抗甲型h1n1流感病毒特异性鸡卵黄抗体制备方法，具体为：将获得的抗甲型h1n1流感免疫蛋，去除蛋清及蛋黄膜，留取蛋黄部分，通过乙酸-乙酸钠缓冲液法获得水溶性组分，并用40-50％聚乙二醇6000(polyethyleneglycol 6000，peg6000)提取获得卵黄抗体粗提物；上述粗提物用饱和度为30-33％的硫酸铵溶液或140g/l的硫酸钠溶液进行纯化后，得到抗甲型h1n1流感病毒特异性igy成品，将所制得的igy成品冻干分装后于-20℃保存。该方法同样存在耗时长，工序复杂等缺陷。

5、由此可见，如何研发一种具有工序少、操作简便、高效快捷、节省人力、成本低，且卵黄抗体性质稳定、损失率小等特点的卵黄抗体制备方法是解决上述问题的关键所在。

技术实现思路

1、本发明针对现有卵黄抗体制备方法存在成本高、效率低、耗时较长等缺陷，进而影响产品品质的技术问题，提出一种具有工序少、操作简便、高效快捷、节省人力、成本低，且卵黄抗体性质稳定、损失率小等特点的卵黄抗体制备方法，利用该方法制备得到的卵黄抗体性质稳定，抗体损失率小于8％，去脂率和回收率高，效价活性强，批量高，适合精制卵黄抗体的大规模制备。

2、为了达到上述目的，本发明采用的技术方案为：

3、一种一步法制备卵黄抗体的方法，通过将溶解后的无水乙酸钠和聚乙二醇同时添加到装有纯水和蛋黄的酸化罐中，并调节溶液ph值至5.0-5.2，静置沉降，分离得到上清液；所述上清液再经过后处理工序后，得到所述卵黄抗体成品。

4、在一实施方式中，还包括蛋黄分离步骤：

5、将获得的高免蛋经过消毒处理后，先将蛋壳分离，再将蛋黄与蛋清分离，获得所述蛋黄，同时在分离过程中观察所述蛋黄的分离状态。

6、在一实施方式中，所述消毒处理包括：

7、高免蛋经臭氧熏蒸消毒后，经传送带送入毛刷区清洁后，再经0.5％舒安美喷雾消毒后，传递至蛋处理间，吹干备用。

8、在一实施方式中，所述高免蛋通过以下方法得到：

9、将检验合格的鸭病毒性肝炎灭活疫苗或鸭传染性浆膜炎灭活疫苗(1型)经颈部皮下免疫蛋鸡，免疫剂量2.0ml/只，共进行四次免疫，每次免疫间隔14日；

10、在第四次免疫后14日，测定鸭病毒性肝炎卵黄中和抗体效价或ra-1型平板凝集抗体效价。

11、在一实施方式中，所述纯水和蛋黄之间的质量比为(10-20):1。

12、在一实施方式中，所述无水乙酸钠与聚乙二醇的总质量和纯水之间的质量比为1:(10-100)。

13、在一实施方式中，所述聚乙二醇的质量是无水乙酸钠质量的2-5倍。

14、在一实施方式中，所述后处理工序包括过滤步骤：

15、所述上清液采用1微米滤芯进行过滤，得到过滤后的上清液。

16、在一实施方式中，所述后处理工序还包括ph调节、二次过滤和分装步骤：

17、使用1mol/l氢氧化钠溶液调节所述过滤后的上清液ph值至7.0-7.4后，采用0.22微米滤芯进行二次过滤、分装后得到所述卵黄抗体成品。

18、在一实施方式中，在所述后处理工序后还包括成品检验步骤：

19、对所述卵黄抗体成品分别进行性状检验、装量检查、无菌检验、安全检验以及效力测定步骤。

20、与现有技术相比，本发明的优点和积极效果在于：

21、1、本发明提供一种一步法制备卵黄抗体的方法，选用无水乙酸钠和聚乙二醇作为提取体系，通过同时向酸化罐中添加无水乙酸钠和聚乙二醇进行卵黄抗体制备，最终得到卵黄抗体成品；

22、2、本发明提供一种一步法制备卵黄抗体的方法具有工序少、机械化操作简便、快捷、高效、节省人力、成本低的优点，制得的卵黄抗体性质稳定、抗体损失率小于8％，去脂率和回收率高、效价活性强，批量高，适合精制卵黄抗体的大规模制备；

23、3、本发明提供一种一步法制备卵黄抗体的方法，该方法制得的卵黄抗体纯度高，可有效去除不饱和脂肪酸和脂蛋白等成分，同时制得的卵黄抗体液无细菌、霉菌、无支原体、无外源性病毒存在，安全性和保护率高。

技术特征：

1.一种一步法制备卵黄抗体的方法，其特征在于，通过将溶解后的无水乙酸钠和聚乙二醇同时添加到装有纯水和蛋黄的酸化罐中，并调节溶液ph值至5.0-5.2，静置沉降，分离得到上清液；所述上清液再经过后处理工序后，得到所述卵黄抗体成品。

2.根据权利要求1所述的一步法制备卵黄抗体的方法，其特征在于，还包括蛋黄分离步骤：

3.根据权利要求2所述的一步法制备卵黄抗体的方法，其特征在于，所述消毒处理包括：

4.根据权利要求2所述的一步法制备卵黄抗体的方法，其特征在于，所述高免蛋通过以下方法得到：

5.根据权利要求1所述的一步法制备卵黄抗体的方法，其特征在于，所述纯水和蛋黄之间的质量比为(10-20):1。

6.根据权利要求1所述的一步法制备卵黄抗体的方法，其特征在于，所述无水乙酸钠与聚乙二醇的总质量和纯水之间的质量比为1:(10-100)。

7.根据权利要求6所述的一步法制备卵黄抗体的方法，其特征在于，所述聚乙二醇的质量是无水乙酸钠质量的2-5倍。

8.根据权利要求1所述的一步法制备卵黄抗体的方法，其特征在于，所述后处理工序包括过滤步骤：

9.根据权利要求8所述的一步法制备卵黄抗体的方法，其特征在于，所述后处理工序还包括ph调节、二次过滤和分装步骤：

10.根据权利要求1所述的一步法制备卵黄抗体的方法，其特征在于，在所述后处理工序后还包括成品检验步骤：

技术总结
本发明提出一种一步法制备卵黄抗体的方法，属于卵黄抗体制备领域，能够解决现有卵黄抗体制备方法存在成本高、效率低、耗时较长等缺陷，进而影响产品品质的技术问题。该技术方案包括：通过将溶解后的无水乙酸钠和聚乙二醇同时添加到装有纯水和蛋黄的酸化罐中，并调节溶液pH值至5.0‑5.2，静置沉降，分离得到上清液；上清液再经过后处理工序后，得到卵黄抗体成品。本发明所提供的制备方法具有工序少、操作简便、高效快捷、节省人力、成本低，且卵黄抗体性质稳定、损失率小等特点。本发明能够应用于卵黄抗体制备方面。

技术研发人员：蔡联燊,于昊,李凯善,孙鑫,付泉,刘超,马爽,夏娜
受保护的技术使用者：青岛易邦生物工程有限公司
技术研发日：
技术公布日：2024/1/14