一种基于微流体扩增和胶体金试纸条的非洲猪瘟病毒快检试剂盒的制作方法

本发明涉及免疫学检测领域，尤其涉及一种基于微流体扩增和胶体金试纸条的非洲猪瘟病毒快检试剂盒。

背景技术：

1、近年来，随着世界经济和贸易全球化的发展，一些严重危害动物健康的疫病(如非洲猪瘟)接连发生跨国传播，使我国现代牧业、养殖业受到了沉重的打击，严重影响了我国动物及动物产品进出口贸易的发展。目前非洲猪瘟病毒检测手段局限于实验室检测，现场检测较少，主要原因是缺少合适的、快速有效的检测方法及设备。

2、目前，国内外非洲猪瘟病毒检测常用的方法有传统免疫学方法和分子生物学核酸检测法。传统免疫学方法——免疫胶体金试纸条法操作简便、判读简单、检测速度快、成本低，但牺牲了检测的灵敏度和特异性，很容易出现漏检和错检，这不符合口岸动物疫病病原体检测对精准检测的要求，因为较高概率的漏检和错检势必增大病原体入境传播的风险。分子生物学核酸检测法可通过对样本中病原体核酸的扩增保证检测的灵敏度和准确性，已经成为病原体诊断的重要手段，广泛应用于食品安全、动物健康等领域。

3、分子生物学核酸检测是以聚合酶链式反应—pcr(polymerase chain reaction,pcr)为基础的技术手段。pcr可以将微量的核酸片段在短时间内呈几何级数扩增，用于选择性放大特定的dna片段。pcr反应需要专业的核酸检测实验室和专业的实验人员以及专门的温控设备——pcr仪，分为普通pcr仪和荧光定量pcr仪。普通pcr仪采用金属作为控温媒介，可在1小时左右完成pcr反应，但是，其仅仅进行pcr扩增反应，不能直接检测结果，还需进行凝胶电泳分析，非常繁琐、费时费力；荧光定量pcr仪采用核酸探针结合荧光染料的技术手段，通过采集反应中的荧光信号对结果进行判定，具有实时检测、特异性强，灵敏度高等特点，目前已成为最常用的分子生物学核酸检测设备，但荧光定量pcr仪体积较大，移动后需校正，无法满足口岸动物疫病病原体检测对检测设备现场化、可移动化的要求现场快速核酸检测，此外，该仪器由于配置光学检测系统，成本也较为高昂。

4、其中，现有技术中微流体芯片中的微流管道往往为直线状或回形状，在将稀释液和检测样品混合、流动的过程中，流体在管中流动由于能量损失会引起压降，这种能量损失是由流体流动时克服内摩擦力和克服湍流时流体质点间相互碰撞并交换动量而引起的，表现在流体流动的前后处产生压力差，进而导致稀释液和检测样品混合效果较差，压降的增大会导致流速降低，从而增大检测等待的时间，降低检测效率。

技术实现思路

1、本发明克服了现有技术的不足，提供一种基于微流体扩增和胶体金试纸条的非洲猪瘟病毒快检试剂盒。

2、为达到上述目的，本发明采用的技术方案为：一种基于微流体扩增和胶体金试纸条的非洲猪瘟病毒快检试剂盒，包括：试剂盒体，和设置在所述试剂盒体内部的微流体芯片，以及设置在所述试剂盒体内部的试纸条，

3、所述微流体芯片包括：设置在所述试剂盒体顶部进液孔，以及通过连通管道依次连通在所述进液孔一侧的若干稀释腔室、若干混合腔室和若干出液孔；

4、所述混合腔室包括：上锥筒和固定在所述上锥筒底部的连接筒，以及固定在所述连接筒底部的下锥筒；所述上锥筒的内部依次与所述连接筒和所述下锥筒的内部相连通；

5、所述试纸条包括：设置在所述出液孔下表面的样品试纸，和设置在所述样品试纸一侧的若干胶体金试纸，以及设置在若干所述胶体金试纸一侧的若干检测试纸。

6、本发明一个较佳实施例中，所述上锥筒顶部的直径和所述下锥筒底部的直径均大于所述连接筒的直径，所述上锥筒底部的直径和下锥筒顶部的直径均与所述连接筒的直径大小相同。

7、本发明一个较佳实施例中，所述进液孔包括：样品进液孔、对比进液孔和试剂进液孔；所述试剂进液孔设置在所述样品进液孔和所述对比进液孔之间的中部。

8、本发明一个较佳实施例中，所述样品进液孔和所述试剂进液孔分别通过所述连通管道与所述稀释腔室相连通，所述对比进液孔和所述试剂进液孔分别通过所述连通管道与所述稀释腔室相连通。

9、本发明一个较佳实施例中，所述样品进液孔和所述稀释腔室连接的所述连通管道与所述试剂进液孔和所述稀释腔室连接的所述连通管道形成一个夹角，所述对比进液孔和所述稀释腔室连接的所述连通管道与所述试剂进液孔和所述稀释腔室连接的所述连通管道形成一个夹角，所述夹角均为直角。

10、本发明一个较佳实施例中，所述样品试纸的侧面部分覆盖在若干所述胶体金试纸的上表面，若干所述胶体金试纸的一侧部分覆盖在所述检测试纸的上表面。

11、本发明一个较佳实施例中，所述试纸条的底部设置有加热组件，所述加热组件包括：设置在所述试纸条下表面的垫片，和设置在所述垫片上表面的若干电磁线圈，以及设置在所述垫片顶部的电磁加热器；所述垫片固定在所述试剂盒体的内侧底部，所述试纸条固定在所述垫片的顶部，所述电磁加热器固定连接在所述试剂盒体的上表面。

12、本发明一个较佳实施例中，所述垫片和所述试纸条接触面的形状与所述试纸条的形状相同，所述电磁线圈设置在所述垫片和所述检测试纸之间。

13、本发明一个较佳实施例中，若干所述电磁线圈与所述电磁加热器电性连接，所述电磁线圈实现对检测试纸的热量传递。

14、本发明一个较佳实施例中，所述试剂盒体的顶部开设有若干观察口，若干所述观察口对应在所述检测试纸的上表面。

15、本发明解决了背景技术中存在的缺陷，本发明具备以下有益效果：

16、(1)本发明提供了一种基于微流体扩增和胶体金试纸条的非洲猪瘟病毒快检试剂盒，在微流体芯片中，通过将混合腔室依次由上锥筒、连接筒和下锥筒组成，且上锥筒顶部的直径和下锥筒底部的直径均大于连接筒的直径，上锥筒底部的直径和下锥筒顶部的直径均与连接筒的直径大小相同，进而形成锥形，液体流过时，在流动方向上会产生螺旋线的流动，降低流动时的压降，增大流速，缩短检测时间，并且提升了稀释液和样本液体的混合效率，从而保证了检测时的准确性，提高检测时的效率。

17、(2)本发明中稀释液和样本液体，在混合腔室内部受到上锥筒、连接筒和下锥筒之间直径变化造成的突然变宽和变窄，通过上锥筒向连接筒处流动过程中形成挤压，通过连接筒向下锥筒处流动过程中形成拉伸，流动到下锥筒内部时形成膨胀，保证了稀释液和样本液体混合均匀。

18、(3)本发明中通过设置若干混合腔室，且通过连通管道相连通，实现循环挤压、拉伸和膨胀，并且同期循环过程中，压降不变，保证流速，同时进一步的增加混合时的效率。

19、(4)本发明中通过将样品进液孔和稀释腔室连接的连通管道与试剂进液孔和稀释腔室连接的连通管道形成的夹角，对比进液孔和稀释腔室连接的连通管道与试剂进液孔和稀释腔室连接的连通管道形成的夹角，均设置为直角，液体在稀释腔室内汇合时，可以使液体更加稳定，直角处还可以使液体的流动更加均匀，避免了液体在汇合处产生的旋涡和涡流，从而提高了混合效果。同时，直角处还可以减少液体流动时产生的摩擦力和阻力，降低能量损失，提高了液体的流动效率。

20、(5)本发明中通过在若干检测试纸和垫片之间设置若干电磁线圈，通过电磁加热器与电磁线圈电性连接，可以在检测时控制检测所需的温度，提供了检测时所需要的环境因素，缩短了等待检测结果时的时间，进一步提高了检测时的效率，并使得检测得出的结果更加接近实验的数据。

21、(6)本发明中通过在微流体芯片中设置样品进液孔、试剂进液孔和对比进液孔，检测过程中，通过两条检测路线，使得检测结果有对比性，增加检测的真实性，且在样品试纸的一侧依次设置若干胶体金试纸和若干检测试纸，增加了检测结果的数量，保证了实验的重复性，在实际使用时，如果在胶体金试纸的nc膜上涂布有不同的抗体或抗原，从而可以在同一批次的监测样品中得到多种检测结果，提高了利用率和多元化效果。