本发明属于有机合成,具体涉及一种磷化对羟基苯甲醛类化合物及其辅助制备奥曲肽的方法。
背景技术:
1、生长抑素为是一种存在于下丘脑中,主要抑制生长激素分泌,由14个氨基酸组成的环肽类化合物,但在动物体内的半衰期只有2~4分钟。1982年bauer合成了一种生长抑素的类似物,命名为奥曲肽,奥曲肽为分子内含一对二硫键的环八肽,其药理作用与生长抑素相似,但作用持续时间更长,对多种疾病及肿瘤有确切治疗效果,于1988由美国fda年批准上市。
2、奥曲肽首先被提出运用液相片段缩合法合成,片段分为n-端二肽和c-端六肽两个片段,由boc/bzl策略保护使用叠氮法接肽,采用凝胶层析柱法进行脱盐和转盐,此方法存在着用酸脱boc保护时,d-trp易发生氧化、烷基化等副反应,叠氮化条件苛刻,凝胶层析转盐耗时长收率低等问题。刘克良等将片段分为n-端三肽和c-端五肽,偶联反应在dcm/nmm/dcc/hobt条件下进行,最后脱除侧链保护、氧化、转盐后得到醋酸奥曲肽,该工艺副反应少、可放大,但全程收率仅为6~10%左右。lpps制备奥曲肽采用逐步缩合和片段缩合的方法得到带有保护基的直链八肽,再脱除侧链保护基进行氧化得到环合产物,此过程每一步都要建立复杂的色谱分离程序,浪费有机溶剂。
3、在spps中通常采用fmoc保护策略合成直链肽,通过裂解得到中间体,再氧化序列中的两个半胱氨酸使其形成二硫键,最后通过液相制备进行纯化的方法得到奥曲肽。yasush等人用2-氯三苯氯树脂来合成奥曲肽,而hsieh等人灵巧的利用苏氨醇特有的双羟基结构,使用对甲酸苯甲醛形成缩醛作为连接剂,将thr的c-端固定在树脂上后进行肽链的延伸,最后将肽链剪切下来进行肽链的环合,但这两种方法在还原切除法中存在消旋问题。alexei iarov以及徐红岩等先后发明了用fmoc/tbu策略完成了奥曲肽的固相合成方法,该方法使用氯甲基树脂作为载体,制备3,4-二氢吡喃羟甲基树脂,将fmoc-thr(tbu)-ol连接到树脂上,然后按照fmoc/tbu固相多肽合成的方法将氨基酸逐个接上,肽链剪切下来后的粗品用空气氧化法氧化形成二硫键,再经制备hplc纯化冷冻得到奥曲肽。此方法可以避免切除时的消旋问题。spps可以实现多肽偶联自动化生产,但树脂基载体装载率低,还存在着制备复杂且难以回收等问题,对环境不友好,不利于绿色可持续发展。
4、经改进和优化后的固相合成方法逐步在国内被运用于工业化生产奥曲肽,目前有很多制备奥曲肽的工艺技术,这些现有制备方法大都以固相合成直链八肽,而后切肽(酸解/裂解),在液相中进行空气氧化完成分子内环化。但是这些现有专利总收率普遍不高,均未超过50%,而且有的成品纯度也比较低。专利cn101863961a公开了一种奥曲肽的制备方法,其主要在氧化环节进行了改进,通过在特定ph值条件下使用过量的过氧化氢来氧化,最终奥曲肽的总收率在74%,纯度达到了98%;专利cn103102390a公开了一种2+6的段合成法制备奥曲肽,同时在氧化环节通过在特性的ph值下,采用过量的过氧化氢或碘的乙醇溶液来环化,其奥曲肽的总收率在75%左右,纯度达到了99%。但是,这两种方法仍然没有实现全固相的合成方案,由于技术上的原因国内当下现有技术中还无法在全固相合成条件实现高总收率和高纯度,而现实全固相合成能够极大地简化制备工艺、缩短制备时间,降低生产成本。
5、可见,目前的奥曲肽化学生产方法主要是采用传统的溶液合成和固相合成法,存在分离纯化步骤繁琐、原料和溶剂浪费量大以及树脂固废多且难降解而造成环境污染严重的问题。
技术实现思路
1、为了解决现有技术中的不足,针对现有合成方法的不足,例如污染环境、选择性差、价格高等,本发明提供一种磷化对羟基苯甲醛类化合物及其辅助制备奥曲肽的方法,主要解决目前九肽化学合成方法的液相反应步骤较多、耗时周期长、副产β-型同分异构体的含量高,分离除杂困难,产品纯度低,纯化规模小、生产成本高,而固相反应的生产规模小,原料价格贵、浪费大,树脂类废弃物多和环境污染严重的问题。
2、本发明提供的一种磷化对羟基苯甲醛类化合物,结构通式为式pphba:
3、
4、式中,表示为
5、本发明目的提供一种磷化对羟基苯甲醛类化合物的制备方法,包括以下步骤:
6、用对羟基苯甲醛与二苯基磷酰氯、三氯氧磷或六氯环三磷腈,在碱性条件下反应,反应结束后,经分离纯化,获取磷化对羟基苯甲醛类化合物。
7、本发明目的提供一种磷化对羟基苯甲醛类化合物在制备奥曲肽中的应用。
8、本发明目的提供一种磷化对羟基苯甲醛类化合物辅助制备奥曲肽的方法,包括以下步骤:
9、以磷化对羟基苯甲醛类化合物为辅助基团,与n-端保护的氨基二醇上的二羟基或羟基硫醇发生缩合反应,反应结束后经纯化处理,获取生成物a;
10、将纯化的生成物a中的n-端保护的基团经脱除处理后,并经纯化后,获取生成物b;
11、以生成物b为载体,与经氨基酸羧端活化剂活化的n-端和侧链都保护的半胱氨酸依次进行偶联反应和n-端保护基团脱除反应,经分离纯化得到产物c;
12、再以产物c为载体,依次分别与n-端和侧链都保护的苏氨酸、赖氨酸、d-色氨酸、苯丙氨酸、半胱氨酸进行偶联反应和n-端保护基团脱除反应,反应结束后,再与n-端保护的d-苯丙氨酸进行偶联反应,获取奥曲肽的前体d;
13、其中,n-端的保护基团包括fmoc,boc,cbz或bn;侧链的保护基团包括acm,boc或tbu;
14、将奥曲肽的前体d通过氧化环合反应后,进行剪除辅助基团,同时脱除侧链上的保护基团,再经纯化处理,获得奥曲肽。
15、对比现有技术,本发明的有益效果为:本发明提供的一种磷化对羟基苯甲醛类化合物(pphba)及其辅助制备奥曲肽的方法,该方法兼备了液相和固相合成法的优点,可以更加简便、快捷、节约、高效地合成制备奥曲肽,而且pphba载体可以回收并直接再利用,降低原材料浪费,减少废弃物污染,节约成本,利于环保。
16、本发明的方法可以发展为制备奥曲肽及其类似物的通用型液相多肽合成策略,其过程中的每步所得中间体易于分离纯化,可规模化生产,节约原料成本,大大减少废物排放,利于环境保护,提高经济效益。
17、本发明合成pphba载体的原料丰富易得、反应条件温和、耗时短、产率好、易分离、纯度高。用pphba载体替代固相多肽合成中的高分子树脂,均相反应效率高,节约原料消耗。由于pphba载体的保护与辅助沉淀作用,简便了多肽合成过程中中间体的分离纯化步骤,节省时间,提高收率。剪切后pphba残片与奥曲肽容易分离,pphba残片可回收再循环利用,减少废料排放,节约成本,利于环保,社会经济效益好。
1.一种磷化对羟基苯甲醛类化合物,其特征在于,结构通式为式pphba:
2.一种权利要求1所述的磷化对羟基苯甲醛类化合物的制备方法,其特征在于,包括以下步骤:
3.一种权利要求1所述的磷化对羟基苯甲醛类化合物在制备奥曲肽中的应用。
4.一种磷化对羟基苯甲醛类化合物辅助制备奥曲肽的方法,其特征在于,包括以下步骤:
5.根据权利要求4所述的磷化对羟基苯甲醛类化合物辅助制备奥曲肽的方法,其特征在于,所述氨基二醇包括苏氨醇,丝氨醇或半胱氨醇。
6.根据权利要求4所述的磷化对羟基苯甲醛类化合物辅助制备奥曲肽的方法,其特征在于,所述氨基酸羧端活化剂包括:碳二亚胺类缩合剂,碳鎓盐类缩合剂或磷鎓盐类缩合剂。
7.根据权利要求4所述的磷化对羟基苯甲醛类化合物辅助制备奥曲肽的方法,其特征在于,所述生成物a的结构通式如下:
8.根据权利要求4所述的磷化对羟基苯甲醛类化合物辅助制备奥曲肽的方法,其特征在于,制备产物c的过程中,以生成物b为载体,与氨基酸羧端活化剂活化的fmoc-cys(acm)-oh先进行偶联反应后,所获得的中间体化合物的结构通式如下:
9.根据权利要求4所述的磷化对羟基苯甲醛类化合物辅助制备奥曲肽的方法,其特征在于,所述奥曲肽的前体d的结构通式如下:
10.根据权利要求4所述的磷化对羟基苯甲醛类化合物辅助制备奥曲肽的方法,其特征在于,将奥曲肽的前体d通过氧化环合反应后的中间体化合物,其结构式如下: