一种快速高效促进成骨分化诱导液的制备方法与流程

本发明涉及一种促成骨分化诱导液，尤其涉及一种快速高效促进干细胞成骨分化诱导液的制备方法。

背景技术：

1、骨相关疾病是临床上最常见的病种之一。骨组织工程技术的进步为骨缺损修复提供了新的思路，可在一定程度上解决目前传统骨缺损修复所存在的缺点，如移植骨来源有限、疾病交叉感染风险等。骨修复中关键的一步就是干细胞的成骨分化过程。干细胞分化为成熟的骨组织需要干细胞在诱导物下分化为成骨前体细胞、成骨细胞。随后成熟的成骨细胞增殖，分泌骨基质，骨基质钙化。

2、化学诱导法是目前最常用的成骨分化方法。通常将含有适宜浓度的地塞米松，抗坏血酸、维生素d、β甘油磷酸钠的培养液作为干细胞的成骨诱导液。但该方法存在制备复杂、诱导效率低、时间长（21-28天）、诱导分化成本高等问题。随着对干细胞分化过程的理解以及对细胞外囊泡等生化因素调控干细胞命运的研究逐步深入，现已证明外源性细胞外囊泡是调控干细胞命运的重要途经之一。大量研究表明干细胞成骨分化过程伴随着细胞外囊泡分泌与吞噬过程以及细胞外囊泡成分差异的变化。因此，通过在干细胞培养基中补充特定类型的细胞外囊泡有望实现更高效更快速的成骨分化诱导。

技术实现思路

1、本发明涉及一种快速高效促进干细胞成骨分化诱导液的制备方法。所述诱导液能够快速且高效地促进干细胞向成骨分化，在骨疾病细胞实验及临床中具有较好的应用前景。本发明所述提高干细胞成骨分化效率的诱导液，其特征在于：所述诱导组合物含有培养1-10天干细胞来源的、终浓度为1-10×109颗粒/ml的细胞外囊泡。

2、本发明所述的提高干细胞成骨分化效率的诱导液最优选的配方是：在1l低糖α-mem培养基中，含有2×109颗粒/ml的细胞外囊泡的溶液。

3、本发明提供的含有特定干细胞来源细胞外囊泡的诱导液，可用于干细胞治疗骨组织再生和修复，使之能定向分化，起到调控干细胞成骨分化的功能。

4、本发明发现，以细胞外囊泡为营养因子的促成骨分化诱导液可以快速高效地提高干细胞分化。

技术特征：

1.一种以细胞外囊泡为营养因子的促成骨分化诱导液，以α-mem培养基溶液为基础培养液，其特征在于：该基础培养液中含有有效浓度的细胞外囊泡；所述细胞外囊泡为特定诱导条件下获取的骨髓间充质干细胞细胞外囊泡；所属细胞外囊泡的浓度为2×109颗粒/ml。

2.根据权利要求1所述促成骨分化诱导液，其特征在于，所述基础培养基为α-mem培养基。

3.根据权利要求3所述细胞外囊泡，其特征在于骨髓间充质干细胞培养1-10天获得。

4.根据权利要求2所述促成骨分化诱导液，其特征在于，以终浓度计，细胞外囊泡在培养基中的浓度为2×109颗粒/ml。

5.根据权利要求4所述细胞外囊泡，其特征在于，所述细胞外囊泡的平均粒径为60-100nm。

6.一种促成骨分化诱导液制备方法，其特征在于，采用权利要求1至5任一项所述诱导液诱导培养干细胞，得到成骨细胞。

技术总结
本发明涉及一种快速高效促进干细胞成骨分化诱导液的制备方法。所述诱导液能够快速且高效地促进干细胞向成骨分化，在骨疾病细胞实验及临床中具有较好的应用前景。本发明所述提高干细胞成骨分化效率的诱导液，其特征在于：所述诱导组合物含有培养1‑10天干细胞来源的、终浓度为1‑10×10<supgt;9</supgt;颗粒/mL的细胞外囊泡。本发明所述的提高干细胞成骨分化效率的诱导液最优选的配方是：在1L低糖α‑MEM培养基中，含有2×10<supgt;9</supgt;颗粒/mL的细胞外囊泡的溶液。本发明提供的含有特定干细胞来源细胞外囊泡的诱导液，可用于干细胞治疗骨组织再生和修复，使之能定向分化，起到调控干细胞成骨分化的功能。

技术研发人员：王华楠,张杨,余涛兆,杨志华
受保护的技术使用者：张杨
技术研发日：
技术公布日：2024/1/15