一种降血糖活性肽的制备方法和应用

本发明属于混合发酵和酶解结合的，具体涉及用酪蛋白发酵后再用亮氨酸氨基肽酶进行酶解获得活性更高的降血糖活性肽的制备方法和应用。

背景技术：

1、糖尿病作为近年来引起代谢紊乱的最常见疾病，其发病率和死亡率都很高。合成的胰岛素和胰岛素类似物是控制高血糖的方法之一，但化学合成药物对人体有一定的副作用。因此，寻找安全、有效的天然降糖药物是研究热点。

2、一些乳源肽具有降血糖活性，其通过抑制将碳水化合物分解为葡萄糖的酶活性而控制血糖升高。降糖肽一般含有2～15个氨基酸残基，常以无活性的前体形式存在于蛋白质中，需要通过酶解、发酵、加工等方法将肽释放出来。

3、现有技术中，cn 105506046a公开了基于牦牛乳曲拉的酪蛋白降糖降脂肽及其制备方法，通过超高压/超声波/微波辅助技术结合模拟胃肠消化水解模式，有效提高了酪蛋白的水解度，实现了活性氨基酸序列的可控释放，提高其胃肠稳定性；采用的类蛋白反应修饰脱苦技术在无损多肽生物学活性的基础上解决了降糖降脂肽的苦味问题。可见，该制备过程只是通过水解反应将活性肽序列从酪蛋白中释放，那么如何合成新的、活性更高的降糖肽是下一步要解决的技问题。

技术实现思路

1、针对现有技术的不足，本发明的目的在于提供一种活性更高的降血糖活性肽的制备方法和应用。

2、本发明提供的制备方法利用复合乳酸菌发酵产生的特异性蛋白酶、肽酶联合外源亮氨酸氨基肽酶酶解酪蛋白，结合plastein反应将添加的外源氨基酸合成到新肽链中，得到活性更高的降糖肽。

3、为了实现上述目的，本发明提供如下技术方案：

4、本发明提供了一种降血糖活性肽的制备方法，包括以下步骤：将酪蛋白与水配置成酪蛋白水溶液，灭菌后与复合乳酸菌混合发酵，得到酪蛋白发酵液；对酪蛋白发酵液进行灭菌处理后加入亮氨酸氨基肽酶混合酶解，得到酪蛋白水解液；将酪蛋白水解液真空浓缩后，经plastein反应，真空冷冻干燥得到降血糖活性肽。

5、优选的，所述复合乳酸菌包括：瑞士乳杆菌和植物乳杆菌；所述瑞士乳杆菌和植物乳杆菌的菌落数比为1～6:1。

6、优选的，所述发酵的温度为30～50℃，发酵至酪蛋白水溶液的ph为4.0～6.0。

7、优选的，所述酪蛋白发酵液与亮氨酸氨基肽酶的重量比为500～1500:1。

8、优选的，所述酶解的ph为6.0～8.0，温度为30～45℃，时间为2～4h。

9、优选的，所述plastein反应前，还包括将酪蛋白水解液浓缩，所述浓缩后的固形物含量为40％～60％。

10、优选的，所述plastein反应时，还包括向所述酪蛋白水解液中添加氨基酸，所述氨基酸的添加量为1.0％～4.5％，所述氨基酸包括丙氨酸、赖氨酸、脯氨酸和甘氨酸中的一种或几种。

11、优选的，所述plastein反应的ph为6.5～8.0，温度为30～50℃，时间为2～8h。

12、本发明提供了利用上述的方法制得的降血糖活性肽。

13、本发明还提供了上述降血糖活性肽在制备发酵食品中的应用。

14、有益效果：本发明提供了一种降血糖活性肽的制备方法，利用复合乳酸菌发酵产生的特异性蛋白酶和肽酶，水解酪蛋白生成特定肽段，进一步通过亮氨酸氨基肽酶把这些肽段n-末端的亮氨酸游离出来，富集得到更多目标肽。再通过plastein反应修饰将氨基酸合成到新肽链中，得到活性更高的降糖肽。

15、本发明提供了利用上述的制备方法制得的降血糖活性肽，利用复合乳酸菌发酵产生的蛋白酶、肽酶联合外源亮氨酸氨基肽酶酶解酪蛋白，在肽链内切酶和外切酶的联合作用下，将酪蛋白首先分解为大分子肽，再进一步分解为一系列小肽，获得蛋白水解程度更高，肽含量更高的肽段。

16、本发明还利用上述降血糖活性肽制备发酵食品，制得的发酵乳的α-葡萄糖苷酶抑制活性可达到15.78～20.14％，二肽基肽酶(dpp-iv酶)抑制活性可达到54.45～71.44％。

17、本发明将亮氨酸氨基肽酶作为肽链外切酶，使肽链n末端的亮氨酸游离出来，得到更多的目标肽。是本专利的重要发明点，这样能提高降血糖活性肽的活性。

18、本发明提供了利用上述的制备方法制得的降血糖活性肽，在蛋白酶存在条件下，plastein反应包含的缩合作用或转肽作用可将添加的外源氨基酸合成到新肽链中，进而产生原水解物中不存在的新肽序列，降糖效果更好。

19、本发明还提供了上述降血糖活性肽在制备混合发酵制品中的应用，所述混合发酵制品优选包括混合发酵乳，利用本发明的降血糖活性肽制备得到的混合发酵食品具有较好的降血糖能力。

技术特征：

1.一种降血糖活性肽的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：

2.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述复合乳酸菌包括：瑞士乳杆菌和植物乳杆菌；所述瑞士乳杆菌和植物乳杆菌的活菌菌落数比为1~6:1。

3.根据权利要求1或2所述的制备方法，其特征在于，所述发酵温度为30~50℃，发酵至酪蛋白水溶液的ph为4.0~6.0。

4.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述酪蛋白发酵液与亮氨酸氨基肽酶的重量比为500~1500:1。

5.根据权利要求1或4所述的制备方法，其特征在于，所述酶解的ph为6.0~8.0，温度为30~45℃，时间为2~4h。

6.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述plastein反应前，还包括将酪蛋白水解液浓缩，所述浓缩后的固形物含量为40%~60%。

7.根据权利要求6所述的制备方法，其特征在于，所述plastein反应时，还包括向所述酪蛋白水解浓缩液中添加氨基酸，所述氨基酸的添加量为1.0%~4.5%，所述氨基酸包括丙氨酸、赖氨酸、脯氨酸和甘氨酸中的一种或几种。

8.根据权利要求1或6或7所述的制备方法，其特征在于，所述plastein反应的ph为6.5~8.0，温度为30~50℃，时间为2~8h。

9.利用权利要求1~8任一项所述的制备方法制得降血糖活性肽。

10.权利要求9所述降血糖活性肽在制备发酵食品中的应用。

技术总结
本发明属于发酵技术领域，具体涉及一种降血糖活性肽的制备方法和应用，包括以下步骤：将酪蛋白水溶液与复合乳酸菌混合发酵，得到酪蛋白发酵液；将酪蛋白发酵液与亮氨酸氨基肽酶混合酶解，得到酪蛋白水解液；将酪蛋白水解液进行Plastein反应，得到降血糖活性肽。本发明利用瑞士乳杆菌和植物乳杆菌产生的特异性蛋白酶和肽酶，水解酪蛋白生成特定肽段，进一步通过亮氨酸氨基肽酶把这些肽段N‑末端的亮氨酸游离出来，富集得到更多目标肽。再通过Plastein反应修饰将氨基酸合成到新肽链中，得到活性更高的降糖肽。

技术研发人员：李思宁,唐善虎
受保护的技术使用者：西南民族大学
技术研发日：
技术公布日：2024/1/15