基因工程菌生产二羟基丙酮和/或1，3丙二醇的方法、用于生产的基因工程菌及应用与流程

本发明属于生物工程，具体涉及克雷伯氏基因工程菌、大肠杆菌工程菌甘油法生产二羟基丙酮及1，3丙二醇的生产方法、用于生产的基因工程菌及应用。

背景技术：

1、二羟基丙酮(dha，二羟丙酮)和1，3丙二醇(1，3-pdo)是非常重要的化工原料，二羟基丙酮和1，3丙二醇广泛应用在化妆品工业、在医药中间体、化工领域中，二羟基丙酮和1，3丙二醇化学性质活泼，广泛参与诸如聚合、缩合等各种化学反应，是一种重要的化学合成的中间体，也是一个重要的多功能试剂。化学合成法制备二羟基丙酮和1，3丙二醇存在原料成本高、反应条件苛刻、设备要求高、产品收率低以及污染环境等问题，其应用受到一定限制。生物转化法的优势在于反应条件温和、反应专一性强、环境污染小、底物利用率高。

2、随着生物柴油的快速发展，其副产物甘油产量猛增，导致甘油过剩，急需寻求甘油的新用途、加快其下游产品的开发。但因甘油成本略高于葡萄糖，因此同时考虑利用葡萄糖生产二羟基丙酮和1，3丙二醇，探究甘油或葡萄糖转化生成二羟基丙酮和1，3丙二醇，其中所涉及到的酶及相关微生物类群，生物法生产二羟基丙酮和1，3丙二醇的机理是微生物产生的甘油脱氢酶对甘油2位羟基进行脱氢反应生成酮基，生成二羟基丙酮。生物法生产二轻基丙酮具有显著的优点：产物浓度高，甘油转化率高，生产成本低。目前用于二轻基丙酮工业化生产的微生物菌种主要有葡糖杆菌属(gluconobacter)、醋杆菌属(acetobacter)、芽抱杆菌属(bacillus)、假单孢菌属(pseudomonas)、曲霉属(aspergillus)、青霉属(penicillium)、根霉属(rhizopus)等。其中氧化葡糖杆菌(gluconobacteloxydans)的研究报道最多，该菌种的生产性能稳定、产量高，是目前用于工业化生产的主要菌株。而目前研究的产1,3-丙二醇的发酵菌研究较多的为克雷伯是肺炎杆菌，利用肺炎克雷伯氏杆菌以甘油为底物生成1,3-丙二醇。在肺炎克雷伯氏杆菌代谢路径存在甘油脱氢酶但是其作用不是很强。而在氧化葡萄糖杆菌中存在的甘油脱氢酶表现出较强的活性。

3、在以往的研究中通过氧化葡萄糖酸杆菌(gluconobacter oxydans)、木醋杆菌(acetobacter xylinum)、大肠杆菌(escherichia coli)、产气克雷伯氏菌(klebsiellaaerogenes)、弗托氏葡萄糖酸杆菌(gluconobacter frateurii)等天然菌以甘油为底物发酵生产二羟基丙酮，然而还没有使用肺炎克雷伯氏菌(klebsiella pneumoniae)发酵生产二羟基丙酮和1,3-丙二醇的报道。

技术实现思路

1、为了可以同时生产二羟基丙酮和1,3-丙二醇，利用生物工程技术构建肺炎克雷伯氏工程菌以及大肠杆菌工程菌。具体技术路线如下：

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3、

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7、为了解决上述技术问题，本发明提供一种基因工程菌表达生产二羟基丙酮及1，3丙二醇的方法，所述方法包括如下步骤：(1)克隆重组表达载体，表达载体克隆重组了甘油脱氢酶基因glda；优选地，所述甘油脱氢酶基因glda源自氧化葡萄糖酸杆菌；更优选地，所述表达载体为pucm-t、pet-32a(+)、pgem-32f(+)、pse380；更优选地，所述甘油脱氢酶基因glda如seq id no.1或其简并序列所示；更优选地，重组表达载体为pet-glda；进一步优选地，重组表达载体pet-glda的全长序列如seq id no.8所示；

8、和/或，克隆重组表达载体，表达载体克隆重组了3-磷酸甘油脱氢酶基因gpd1和3-磷酸甘油酯酶基因gpp2；优选地，所述3-磷酸甘油脱氢酶基因gpd1和3-磷酸甘油酯酶基因gpp2源自酿酒酵母；更优选地，所述表达载体为pucm-t、pet-32a(+)、pgem-32f(+)、pse380；更优选地，所述3-磷酸甘油脱氢酶基因gpd1如seq id no.2或其简并序列所示，所述3-磷酸甘油酯酶基因gpp2如seq id no.3或其简并序列所示；更优选地，重组表达载体为pse-gpd1-gpp2；进一步优选地，重组表达载体为pse-gpd1-gpp2的全长序列如seq id no.9所示；

9、和/或克隆重组表达载体，表达载体克隆重组了甘油脱水酶dhab1基因和1,3-丙二醇氧化还原酶dhat1基因；优选地，所述甘油脱水酶dhab1基因和1,3-丙二醇氧化还原酶dhat1基因源自肺炎克雷伯氏杆菌；更优选地，所述表达载体为pucm-t、pet-32a(+)、pgem-32f(+)、pse380；更优选地，所述甘油脱水酶dhab1基因如seq id no.4或其简并序列所示，所述1,3-丙二醇氧化还原酶dhat1基因如seq id no.5或其简并序列所示；更优选地，重组表达载体为pse-dhab1-dhat1；进一步优选地，重组表达载体pse-dhab1-dhat1全长序列如seq id no.10所示；

10、和/或克隆重组表达载体，表达载体克隆重组了甘油脱水酶基因dhab2和1,3-丙二醇氧化还原酶基因dhat2；优选地，所述甘油脱水酶基因dhab2和1,3-丙二醇氧化还原酶基因dhat2源自肺炎克雷伯氏杆菌as1.1736；更优选地，所述表达载体为pucm-t、pet-32a(+)、pgem-32f(+)、pse380；更优选地，所述甘油脱水酶基因dhab2如seq id no.6或其简并序列所示，所述1,3-丙二醇氧化还原酶基因dhat2如seq id no.7或其简并序列所示；更优选地，重组表达载体为pse-dhab2-dhat2；进一步优选地，重组表达载体pse-dhab2-dhat2的全长序列如seq id no.11所示；(2)转化重组表达载体获得工程菌，将克隆重组了甘油脱氢酶基因glda的表达载体转化到肺炎克雷伯菌感受态细胞，获得肺炎克雷伯菌工程菌；优选地，转化方式为电转化；

11、或将克隆重组了3-磷酸甘油脱氢酶基因gpd1和3-磷酸甘油酯酶基因gpp2的表达载体、克隆重组了甘油脱水酶dhab1基因和1,3-丙二醇氧化还原酶dhat1基因的表达载体、克隆重组了甘油脱氢酶基因glda的表达载体转化到大肠杆菌受态细胞，获得大肠杆菌工程菌；优选地，转化方式为电转化；

12、或将克隆重组了3-磷酸甘油脱氢酶基因gpd1和3-磷酸甘油酯酶基因gpp2的表达载体、克隆重组了甘油脱水酶dhab2基因和1,3-丙二醇氧化还原酶dhat2基因的表达载体转化到大肠杆菌受态细胞，获得大肠杆菌工程菌；优选地，转化方式为电转化；

13、或克隆重组了3-磷酸甘油脱氢酶基因gpd1和3-磷酸甘油酯酶基因gpp2的表达载体、克隆重组了甘油脱氢酶基因glda表达载体转化到大肠杆菌受态细胞，获得大肠杆菌工程菌；优选地，转化方式为电转化；

14、或将克隆重组了3-磷酸甘油脱氢酶基因gpd1和3-磷酸甘油酯酶基因gpp2的表达载体、克隆重组了甘油脱水酶dhab2基因和1,3-丙二醇氧化还原酶dhat2基因的表达载体转化到大肠杆菌受态细胞，获得大肠杆菌工程菌；优选地，转化方式为电转化；

15、其中，肺炎克雷伯菌和大肠杆菌为敲除2,3-丁二醇脱氢酶基因或2,3-丁二醇脱氢酶基因失活；

16、(3)将步骤(2)获得的工程菌发酵培养，表达生产二羟基丙酮及1，3丙二醇。

17、同一种氨基酸具有两个或更多个密码子现象称为密码子的简并性，简并序列是指就叫简并序列。甘油脱氢酶基因glda核苷酸序列可以具有与seq id no.1或其简并序列大于等于75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％、100％的同源性。

18、3-磷酸甘油脱氢酶基因gpd1核苷酸序列可以具有与seq id no.2或其简并序列大于等于75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％、100％的同源性。

19、3-磷酸甘油酯酶基因gpp2核苷酸序列可以具有与seq id no.3或其简并序列大于等于75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％、100％的同源性。

20、甘油脱水酶dhab1基因核苷酸序列可以具有与seq id no.4或其简并序列大于等于75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％、100％的同源性。

21、1,3-丙二醇氧化还原酶dhat1基因核苷酸序列可以具有与seq id no.5或其简并序列大于等于75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％、100％的同源性。

22、甘油脱水酶基因dhab2核苷酸序列可以具有与seq id no.6或其简并序列大于等于75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％、100％的同源性。

23、1,3-丙二醇氧化还原酶基因dhat2核苷酸序列可以具有与seq id no.7或其简并序列大于等于75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％、100％的同源性。

24、作为本发明的某些实施方案，步骤(3)中发酵培养所述肺炎克雷伯菌工程菌的种子培养液按照10％(v/v)接种到发酵培养基中，培养条件为甘油20-50g/l，在30-40℃、在常压条件下，持续通入氮气0.05-0.15vm、搅拌转速200-300r/min，调节维持发酵液ph为6.5-7.5的条件下进行间歇发酵。甘油含量选自20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49、50g/l。

25、反应温度选自30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40℃。

26、氮气压强选自0.05、0.06、0.07、0.08、0.09、0.10、0.11、0.12、0.13、0.14、0.15vm。

27、搅拌转速选自200、210、220、230、240、250、260、270、280、290、300r/min。

28、发酵液ph选自6.5、6.6、6.7、6.8、6.9、7.0、7.1、7.2、7.3、7.4、7.5。

29、间歇发酵又称为分批发酵，是指发酵过程中营养物和菌种一次加人进行培养，直到结束放出，中间除了空气进人和尾气排出，与外部没有物料交换。

30、作为本发明的某些实施方案，所述肺炎克雷伯菌工程菌在种子培养基进行培养，制备种子培养液，所述种子培养基1000ml中包含甘油10-30g，kh2po4 1.0-1.5g，k2hpo4·7h2o 4-5g，(nh4)so4 2.0-2.5g，mgso4·7h2o 0.1-0.2g，caco3 2.0-3.0g，1mlfe2+溶液，1.0mlca2+溶液，酵母粉1-2g，2.0ml微量元素a溶液；

31、其中，所述微量元素a溶液包含有下列组分：饱和盐酸0.5-1.5ml/l，cucl2·2h2o20-30mg/l，zncl2 70-75mg/l，mncl2·4h2o 100-105mg/l，h3bo3 50-65mg/l，cacl2·6h2o180-220mg/l，nicl2·6h2o 25-30mg/l，namoo4·2h2o 25-35mg/l；

32、fe2+溶液：饱和盐酸4ml/l，feso4·7h2o 2-8g/l；

33、ca2+溶液：10-30g/l的cacl2。

34、作为本发明的某些实施方案，所述发酵培养基1000ml中包含：甘油30-50g、kh2po41-2g、(nh4)2so4 5-10g、mgcl2·6h2o 0.1-0.5g、cacl2 0.2-0.5g、柠檬酸0.3-0.5g、酵母粉1-2g、caco3 1-2g、5ml微量元素b；

35、其中，微量元素b溶液：zncl2 0.5-1.0g/l，mncl2·4h2o 0.1-0.2g/l，h3bo3 50-60mg/l，cucl2·2h20 0.3-0.5g/l，namoo4·2h2o 5-6mg/l，fecl2·4h2o 3-4g/l，cocl2·6h2o 0.3-0.5g/l，hcl 10-15ml/l。

36、作为本发明的某些实施方案，所述肺炎克雷伯菌工程菌在种子培养基进行培养，制备种子培养液，所述种子培养基1000ml中包含甘油20g，kh2po4 1.3g，k2hpo4·7h2o4.4454g，(nh4)so4 2.0g，mgso4·7h2o 0.2g，caco3 2.0g，1mlfe2+溶液，1mlca2+溶液，酵母粉1g，2.0ml微量元素a溶液；其中，所述微量元素a溶液包含有下列组分：饱和盐酸0.9ml/l，cucl2·2h2o 20mg/l，zncl2 70mg/l，mncl2·4h2o 100mg/l，h3bo3 60mg/l，cacl2·6h2o200mg/l，nicl2·6h2o 25mg/l，namoo4·2h2o 35mg/l；fe2+溶液含有饱和盐酸4ml/l，feso4·7h2o 5g/l；ca2+溶液含有20g/l的cacl2。

37、作为本发明的某些实施方案，所述发酵培养基1000ml中包含：甘油40g、kh2po41.36g、(nh4)2so4 6.61g、mgcl2·6h2o 0.26g、cacl2 0.29g、柠檬酸0.42g、酵母粉2g、caco32.0g、5ml微量元素b溶液；其中，所述微量元素b溶液：zncl2 0.68g/l，mncl2·4h2o 0.17g/l，h3bo3 60mg/l，cucl2·2h20 0.47g/l，namoo4·2h2o 5mg/l，fecl2·4h2o 3.97g/l，cocl2·6h2o 0.47g/l，hcl 10ml/l。

38、作为本发明的某些实施方案，所述步骤(3)中培养条件为甘油40g/l，37℃、氮气0.1vm、搅拌转速250r/min，调节维持发酵液ph为7.0。

39、作为本发明的某些实施方案，步骤(3)中发酵培养所述大肠杆菌工程菌的种子以1％的转接量转接到m9/sm培养基中，同时加入葡萄糖溶液，调节葡萄糖终浓度为1％w/w，在30℃培养到od600值1.2，调节培养温度为42℃，进行诱导发酵培养。

40、作为本发明的某些实施方案，在发酵培养中每隔6h取样一次，检测发酵产物1，3-pdo和二羟基丙酮的含量，同时每24h补加葡萄糖溶液，调节葡萄糖终浓度为1％w/w，根据1，3pdo和二羟基丙酮的含量随时增加naoh调整发酵液的ph值，ph控制在7.0，至发酵结束；优选地，发酵时间为54-60小时。

41、发酵时间选自54、55、56、57、58、59、60小时。

42、本发明还提供了一种肺炎克雷伯菌工程菌，所述肺炎克雷伯菌工程菌包含有克隆重组表达载体，表达载体克隆重组了甘油脱氢酶基因glda，肺炎克雷伯菌为敲除2,3-丁二醇脱氢酶基因或2,3-丁二醇脱氢酶基因失活。

43、优选地，所述甘油脱氢酶基因glda源自氧化葡萄糖酸杆菌。

44、更优选地，所述表达载体为pucm-t、pet-32a(+)、pgem-32f(+)、pse380。

45、更优选地，所述甘油脱氢酶基因glda如seq id no.1或其简并序列所示。

46、更优选地，重组表达载体为pet-glda。

47、进一步优选地，重组表达载体pet-glda的全长序列如seq id no.8所示。

48、本发明还提供了一种大肠杆菌工程菌dh5ɑ，所述大肠杆菌工程菌重组有克隆重组了3-磷酸甘油脱氢酶基因gpd1和3-磷酸甘油酯酶基因gpp2的表达载体、克隆重组了甘油脱水酶dhab1基因和1,3-丙二醇氧化还原酶dhat1基因的表达载体、以及克隆重组了甘油脱氢酶基因glda的表达载体，其中，大肠杆菌为敲除2,3-丁二醇脱氢酶基因或2,3-丁二醇脱氢酶基因失活。

49、优选地，所述3-磷酸甘油脱氢酶基因gpd1和3-磷酸甘油酯酶基因gpp2源自酿酒酵母；更优选地，所述3-磷酸甘油脱氢酶基因gpd1如seq id no.2或其简并序列所示，所述3-磷酸甘油酯酶基因gpp2如seq id no.3或其简并序列所示；更优选地，重组表达载体为pse-gpd1-gpp2；进一步优选地，重组表达载体为pse-gpd1-gpp2的全长序列如seq id no.9所示。

50、优选地，所述甘油脱水酶dhab1基因和1,3-丙二醇氧化还原酶dhat1基因源自肺炎克雷伯氏杆菌；更优选地，所述甘油脱水酶dhab1基因如seq id no.4或其简并序列所示，所述1,3-丙二醇氧化还原酶dhat1基因如seq id no.5或其简并序列所示；更优选地，重组表达载体为pse-dhab1-dhat1；进一步优选地，重组表达载体pse-dhab1-dhat1全长序列如seqid no.10所示。

51、优选地，所述甘油脱氢酶基因glda源自氧化葡萄糖酸杆菌；更优选地，所述甘油脱氢酶基因glda如seq id no.1或其简并序列所示；更优选地，重组表达载体为pet-glda；进一步优选地，重组表达载体pet-glda的全长序列如seq id no.8所示。

52、本发明还提供了一种大肠杆菌工程菌，所述大肠杆菌工程菌重组有克隆重组了3-磷酸甘油脱氢酶基因gpd1和3-磷酸甘油酯酶基因gpp2的表达载体、克隆重组了甘油脱水酶dhab2基因和1,3-丙二醇氧化还原酶dhat2基因的表达载体，大肠杆菌为敲除2,3-丁二醇脱氢酶基因或2,3-丁二醇脱氢酶基因失活。

53、优选地，所述3-磷酸甘油脱氢酶基因gpd1和3-磷酸甘油酯酶基因gpp2源自酿酒酵母；更优选地，所述3-磷酸甘油脱氢酶基因gpd1如seq id no.2或其简并序列所示，所述3-磷酸甘油酯酶基因gpp2如seq id no.3或其简并序列所示；更优选地，重组表达载体为pse-gpd1-gpp2；进一步优选地，重组表达载体为pse-gpd1-gpp2的全长序列如seq id no.9所示。

54、优选地，所述甘油脱水酶基因dhab2和1,3-丙二醇氧化还原酶基因dhat2源自肺炎克雷伯氏杆菌as1.1736；更优选地，所述甘油脱水酶基因dhab2如seq id no.6或其简并序列所示，所述1,3-丙二醇氧化还原酶基因dhat2如seq id no.7或其简并序列所示；更优选地，重组表达载体为pse-dhab2-dhat2；进一步优选地，重组表达载体pse-dhab2-dhat2的全长序列如seq id no.11所示。

55、优选地，大肠杆菌为dh5ɑ。

56、本发明还提供了一种大肠杆菌工程菌，所述大肠杆菌工程菌重组有克隆重组了3-磷酸甘油脱氢酶基因gpd1和3-磷酸甘油酯酶基因gpp2的表达载体、以及克隆重组了甘油脱氢酶基因glda表达载体，大肠杆菌为敲除2,3-丁二醇脱氢酶基因或2,3-丁二醇脱氢酶基因失活。

57、优选地，所述3-磷酸甘油脱氢酶基因gpd1和3-磷酸甘油酯酶基因gpp2源自酿酒酵母；更优选地，所述3-磷酸甘油脱氢酶基因gpd1如seq id no.2或其简并序列所示，所述3-磷酸甘油酯酶基因gpp2如seq id no.3或其简并序列所示；更优选地，重组表达载体为pse-gpd1-gpp2；进一步优选地，重组表达载体为pse-gpd1-gpp2的全长序列如seq id no.9所示。

58、优选地，所述甘油脱氢酶基因glda源自氧化葡萄糖酸杆菌；更优选地，所述甘油脱氢酶基因glda如seq id no.1或其简并序列所示；更优选地，重组表达载体为pet-glda；进一步优选地，重组表达载体pet-glda的全长序列如seq id no.8所示。

59、优选地，大肠杆菌为dh5ɑ。

60、本发明还提供了一种大肠杆菌工程菌，所述大肠杆菌工程菌重组有克隆重组了3-磷酸甘油脱氢酶基因gpd1和3-磷酸甘油酯酶基因gpp2的表达载体、克隆重组了甘油脱水酶dhab2基因和1,3-丙二醇氧化还原酶dhat2基因的表达载体，大肠杆菌为敲除2,3-丁二醇脱氢酶基因或2,3-丁二醇脱氢酶基因失活。

61、优选地，所述3-磷酸甘油脱氢酶基因gpd1和3-磷酸甘油酯酶基因gpp2源自酿酒酵母；更优选地，所述3-磷酸甘油脱氢酶基因gpd1如seq id no.2或其简并序列所示，所述3-磷酸甘油酯酶基因gpp2如seq id no.3或其简并序列所示；更优选地，重组表达载体为pse-gpd1-gpp2；进一步优选地，重组表达载体为pse-gpd1-gpp2的全长序列如seq id no.9所示。

62、优选地，所述甘油脱水酶基因dhab2和1,3-丙二醇氧化还原酶基因dhat2源自肺炎克雷伯氏杆菌as1.1736；更优选地，所述甘油脱水酶基因dhab2如seq id no.6或其简并序列所示，所述1,3-丙二醇氧化还原酶基因dhat2如seq id no.7或其简并序列所示；更优选地，重组表达载体为pse-dhab2-dhat2；进一步优选地，重组表达载体pse-dhab2-dhat2的全长序列如seq id no.11所示。

63、优选地，大肠杆菌为dh5ɑ。

64、本发明还提供了所述的肺炎克雷伯菌工程菌和所述的大肠杆菌工程菌在生产二羟基丙酮和/或及1，3丙二醇中的应用。

65、作为本发明的某些实施方案，所述应用为在同时生产二羟基丙酮和1，3丙二醇中的应用。

66、如上所述，本发明的，具有以下有益效果：

67、本技术使用肺炎克雷伯氏菌(klebsiella pneumoniae)发酵甘油生产二羟基丙酮和1,3-丙二醇。以通过此方法可以高产二羟基丙酮和1,3-丙二醇。且两种产物属于两种不同物质，利于后续的分离纯化，大大提高了底物的利用率。

68、微生物细胞以甘油为底物生物合成二羟基丙酮的过程是一个复杂的生化反应过程。利用生物法生产二羟基丙酮时，甘油脱氢酶是二羟基丙酮生物合成的关键酶。由于微生物细胞内的酶系十分复杂，细胞内各种代谢活动、细胞结构、细胞生理活性对甘油脱氢酶的催化效率会产生很大的影响。这些因素相互关联，相互影响，需要全方面认真考虑这些问题：

69、(1)底物抑制

70、高浓度的底物甘油会影响菌株生长和甘油转化率。本实验以肺炎克雷伯氏菌为基础研究菌株，对其进行基因改造，因肺炎克雷伯氏菌可以发酵产生1，3丙二醇，消耗了一部分底物甘油，侧面发生了抑制。

71、(2)溶氧限制

72、在以往的研究中使用氧化葡萄糖酸杆菌是一种专性好氧微生物，通过有氧呼吸获取能量。因此生物转化过程中，溶氧影响着菌体的最终生物量和代谢产物的终浓度。因其发酵过程需要通氧，增加了生产成本，而本实验使用肺炎克雷伯氏菌属于兼性厌氧细菌，在发酵过程中不需要通氧，减少了其生产成本。

73、(3)不同来源的克雷伯氏菌的甘油脱水酶基因和1,3-pdo氧化还原酶基因表达效果存在差异

74、在以往的研究实验中使用的克雷伯氏杆菌的甘油脱水酶基因和1,3-pdo氧化还原酶基因构建的大肠杆菌工程菌发酵产1,3-bdo的产率略低。本技术所构建的大肠杆菌工程菌产率明显高于以往实验。

75、即在本技术中通过设计优化技术路线，调节发酵培养条件和参数，实现了同时表达生产二羟基丙酮和1,3-丙二醇。

76、通过使用甘油作为碳源，同时实现在工程菌中大量表达二羟基丙酮和1,3-丙二醇，在后续的聚合实验中省去了一步反应，因此简化了后续的工艺流程。同时在同一个菌株同时生产两种产物，相互之间表达不受影响，都能获得高收率。