一种高含量女贞甙桂花标准活性物的制备工艺的制作方法

本发明涉及天然药物成分提取，具体涉及一种高含量女贞甙桂花标准活性物的制备工艺。

背景技术：

1、桂花(osmanthus fragrans(thunb.)lour.)生于岩岭之间，又称山桂、岩桂，属木犀科木犀属植物。全球木樨属植物共31种，中国有26种，其中21种为特有种，为该属植物的分布中心，是世界上最早栽培和应用桂花的国家。桂花是我国传统十大名花之一,在我国已经有2500多年的栽培历史。桂花品种繁多，全国大约有154个品种，分为4个品种群，即四季桂、银桂、金桂和丹桂。《中华本草》记载：桂花又名木犀花，为木犀科植物木犀osmanthusfragrans的花。9-10月开花时采收，拣去杂质，阴干，密闭储藏。桂花中富含100多种有效成分，功能性代表成分包括多酚、黄酮、萜类等。桂花味辛、性温,归肺、脾、肾经,具有温肺化饮、散寒止痛的功效,主治脘腹冷痛、寒疝腹痛、闭经痛经。

2、女贞甙是一种裂环烯醚萜类衍生物,含有酪醇单元、以及独特的开环环烯醚萜结构单元，具有一定的亲水性和亲脂性，溶于热水，以及一定比列乙醇水、甲醇、丙酮等有机溶剂。其化学结构和橄榄苦苷十分相似(橄榄苦苷含羟基酪醇结构单元，其余部分和女贞甙相同)，具有很高的药用价值。

3、唐敏等从日香桂花中利用95％乙醇水闪式提取得浸膏，并经石油醚、乙酸乙酯、正丁醇依次萃取，从乙酸乙酯浸膏中，并综合利用硅胶层析、聚酰胺柱层析、以及葡聚糖凝胶层析分离纯化得到女贞甙(华西药学杂志，2009，24(1)，010-013)。此方法纯化制备女贞甙，工艺繁琐，实用性较差，不适合规模制备女贞甙。

4、童俊等利用hplc-esi-qtof-ms液质联用技术定性分析金桂花，报道金桂花含有女贞甙成分(药学学报2023,58(3),750-759)。文献检索表明，桂花中女贞甙含量未见有报道。市场上女贞甙标准品价格昂贵，约8000-10000元/10mg,制备高纯度女贞甙难度大，成本高。

5、因此，开发新的以桂花为原料高效制备高含量女贞甙的标准活性物的方法具有必要性和应用前景。

技术实现思路

1、本发明的目的是提供一种高含量女贞甙桂花标准活性物的制备工艺，以桂花为原料，利用纯物理加工工艺，高效制备高含量女贞甙桂花标准活性物pheg60，以及pheg70。

2、为此，本发明采用如下技术方案：

3、本发明提供一种高含量女贞甙桂花标准活性物的制备工艺，包括以下步骤：

4、(1)取桂花干花，加入一定量的纯水，加热搅拌一定时间后，过滤，分别收集滤液1和滤渣1；向上述滤渣1中再次加入一定量的纯水，加热搅拌一定时间后，过滤，收集滤液2；

5、(2)合并滤液1和滤液2，再次过滤，去除细小颗粒，收集滤液，对滤液中组分进行分离；

6、所述分离方法为：将滤液经过大孔树脂梯度洗脱或超滤膜收集洗脱液或超滤膜截留液，分离过程中使用的溶剂为纯水或乙醇水溶剂；

7、(3)将步骤(2)收集的洗脱液或超滤膜截留液经膜分离进行浓缩，所述膜分离类型包括纳滤膜或ro膜，所获浓缩液进一步减压真空浓缩或冷冻干燥，获得提取物，所述提取物为桂花标准活性物苯乙醇总苷(pheg)。

8、所述桂花标准活性物苯乙醇总苷pheg60中女贞甙纯度≥50％,,苯乙醇总苷≥60％。

9、优选的，所述桂花银桂、金桂和丹桂中的任意一种或多种。

10、优选的，所述纯水的加入量按每1g桂花中加入纯水10-50ml；

11、进一步优选的，所述纯水的加入量按每1g桂花中加入纯水为15-30ml。

12、优选的，所述步骤(1)中两次纯水提取温度为70-100℃；

13、进一步优选的，所述步骤(1)中两次纯水提取温度为85-95℃；

14、更进一步优选的，所述步骤(1)中两次提取温度为90-95℃。

15、优选的，所述步骤(1)中第一次搅拌时间为30-180min；

16、进一步优选的，所述步骤(1)中第一次搅拌时间为60-90min；

17、和/或，所述步骤(1)中第二次搅拌时间为15-60min；

18、进一步优选的，所述步骤(1)中第二次搅拌时间为30-45min。

19、优选的，所述步骤(1)或步骤(2)中的过滤方式为滤网过滤、离心过滤或膜过滤。

20、进一步优选的，所述滤网目数为100-200目；和/或，所述离心过滤包括碟式离心、卧式离心和管式离心；和/或，所述膜过滤为陶瓷膜过滤。

21、优选的，所述步骤(2)中大孔树脂包括d101、hp-20、ab-8、xad1600、lsa-21、dm-301型号中的任意一种或多种。

22、优选的，所述步骤(2)的乙醇水溶液中乙醇的浓度为0-95％，梯度洗脱过程中先用低浓度乙醇水溶液洗脱，再用高浓度乙醇水溶液洗脱，所述乙醇水溶液梯度洗脱次数为1-5次；

23、更进一步优选的，所述乙醇水溶液中乙醇的浓度递增梯度可以是0、10％、20％、30％、40％、50％、60％、70％、80％、90％、95％。

24、示例性地，先经30％-40％乙醇水洗脱2-3个柱体积后，再用60％-70％乙醇水洗脱1-2个柱体积。

25、优选的，所述步骤(2)中超滤膜分离的方法为：将滤液经截留分子量10000道尔顿超滤膜过滤，过滤液再经300道尔顿超滤膜过滤，收集超滤膜截留液。

26、优选地，所述步骤(3)中ro膜浓缩方法进一步为：ro膜浓缩至固含物为20-30％，在0-4℃冷冻过夜，冷冻液离心过滤，离心沉淀物经真空干燥或冷冻干燥，获得提取物桂花标准活性物苯乙醇总苷pheg70，其中女贞甙纯度≥60％,苯乙醇总苷≥70％。

27、优选的，还进一步包括纯化步骤，所述纯化的具体步骤为：所述纯化的方法具体为：将所述桂花标准提取物苯乙醇总苷pheg溶于95％乙醇水溶液中，过凝胶层析柱，并用95％乙醇水洗脱，收集富含女贞甙洗脱液，减压真空浓缩，获得提取物；所述提取物为高纯度的女贞甙。

28、进一步优选的，所述凝胶层析柱为sephedex lh-20凝胶层析柱。

29、与现有技术相比，本发明的有益效果：

30、本发明提供的制备工艺以桂花为原料，我国桂花品种繁多，原料易获取。通过本发明的制备工艺可以获得高含量女贞甙桂花标准活性物，经hplc检测，苯乙醇苷总和pheg60(毛蕊花糖苷、异毛蕊花糖苷、10-羟基女贞甙和女贞甙)≥60％，其中女贞甙含量≥50％；pheg70，女贞甙≥60％，苯乙醇总苷≥70％。采用本发明制备工艺获得的苯乙醇总苷进一步纯化，可以获得高纯度的女贞甙。本发明的制备工艺主要利用纯水提取，使用的有机溶剂仅涉及食用酒精(乙醇)，综合利用陶瓷膜、纳滤膜、超滤膜等现代膜设备，以及离心、冷冻干燥等纯物理工艺。因此，本发明的制备工艺更加绿色环保，安全性高，大大降低生产成本，容易实现规模化生产，具有非常好的应用前景。