一种平沙绿僵菌及其应用的制作方法

本发明涉及微生物，具体而言，涉及一种平沙绿僵菌及其应用。

背景技术：

1、绿僵菌(metarhizium)是一类重要的虫生真菌，约有200多种害虫能被这种真菌感染致死。绿僵菌的孢子可以附着在害虫表皮，穿透表皮入侵到害虫体内，利用害虫营养生长繁殖并分泌毒素直至害虫死亡。害虫死亡后的尸体又可以释放新的孢子，经传播感染其他害虫。绿僵菌属目前在全世界范围内拥有约30个物种，不同的绿僵菌属物种能侵染致死的害虫的范围不同，毒性也有差异。目前研究最多并且已经在多个地区注册的绿僵菌产品大多为金龟子绿僵菌(metarhizium anisopliae)。此外也有报道黄绿绿僵菌(metarhiziumflavoviride)杀烟粉虱，蝗绿僵菌(metarhizium acridum)杀蝗虫的报道。平沙绿僵菌是在1986年在广东省发现的绿僵菌属新物种，分离自甘蔗金龟子(alissonotum sp.)幼虫体。其区别于其他绿僵菌种的特点是菌落颜色始终不变黑，分生孢子两端对称，分子孢子链连接点在同一中心轴上。

2、东亚飞蝗(locusta migratoria manilensis(meyen))直翅目，蝗科，迁飞性杂食性害虫，是导致我国蝗灾发生的首要害虫。目前，蝗虫的主要控制手段是化学防治，化学农药大量长期施用已经造成蝗区严重的环境污染，使蝗区生态平衡受到破坏,蝗虫灾害的发生与治理进入恶性循环。因此，使用环境友好的生物农药替代化学农药将成为今后控制蝗虫的重要发展方向。杀虫真菌具有资源丰富、安全、不杀伤非目标生物、可持续控制、害虫不易产生抗药性等优点。杀蝗绿僵菌生物农药作为蝗虫防治中最重要的可持续的生物防治手段，已被联合国粮农组织(fao)推荐为环保产品推广应用，但目前仅有金龟子绿僵菌一种生物药剂。

3、现有技术中报道的绿僵菌多数用于林间害虫防治，如金针虫。

4、已经报道的通过室内分离得到的具有毒力的绿僵菌菌株很多，但是在田间实际应用的防治效果很差，致使能通过登记的绿僵菌商品制剂屈指可数，且产品集中在金龟子绿僵菌，对于其他绿僵菌，能够真正大面积推广的，且应用于田间害虫并且具有良好防效的绿僵菌商品制剂更为罕见。田间环境复杂，造成绿僵菌防效低且不稳定；

5、报道的平沙绿僵菌njmp2103，1×105孢子/ml浓度的孢子悬浮液处理褐飞虱，在1×104孢子/ml,1×105孢子/ml浓度,1×106孢子/ml浓度之间的防效无显著性差异，且浓度越高呈现防效下降的趋势，在第六天仅达到60％的校正死亡率(褐飞虱生防真菌平沙绿僵菌和球孢白僵菌的筛选与评价，褚夫华，万方硕士论文数据库)。

6、此外，如果需要大规模用于田间，需要产孢快且产孢量大的特定菌株；而已经报道的平沙绿僵菌菌株30°下培养48h孢子萌发率最高仅仅达到48％(一株平沙绿僵菌的鉴定及生防应用潜力评价，杨帆等)；而wp08菌株在sda培养基上产孢量为0,在ppda培养基上第14天为2.48±0.36×107孢子/cm2；pda培养基上第14天为1.72±1.128×107孢子/cm2(一株绿僵菌的鉴定及其生物学特性研究，张亚波等)。

7、有鉴于此，特提出本发明。

技术实现思路

1、本发明的一个方面，涉及平沙绿僵菌(metarhizium pinghaense)mn117439或其变体或其后代，所述平沙绿僵菌mn117439保藏于广东省微生物菌种保藏中心，保藏编号为gdmcc no:61333，保藏时间为2020年12月1日，保藏地址：广州市先烈中路100号大院59号楼5楼。

2、所述平沙绿僵菌在sday培养基28℃培养，5天菌落直径可达2.67cm，10天5.12cm，15天6.65cm。菌落初期白色，质地绒毛状，成熟时产生橄榄绿色的分生孢子。最适生长温度20～30℃。

3、优选地，所述变体或后代与所述平沙绿僵菌mn117439具有相似或相同的功能。

4、优选地，所述平沙绿僵菌mn117439的变体或后代与所述平沙绿僵菌mn117439具有相似或相同的生理生化特性。

5、优选地，所述平沙绿僵菌mn117439具有选自下列的一项或多项功能：

6、(1)防治植物虫害；

7、(2)促进植物生长。

8、优选地，所述植物虫害为鳞翅目害虫、半翅目害虫、双翅目害虫、直翅目害虫、鞘翅目害虫或蛛形纲害虫中的至少一种引起的植物虫害。

9、优选地，所述植物虫害为稻飞虱、草地贪夜蛾、甜菜夜蛾、二化螟、三化螟、小菜蛾、茶尺蠖、飞虱、粉虱、蚜虫、叶蝉、柑橘木虱、黑腹果蝇、家蝇、柑橘小实蝇、蚊、东亚飞蝗、二斑叶螨或柑橘全爪螨中的至少一种引起的植物虫害。

10、本发明的另一个方面，还涉及一种组合物，其包含所述平沙绿僵菌mn117439或其变体或其后代；

11、优选地，所述组合物还包含一种或多种另外的生物防治剂，一种或多种化学药物，或其任意组合；

12、优选地，所述组合物还包含农业上或园艺上可接受的稀释剂，填充剂、溶剂、自发性促进剂、载体、乳化剂、分散剂、防腐剂、防冻剂、增稠剂、佐剂，或其任意组合；

13、优选地，所述另外的生物防治剂选自细菌、真菌、病毒、昆虫或线虫中的至少一种；

14、优选地，所述化学药物选自除草剂、杀虫剂、抗菌剂、抗病毒剂、植物生长调节剂、抗生素或肥料中的至少一种。

15、本发明的另一个方面，还涉及微生物菌剂，其包括所述平沙绿僵菌mn117439或其变体或其后代，所述平沙绿僵菌mn117439或其变体或其后代的孢子，和/或平沙绿僵菌mn117439或其变体或其后代的代谢产物。

16、本发明的另一个方面，还涉及杀虫剂，其包括所述平沙绿僵菌mn117439或其变体或其后代，或所述组合物，或所述微生物菌剂；

17、优选地，所述平沙绿僵菌mn117439 14d产孢量为0.66×108孢子/cm2；

18、优选地，所述平沙绿僵菌mn117439 24小时孢子的萌发率可达94％以上；

19、优选地，所述杀虫剂还包括农药上可接受的农药助剂；

20、优选地，所述杀虫剂被配制成可润湿的粉末、喷雾干燥的配制物或稳定的配制物；

21、优选地，所述杀虫剂防治害虫的种类包括鳞翅目害虫、半翅目害虫、双翅目害虫、直翅目害虫、鞘翅目害虫或蛛形纲害虫中的至少一种；

22、优选地，所述杀虫剂防治害虫的种类包括稻飞虱、草地贪夜蛾、甜菜夜蛾、二化螟、三化螟、小菜蛾、茶尺蠖、飞虱、粉虱、蚜虫、叶蝉、柑橘木虱、黑腹果蝇、家蝇、柑橘小实蝇、蚊、东亚飞蝗、二斑叶螨或柑橘全爪螨中的至少一种；

23、优选地，所述平沙绿僵菌对蝗虫的致死中时lt50为0.132d。

24、优选地，所述植物包括玉米、大豆、稻子、小麦中的至少一种。

25、本发明的另一个方面，还涉及促生剂，其包括所述平沙绿僵菌mn117439或其变体或其后代，或所述组合物，或所述微生物菌剂。

26、本发明的另一个方面，还涉及一种防治植物虫害的方法，将所述杀虫剂施用于植物、植物组织或植物器官。

27、本发明的另一个方面，还涉及一种植物促生方法，使用所述的促生剂对植物进行促生。

28、所述植物包括但不限于玉米、大豆、稻子和小麦。

29、本发明的另一个方面，还涉及所述平沙绿僵菌mn117439或其变体或其后代，或所述组合物，或所述微生物菌剂或所述杀虫剂在害虫防治中的应用。

30、本发明的另一个方面，还涉及所述平沙绿僵菌mn117439或其变体或其后代，或所述组合物，或所述微生物菌剂或所述杀虫剂在植物促生中的应用。

31、与现有技术相比，本发明的有益效果为：

32、(1)本发明提供的平沙绿僵菌mn117439，营养要求简单，培养方法简单，生长迅速，产孢快且产孢能力强。

33、(2)本发明提供的平沙绿僵菌mn117439，对蝗虫等害虫具有高致病力，对东亚飞蝗3龄蝗蝻杀虫毒力强，室内毒力测定发现，在1×108孢子/ml浓度下，第一天对蝗虫的校正致死率达到82.22％；致死中时lt50为0.132d天95％致死浓度为1.05*106孢子/ml；在1×108孢子/ml浓度下，6d时绿僵菌对蝗虫的累计校正致死率为100％，致死中时(lt50)为0.132d，死亡蝗虫回接僵虫率为97％，利用该菌株能有效地控制蝗虫的种群数量；该菌株且无毒无污染，不会破坏生态、不易产生抗药性、对非靶标生物无害，可广泛蝗虫的防治中。

34、(3)本发明提供的平沙绿僵菌mn117439，可用于植物的促生，具有较好的植物促生效果。

35、(4)本发明筛选的绿僵菌mn117439，产孢快且产孢量大，能大规模用于田间稻飞虱的防治，在田间应用时具有良好防治效果且稳定防效的平沙绿僵菌。