一种用超高压制备活的不可培养细菌的方法

本发明涉及食品和生物医药，尤其涉及一种制备活的不可培养状态的细菌的方法。

背景技术：

1、细菌活的非可培养（viable but nonculturable,vbnc）状态、又称活的不可培养状态，是细菌在不良环境下的一种特殊形式，是指当细菌处于不良环境条件下，细胞会缩成球形，用常规方法培养并不能生长繁殖，但在适当的条件下仍然能复苏并具有生物活性、毒性或致病性的一种特殊生理状态。虽然活的非可培养状态细菌仍然具有代谢活性，但在非选择性培养基上无法生长并形成菌落，因此常规细菌检测方法无法检测到活的非可培养状态细菌的存在，这样会低估检测样品中细菌的数量，使其成为逃避检测的“隐形传染源”，给人们带来安全隐患。因此，研究有关活的非可培养状态细菌的特征及形成机制等方面对有效杀灭活的非可培养状态细菌至关重要。但目前需要很长时间才能获得活的非可培养状态细菌，从而限制了对其研究的进度。

2、因此，亟需开发一种快速制备活的非可培养状态细菌的方法。

技术实现思路

1、本发明旨在至少在一定程度上解决现有技术中存在的技术问题至少之一。为此，本发明提供了一种制备活的不可培养细菌的方法，该方法采用超高压可快速制备得到活的不可培养细菌，为后续有关活的不可培养状态细菌的研究提供基础。

2、本发明是基于发明人的下列发现而完成的：

3、超高压主要作用为破坏细菌细胞膜，而活的不可培养状态的细菌（简称活的不可培养细菌）的形成条件是拥有完整的细胞膜，因此，实现用超高压诱导活的不可培养细菌形成具有巨大困难。

4、然而，本发明的发明人意外发现，在较温和的超高压处理条件下，可实现将正常状态下的细菌诱导为活的不可培养细菌。由此，本发明的方法可制备得到活的不可培养状态细菌，且该方法具有制备时间短等优点，可为后续有关活的不可培养状态细菌的研究提供基础。

5、在本发明的第一方面，本发明提出了一种制备活的不可培养状态的细菌的方法。根据本发明的实施例，所述方法包括：将目的细菌进行超高压处理，以便得到所述活的不可培养状态的细菌。本发明的方法可制备得到活的不可培养状态细菌，且该方法具有制备时间短等优点，可为后续有关活的不可培养状态细菌的研究提供基础。

6、根据本发明的实施例，所述超高压处理是在200-600mpa条件下进行的。

7、根据本发明的实施例，所述超高压处理的温度为4℃-37℃，所述超高压处理的时间为1-40min。

8、根据本发明的实施例，所述超高压处理是在200-500mpa条件下进行的。

9、根据本发明的实施例，所述超高压处理是在200-400mpa、20~30℃条件下进行5~20min。

10、根据本发明的实施例，所述超高压处理之前，将所述目的细菌进行预培养处理，得到处于对数期或稳定期的细菌，所述超高压处理之前、所述预培养处理之后，将预培养处理产物进行离心处理，所述离心处理是在5000×g~8000×g条件下进行的。

11、根据本发明的实施例，所述超高压处理之前、所述离心处理之后，将离心处理沉淀物进行清洗处理，所述清洗处理是采用生理盐水或者pbs溶液进行的，所述生理盐水中的nacl在所述生理盐水中的质量百分含量为0.85%。

12、根据本发明的实施例，所述目的细菌为处于对数期或稳定期的细菌。

13、根据本发明的实施例，所述目的细菌选自大肠杆菌、金黄色葡萄球菌和解淀粉芽孢杆菌中的至少之一。

14、在本发明的第二方面，本发明提出了一种活的不可培养状态的细菌。根据本发明的实施例，所述活的不可培养状态的细菌是依据本发明的第一方面所述的方法制备的。本发明的活的非可培养状态细菌，可为后续有关活的不可培养状态细菌的研究提供基础。

15、本发明的附加方面和优点将在下面的描述中部分给出，部分将从下面的描述中变得明显，或通过本发明的实践了解到。

技术特征：

1.一种制备活的不可培养状态的细菌的方法，其特征在于，包括：

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述超高压处理是在200-600mpa条件下进行的。

3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述超高压处理的温度为4℃-37℃，所述超高压处理的时间为1-40min。

4.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述超高压处理是在200-500mpa条件下进行的。

5.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述超高压处理是在200-400mpa、20~30℃条件下进行5~20min。

6.根据权利要求1-5中任一项所述的方法，其特征在于，所述超高压处理之前，将所述目的细菌进行预培养处理，得到处于对数期或稳定期的细菌；

7.根据权利要求6所述的方法，其特征在于，所述超高压处理之前、所述离心处理之后，将离心处理沉淀物进行清洗处理；

8.根据权利要求1-5任一项所述的方法，其特征在于，所述目的细菌为处于对数期或稳定期的细菌。

9.根据权利要求1-5任一项所述的方法，其特征在于，所述目的细菌选自大肠杆菌、金黄色葡萄球菌和解淀粉芽孢杆菌中的至少之一。

10.一种活的不可培养状态的细菌，其特征在于，所述活的不可培养状态的细菌是依据权利要求1-9任一项所述的方法制得的。

技术总结
本发明公开了一种制备活的不可培养细菌的方法。所述方法包括：将目的细菌经超高压处理，以便获得所述活的不可培养状态的细菌；其中，所述超高压处理是在200‑600MPa条件下进行的，所述超高压处理的温度为4℃‑37℃，所述超高压处理的时间为1‑40min。本发明的方法处理细菌，可使细菌在5min之内快速进入活的非可培养状态，缩短了活的非可培养状态细菌的制备时间，提高了有关活的非可培养状态细菌的制备效率。

技术研发人员：廖小军,杨东,饶雷,王永涛,赵靓
受保护的技术使用者：中国农业大学
技术研发日：
技术公布日：2024/1/15