一种薰衣草外泌体的提取制备方法及其在皮肤抗衰抑炎抗糖化中的应用与流程

本发明属于天然产物提取和化妆品原料制备，具体涉及一种薰衣草外泌体的提取制备方法及其在皮肤抗衰抑炎抗糖化中的应用。

背景技术：

1、公开该背景技术部分的信息仅仅旨在增加对本发明的总体背景的理解，而不必然被视为承认或以任何形式暗示该信息构成已经成为本领域一般技术人员所公知的现有技术。

2、皮肤老化是内源性基因控制的程序性衰老与外源性多种因素共同作用的结果，其中紫外线是外源性因素中加速皮肤老化的重要因素之一。紫外线(ultraviolet,uv)照射可引起角质形成细胞释放过量活性氧自由基(reactive oxygen species,ros)，一方面会降低皮肤中抗氧化酶的活性，破坏机体自身的氧化还原系统的平衡，引起ros的堆积和脂质、蛋白质、dna等重要物质的氧化损伤；另一方面，紫外线还可直接作用于表皮中的角质形成细胞、朗格汉斯细胞和真皮中的成纤维细胞等的细胞膜受体，启动细胞中多种信号通路的传导，如通过激活ap-1信号通路，从而干扰胶原合成基因转录和抑制ii型转化生长因子β(transforming growth factor-β,tgf-β)受体表达，从而抑制i/iii型胶原合成，并增加基质金属蛋白酶的活性，加快胶原蛋白的破坏速度，造成胶原合成与降解速度的失衡，使皮肤松弛、下垂，出现细纹和皱纹等衰老现象。

3、炎症是人体对于各种刺激的一种防御反应，通常情况下，炎症是有益的，细胞通过释放多种细胞因子帮助机体消除外界刺激带来的损伤，但若炎症因子得不到及时地清除，就会对细胞造成不可逆的损伤。紫外线也是引起皮肤炎症反应的主要因素之一，紫外线可激活天然免疫中的重要信号分子toll样受体(toll-like receptors,tlrs)，引起炎症因子的释放，进而激活nf-κb信号通路，引起炎症因子的级联反应和免疫细胞的募集及迁移，以及血管的通透性增加、组织水肿等，最终表现为红、肿、热、痛、痒等皮肤炎症急性反应。

4、糖化反应又称非酶糖基化反应，是指还原糖/脂质过氧化物/氧化氨基酸的羰基等与蛋白质的氨基结合而发生的反应，经过一系列缩合重排形成最终的晚期糖基化终末产物(advanced glycation end products,ages)，包括羧甲基赖氨酸(cml)、羧乙基赖氨酸、戊二醛和甲基乙醛-赖氨酸二聚体和吡咯啉等。ages参与多种皮肤问题的产生，一方面过量的ages可与真皮中的弹性纤维、胶原蛋白发生交联反应，影响蛋白的正常功能及皮肤细胞粘附与生长过程，使皮肤黄化暗沉、松弛、弹性下降；另一方面ages可以与晚期糖基化终产物受体结合，激活nadph氧化酶的活性，从而增强氧化应激，导致ros大量产生，进而激活体内多种分子途径，导致机体抗氧化能力下降以及炎症反应的发生，进而引发多种皮肤问题。

5、植物外泌体是依靠特殊提取手段获得的一种水溶性极佳的植物活性成分，是一类直径为50～500nm的细胞外囊泡，具有完整膜结构，包含核酸、蛋白质、脂质、小分子化合物等多种活性小分子，主要负责细胞间的物质运输和信息传递。相较于传统植物水提物，植物外泌体由于粒径小，更容易渗透皮肤，且植物外泌体具有磷脂双分子层，与人体细胞膜成分相似，当植物外泌体接触靶细胞后，外泌体通过磷脂结构直接与靶细胞融合，活性物质作为信号分子直接进入细胞发挥作用，这是传统植物水提物无法比拟的；此外，植物外泌体的磷脂双分子层结构可有效保护内容物，使活性成分在极端条件下仍有较高的稳定性，保证活性成分在保存过程中不被分解，具有诸多优异性能。

6、薰衣草作为芳香植物，常被提取精油作为香薰、按摩油、香精、化妆品原料等使用，薰衣草精油具有抑炎、抗氧化、抑菌、促进伤口愈合、镇静、助眠等多种功效，但由于薰衣草精油主要成分为小分子萜烯类物质，渗透性极佳，且存在一些易致敏成分，可能会对敏感肌肤产生一定的刺激，此外，薰衣草精油具有特征性气味，人群接受度不高，其溶解性也使其在水剂中的应用受到了极大的限制。

7、在现有技术中，专利申请cn 115584337 a公布了一种植物外泌体的提取方法，主要通过加入络合剂及多次低温离心获得，但是这种方法提取的外泌体的纯度不高，沉淀中除了外泌体还会有很多包括脂蛋白在内的杂质，且沉淀法涉及多次离心、重悬操作，不利于自动化生产的进行，且只进行了外泌体对成纤维细胞存活率的影响实验。专利申请cn115135301 a所公布的薰衣草水提物包含小rna、糖、酚类化合物和有机酸等活性成分，具有保护皮肤免受外部侵害和氧化、对抗皮肤衰老迹象、增加光保护、使皮肤增亮、改善水合、改善屏障功能、使皮肤舒缓或改善夜间皮肤修复等功效，但该提取物非外泌体，且不包括抑炎、抗糖化功效。

技术实现思路

1、针对现有技术的不足，本发明提供一种薰衣草外泌体的提取制备方法及其在皮肤抗衰抑炎抗糖化中的应用。本发明通过优化提取制备工艺从而成功获得薰衣草外泌体产品，该提取制备方法简单，纯度高，节约能耗，同时易于放大生产。且经实验验证，制得的薰衣草外泌体能够起到抗皮肤老化、抑制皮肤炎症及抗糖化的作用，且效果优于薰衣草水提物和薰衣草精油。基于上述研究成果，从而完成本发明。

2、为实现上述技术目的，本发明采用的技术方案如下：

3、本发明的第一个方面，提供一种薰衣草外泌体的提取制备方法，所述制备方法包括将薰衣草原料通过酶解后进行固液分离获得上清液，再通过超滤浓缩富集得到膜浓缩富集液，再向其中加入稳定剂后低温干燥获得；其中，所述酶解具体为加入复合酶进行酶解，所述复合酶为胰蛋白酶、半纤维素酶、阿拉伯糖酶、麦芽糖酶、酸性纤维素酶、酸性果胶酶、碱性纤维素酶和碱性果胶酶中任意两种或多种的混合物；所述稳定剂为吐温-80、十二烷基硫酸钠、油酸钠、海藻糖、琥珀酸胆固醇酯、壳寡糖中的任意一种或多种。

4、本发明的第二个方面，提供上述提取制备方法获得薰衣草外泌体。经实验验证，本发明提取制备获得的薰衣草外泌体能够有效抑制由紫外线照射引起的细胞胶原含量的减少和基质金属蛋白酶含量、炎症因子水平的升高以及抑制糖化产物的产生，可以起到改善皮肤老化、抑制皮肤炎症及改善皮肤糖化的作用，且效果优于薰衣草水提物和薰衣草精油。

5、因此，本发明的第三个方面，提供上述薰衣草外泌体如下任意一种或多种中的应用：

6、(a)改善皮肤老化；

7、(b)抑制皮肤炎症；

8、(c)改善皮肤糖化；

9、(d)制备化妆品。

10、本发明的第四个方面，提供一种化妆品，所述化妆品其至少包含上述薰衣草外泌体。所述化妆品可作用于皮肤表面，起到改善皮肤老化、抑制皮肤炎症、改善糖化引起的皮肤泛黄的效果，因此，所述化妆品可以为护肤品。

11、上述一个或多个技术方案的有益技术效果：

12、1)相较于传统超滤离心法制备外泌体，上述技术方案在低温干燥过程中加入了稳定剂，可以起到稳定质膜、减少外泌体破裂的作用，提高外泌体产量；相较于常用的聚合物沉淀法制备外泌体，本发明制备外泌体的方法更简单，纯度高，同时节约了离心次数，节约能耗，更易于放大生产。

13、2)相较于薰衣草水提物，上述技术方案所制备的薰衣草外泌体的活性物质被包裹在双层脂质囊泡中，可以更好的保证活性物质的稳定性，更有利于活性物质的渗透吸收。

14、3)以薰衣草外泌体替代薰衣草精油应用于护肤品开发，在保证强功效的同时解决了薰衣草精油难以在水剂中应用、存在致敏风险及气味接受度低的问题，且薰衣草外泌体还具备了薰衣草精油所没有的抗糖化的功效。

15、4)上述技术方案所制备的薰衣草外泌体能够有效抑制由紫外线照射引起的细胞胶原含量的减少和基质金属蛋白酶含量、炎症因子水平的升高以及抑制糖化产物的产生，可以起到改善皮肤老化、抑制皮肤炎症及改善皮肤糖化的作用，且效果优于薰衣草水提物和薰衣草精油。