一种高活力胰蛋白酶的制备方法与流程

本发明涉及生物提取的，具体涉及一种高活力胰蛋白酶的制备方法。

背景技术：

1、胰蛋白酶是从牛、羊、猪的胰脏提取的一种丝氨酸蛋白水解酶，酶代码为ec3.4.4.4。胰蛋白酶原在胰腺中合成后分泌到十二指肠，并在十二指肠细胞分泌的肠激酶的作用下被切下六肽,而后成为有活性的胰蛋白酶。在脊椎动物中，胰蛋白酶不仅能作为消化起作用，而且还能限制分解糜蛋白酶原、羧肽酶原、磷脂酶原等其它酶的前体，起活化作用。胰蛋白酶是特异性最强的蛋白酶，是决定蛋白质的氨基酸排列不可缺少的工具。

2、目前，市场上销售的胰酶中胰蛋白酶活力一般在1000~3000u/g。低活力的胰蛋白酶在使用过程中，非常不便，因活力较低需要添加更多的使用量。活力低也说明其中杂质较多，可能会影响使用效果。在同样原料条件下，胰蛋白酶活力低，说明激活不够或遭到破坏。所以，生产高活力胰蛋白酶对于提高整体效益，减少原料浪费具有非常重要的意义。

技术实现思路

1、针对现有市场上销售的胰蛋白酶活力低问题等问题，本发明提供一种高活力胰蛋白酶的制备方法，本发明方法的胰蛋白酶生产周期短，收率高，活力高。

2、本发明的技术方案如下：

3、一种高活力胰蛋白酶的制备方法，包括以下步骤：

4、（1）磨制；（2）预处理；（3）纤维分离；（4）提取；（5）醇沉；（6）活化胰浆过滤；（7）制粒；（8）脱脂、脱水；（9）干燥；

5、其中，磨制步骤为：温度≤10℃的胰脏浆经两台串联胶体磨机研磨两遍后送入预处理罐，边搅拌边加入生姜蛋白酶、25%酒精溶液、乙酸乙酯、木薯淀粉，转速为20~50hz；其中，生姜蛋白酶、25%酒精溶液、乙酸乙酯、木薯淀粉的用量分别为胰脏浆质量的1%~2%、100%~200%、0.05%~0.1%和0.5%~1.5%。

6、进一步的，磨制步骤前，先将胰脏解冻并绞碎；

7、解冻步骤为：冻胰脏在无菌的解冻间解冻架上解冻至半化状态，保证胰脏中心温度≤0℃，解冻间温度为15~20℃，空气相对湿度≥80%rh，解冻间用臭氧进行消毒、解冻架等工器具用热碱水或二氧化氯消毒液消毒；

8、绞碎步骤为：将解冻后的胰脏在切绞一体机中进行切绞，切绞过程胰脏浆的温度≤10℃，采用热碱水或二氧化氯消毒液对切绞一体机进行消毒。

9、进一步的，预处理步骤为：调整物料ph值至10.5±0.5，升温3~5小时，使物料温度升至10~15℃，升温过程中间隙搅拌，每小时搅拌一次，每次5~15min。

10、进一步的，纤维分离步骤为：将预处理后的物料通过除浆机分离纤维，获得纤维组织和浆液，浆液中无纤维，然后将浆液打入提取罐。

11、进一步的，提取步骤为：提取罐搅拌转速为10~20hz，对提取罐内物料升温，使物料在8~10小时升至33~35℃，然后保温6~10小时。

12、进一步的，醇沉步骤为：将上步得到的滤液预冷至8~10℃，搅拌下加入12~15℃的乙醇，调整体系中酒精度至50°~65°后静置。

13、进一步的，活化胰浆过滤步骤为：将醇沉完成物料打入隔膜压滤机，隔膜压滤机透气量为10~15l/m2/s，隔膜材质为丙纶单丝布。隔膜压滤机主要应用于污水处理领域，本发明创造性将隔膜压滤机引入胰蛋白酶生产的胰浆过滤步骤中，相比现有技术使用布袋过滤，在过滤速度上有明显提升，缩短了生产周期，同时也有利于胰蛋白酶高活力的维持。

14、进一步的，制粒步骤为：压滤醇沉沉淀，使用旋转式制粒机破碎滤饼至2~3mm，以利于脱脂、脱水，加入滤饼速度应均匀，不得出现堵塞现象，制粒过程中温度<80℃。

15、进一步的，脱脂、脱水步骤为：将制粒物料投入脱脂罐，加乙醇（以浸没物料为准）脱脂、脱水，抽去轻相，收集重相准备干燥。

16、进一步的，干燥步骤为：把待干燥物料转移至干燥机料桶内，密封好后，开启进风，进风温度设定85℃，开启沸腾干燥，混合温度为65~68℃，干燥时间为4~6小时，水分控制≤6%，得到胰蛋白酶粗品。

17、本发明的有益效果在于：

18、本发明将提取温度由现有技术的20℃以下（一般为10℃左右）提升至33~35℃，在较高的温度下促使胰蛋白酶加速活化，控制提取时间在6~10小时，避免了酶大量分解，使酶活力最大化，配合隔膜压滤机快速过滤等工艺，极大缩短提取、过滤时间，同时避免长时间致使酶失活。

技术特征：

1.一种高活力胰蛋白酶的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：

2.如权利要求1所述的制备方法，其特征在于，磨制步骤前，先将胰脏解冻并绞碎。

3.如权利要求1所述的制备方法，其特征在于，预处理步骤为：调整物料ph值至10.5±0.5，升温3~5小时，使物料温度升至10~15℃，升温过程中间隙搅拌，每小时搅拌一次，每次5~15min。

4.如权利要求1所述的制备方法，其特征在于，纤维分离步骤为：将预处理后的物料通过除浆机分离纤维，获得纤维组织和浆液，浆液中无纤维，然后将浆液打入提取罐。

5.如权利要求1所述的制备方法，其特征在于，提取步骤为：提取罐搅拌转速为10~20hz，对提取罐内物料升温，使物料在8~10小时升至33~35℃，然后保温6~10小时。

6.如权利要求1所述的制备方法，其特征在于，醇沉步骤为：将上步得到的滤液预冷至8~10℃，搅拌下加入12~15℃的乙醇，调整体系中酒精度至50°~65°后静置。

7.如权利要求1所述的制备方法，其特征在于，活化胰浆过滤步骤为：将醇沉完成物料打入隔膜压滤机，隔膜压滤机透气量为10~15l/m2/s，隔膜材质为丙纶单丝布。

8.如权利要求1所述的制备方法，其特征在于，制粒步骤为：使用旋转式制粒机破碎滤饼至2~3mm，制粒过程中温度<80℃。

9.如权利要求1所述的制备方法，其特征在于，脱脂、脱水步骤为：将制粒物料投入脱脂罐，加乙醇脱脂、脱水，抽去轻相，收集重相准备干燥。

10.如权利要求1所述的制备方法，其特征在于，干燥步骤为：把待干燥物料转移至干燥机料桶内，密封好后，开启进风，进风温度设定85℃，开启沸腾干燥，混合温度为65~68℃，干燥时间为4~6小时，得到胰蛋白酶粗品，水分控制≤6%。

技术总结
本发明涉及一种高活力胰蛋白酶的制备方法，属于生物提取的技术领域。制备方法包括以下步骤：（1）磨制；（2）预处理；（3）纤维分离；（4）提取；（5）醇沉；（6）活化胰浆过滤；（7）制粒；（8）脱脂、脱水；（9）干燥；磨制步骤为：温度≤10℃的胰脏浆经两台串联胶体磨机研磨两遍后送入预处理罐，边搅拌边加入生姜蛋白酶、25%酒精溶液、乙酸乙酯、木薯淀粉，转速为20~50Hz；生姜蛋白酶、25%酒精溶液、乙酸乙酯、木薯淀粉的用量分别为胰脏浆质量的1%~2%、100%~200%、0.05%~0.1%和0.5%~1.5%。本发明方法的胰蛋白酶生产周期短，收率高，活力高。

技术研发人员：凌峰,刘学生,朱晓东,蔡玉玲
受保护的技术使用者：临沂新程金锣肉制品集团有限公司
技术研发日：
技术公布日：2024/2/19