一种用于阿尔茨海默病（AD）早筛试剂盒

本发明属于生物医药领域，涉及一种阿尔茨海默病(alzheimer's disease，ad)试剂盒，用于ad的早期筛查。

背景技术：

1、阿尔茨海默病(alzheimer's disease，ad)是一种神经退行性疾病，其病理特征主要是β-淀粉样蛋白(aβ)斑块和tau蛋白神经纤维缠结(nft)的形成，患者体现在逐渐恶化的记忆力和思维能力。据世界卫生组织的数据，全球有超过5000万人患有阿尔茨海默病或其他形式的痴呆症，而且这个数字预计在未来几十年内将显著增长。我国根据2021年人口普查结果显示60岁以上人口有2.6亿，占13.5％,其中65岁以上人群中阿尔茨海默病患病率为7％，已超1000万，接近全球痴呆患病人数的1/4，居全球之首，预计到2050年将突破4000万。

2、通常认为，β-淀粉样蛋白(aβ)斑块和tau蛋白神经纤维缠结(nft)的异常积累在ad的发展中起着关键作用，无论是哪种形式的aβ，都会引发病理生理级联反应，导致tau蛋白错误折叠和组装，扩散到整个皮层，最终导致神经系统衰竭、神经退化和认知能力下降。临床上，aβ病理出现在阿尔兹海默症的早期，tau病理的进展出现在阿尔兹海默症的晚期，且aβ斑块的出现并不一定会出现认知障碍，tau病理与认知障碍的相关性更加密切。目前，尚无根治ad的药物，只有一些缓解药物帮助改善患者的生活质量。所以，延迟或者阻断从aβ病理到tau病理发展的基因变化可能是有效缓解阿尔兹海默症改善患者生活质量的希望所在。

3、按照现有的ad假说和模型，在ad的早期，病人可能只有轻微的记忆问题，或者没有任何明显的症状，但这个阶段的ad可能已经开始在大脑中形成β-淀粉样蛋白(aβ)斑块，随着病情的发展，逐步形成tau蛋白神经纤维缠结。在ad的早期阶段，神经细胞可能还没有发生不可逆的损伤，因此早期治疗可能有助于保护神经细胞，延缓病情进展。

4、综上所述，ad早筛试剂盒是一种分子诊断工具，其主要目标是在疾病的早期阶段就检测到aβ和tau蛋白质的异常积累。这种早期诊断对于及时干预和阻止疾病进展非常重要。目前，尚无ad早期筛查的试剂盒获批用于临床，检测准确性和可靠性是需要克服的关键问题，但ad早筛试剂盒的开发对于该病的预防和伴随跟踪至关重要，可有助于更准确地判断疾病的阶段和严重程度，从而为患者提供更个性化和有效的治疗方案。

技术实现思路

1、本发明的目的在于提供一种用于阿尔茨海默病(ad)早筛试剂盒，主要目标用于ad潜在病人的早期筛查和ad患者的伴随跟踪检测，重点用于检测aβ病理和tau病理相关基因的表达水平，以区分两种病理进展。

2、本发明所述的ad早筛试剂盒，重点用于检测aβ病理和tau病理相关基因的表达水平，包含cd14,inpp5d,golm1,lag3四个基因。

3、用于检测上述基因的检测试剂，包含cd14,inpp5d,golm1,lag3四个基因原位杂交的分子探针，序列对如下：

4、(1)cd14基因的探针序列：

5、 名称 序列(5'-3') mm-cd14-1 gcccagataggctccgagaaaggc mm-cd14-2 acaactttcctcgtctagctcgcag mm-cd14-3 ctgcttccgtgtccacacgct mm-cd14-4 gcacacgcagggctccgaatag mm-cd14-5 cggtggcttccagaagcggt mm-cd14-6 ctgctgcagttctgcgagccag mm-cd14-7 gcgttacgcagcgctaaaacttgg mm-cd14-8 cctgcagcatcccgcagtgaa mm-cd14-9 ctggcagccctttaggtacctgct mm-cd14-10 cggcggtgactacgccagagtt

6、(2)inpp5d基因的探针序列：

7、

8、

9、(3)colm1基因的探针序列：

10、 名称 序列(5'-3') mm-golm1-1 gccaccagggcagccaggataag mm-golm1-2 cttccagctctacaatgcgcgtct mm-golm1-3 agctgtggctagactggatcctgtc mm-golm1-4 ccttcaactggtcttgcaggtctcg mm-golm1-5 ctcggtcatctggctgatacactgg mm-golm1-6 ttgttggtttcagccaggtctctgg mm-golm1-7 gtggcttcaaacccaagctctctga mm-golm1-8 cgagtttctcagctcctacccgagt mm-golm1-9 cctatcccggatgacaagctgct mm-golm1-10 tatgcctctcttctgagcgtcagc

11、(4)lag3基因的探针序列：

12、

13、

14、用于检测上述基因的检测试剂，包含cd14,inpp5d,golm1,lag3共4个基因pcr检测的引物对，序列对如下：

15、 基因名 探针序列 mus-cd14-f cctccaagttttagcgctgc mus-cd14-r cagcatcccgcagtgaattg mus-inpp5d-f ccaagaatggtcctggcact mus-inpp5d-r caaaccgtaccaccagctct mus-lag3-f gaggccatctcgttctcgtt mus-lag3-r ttcctctgagccggaaatgg mus-golm1-f gggtcgcttggacagttagt mus-golm1-r cacgcttctcgagctagcaa mus-β-actin-f gtgctatgttgctctagacttcg mus-β-actin-r atgccacaggattccatacc

16、上述的ad早筛试剂盒所含的基因检测分子探针，可包含cd14,inpp5d,golm1,lag3中任意1个基因1个探针序列或者2个及以上探针序列，及其探针序列组合。

17、上述的ad早筛试剂盒所含的基因检测分子探针，包含可包含cd14,inpp5d,golm1,lag3中任意2个或者2个以上基因的探针序列对，及基因探针序列对之间的序列组合。

18、同时，上述的ad早筛试剂盒所含的基因检测引物，可包含cd14,inpp5d,golm1,lag3中任意1个基因的引物对；或者包含cd14,inpp5d,golm1,lag3中任意2个或者2个以上基因引物对的组合。

19、上述的ad早筛试剂盒，还包括用于总rna提取的试剂、反转录用试剂和荧光定量测试用试剂。

20、应用于上述ad早筛试剂盒所检测的生物样本包括全血、外周血、脑液和脊液等。

21、上述ad早筛试剂盒检测所采用的技术平台可以包括芯片、试剂盒、试纸、高通量基因测序等。

22、本发明与现有技术相比，具有如下的优点和有益效果：

23、1.本发明提供的ad早筛试剂盒，可以用于ad潜在病人的早期筛查和ad患者的伴随跟踪检测。

24、2.发明提供的ad早筛试剂盒，可重点用于检测aβ病理和tau病理相关基因的表达水平，以区分两种病理进展，有助于更准确地判断疾病的阶段和严重程度。

25、3.与蛋白标记物技术相比，本发明提供的ad早筛试剂盒为分子诊断试剂盒，可以在基因水平上检测ad关联基因的表达水平，检测水平所受的干扰较少，结果更为准确。

26、4.cd14,inpp5d golm1,lag3四个基因检测特异性较强，在检测aβ病理和tau病理区的转录和表达水平的变化均较为稳定，具有特异性强，敏感性高，结果稳定的优点。