HSPB1在肝母细胞瘤诊断和治疗中的应用

本发明涉及生物医药，具体地说，是关于hspb1在肝母细胞瘤诊断和治疗中的应用。

背景技术：

1、肝母细胞瘤(hepatoblastoma，hb)是由于胚胎时期未分化的肝脏母细胞发育异常而导致多发于儿童的肝脏恶性肿瘤。hb是最常见的儿童原发性肝脏肿瘤，也是第三常见的儿童腹部恶性肿瘤，近年来发病率亦呈上升趋势。hb发病隐匿又缺乏早期诊断标志物，就诊时有30％患儿为iii～iv，并部分出现转移导致预后不良。甲胎蛋白(α-fetoproteinprotein，afp)水平在约90％的hb患者中升高，目前是唯一的hb诊断血清标志物。但由于血清afp在婴儿时期呈生理性增高，在肝炎、良性肝肿瘤也显著升高，因而缺乏鉴别诊断hb的特异性。如果仅仅通过异常升高的afp水平进行肝母细胞瘤诊断、鉴别诊断及预后评估则存在一定局限性。因此寻找特异有效的分子标志物，深入探究其分子机制，有助于对hb患儿的诊断和预后监测，从而提高他们的治愈率和生活质量。

2、热休克蛋白(heat shock proteins,hsps)是一组广泛存在于生物体内，进化程度高度保守的应激蛋白。热休克蛋白在正常情况下普遍低表达，但在病理和环境应激条件下显著高表达，以维持细胞抵御各种应激。hspb1是热休克蛋白家族的关键成员，主要功能是作为分子伴侣调控蛋白质的跨膜转运，装配分选和蛋白降解，参与到胞内运输和信号传导等多种生物学过程。研究表明，hspb1作为分子伴侣，在胶质母细胞瘤、胃癌以及乳腺癌等多种肿瘤中发挥重要调控作用，或可作为潜在的肿瘤诊疗标志物。

3、专利文献cn116072285a，公开日2023.05.05，公开了一种结直肠癌早筛和预后复发的辅助方法、系统及试剂盒。所述检测方法的结直肠癌标志物为cxcl2、hspb1、ca19-9与cea联合组成的标志物组；所述系统包括临床数据模块、数据处理模块和结果报告模块；所述试剂盒包括cxcl2、hspb1、ca19-9与cea的检测试剂。另一专利cn114277146a，公开日2022.04.05，公开了一种用于诊断腓骨肌萎缩症的探针组合、试剂盒及应用，属于基因检测技术领域。其中，所述探针组合包括靶向pmp22、gjb1、mfn2、mpz、gdap1、morc2、sord、nefh、hspb1、nefl、pmp2、gla、prps1和ttr中的至少一个基因的至少一个探针，而目前如本发明单独将hspb1用于肝母细胞瘤诊断和治疗还未见报道。

技术实现思路

1、本发明的第一个目的是，针对现有技术中的不足，提供hspb1在肝母细胞瘤诊断和治疗中的应用。

2、一方面，本发明提供了hspb1基因或蛋白作为诊断标志物在制备肝母细胞瘤诊断试剂或试剂盒中的应用。

3、第二方面，提供了检测hspb1基因或蛋白含量的试剂在制备肝母细胞瘤诊断试剂或试剂盒中的应用。

4、作为一个优选例，检测hspb1基因或蛋白含量的试剂选自特异性扩增hspb1基因的引物；或特异性识别hspb1基因或其转录本的探针；或特异性抗hspb1蛋白的抗体。

5、更优选地，肝母细胞瘤诊断试剂或试剂盒包括：核酸抽提试剂；和/或聚合酶链反应试剂；和/或蛋白免疫印迹试剂；和/或酶联免疫反应试剂。

6、更优选地，肝母细胞瘤诊断试剂或试剂盒的诊断样品为组织、血清、血浆或尿液。

7、第三方面，本发明提供了hspb1基因或蛋白或它们的抑制剂在制备治疗肝母细胞瘤的药物中的应用。

8、作为一个优选例，抑制剂选自小分子化合物或生物大分子。

9、更优选地，所述生物大分子选自以hspb1基因或其转录本为靶序列、且能够抑制hspb1蛋白表达或基因转录的小干扰rna、dsrna、shrna、微小rna、反义核酸；或能表达或形成所述小干扰rna、dsrna、微小rna、反义核酸的构建物。

10、更优选地，生物大分子为hspb1基因的干扰rna，选自以下任一种：

11、hs-hspb1-si1：正义链ggaguggucgcagugguuatt、反义链uaaccacugcgaccacucctt；

12、b)hs-hspb1-si2：正义链cccuggaugucaaccacuutt、反义链aagugguugacauccagggtt；

13、c)hs-hspb1-si3：正义链ccacgcaguccaacgagautt、反义链aucucguuggacugcguggtt。

14、第四方面，本发明提供了一种筛选治疗肝母细胞瘤的潜在物质的方法，包括：(1)用候选物质处理表达hspb1的体系；(2)检测所述体系中hspb1的表达，若所述候选物质可降低hspb1的表达，则表明该候选物质是需要的潜在物质，反之则表明该候选物质是非需要的潜在物质。

15、本发明优点在于：

16、通过5对肝母细胞瘤组织和癌旁组织中进行高通量测序分析，发现hspb1在肝母细胞瘤中高表达，并进一步在患者血清中得到验证，通过受试者工作特征(roc)曲线明确其诊断效能，表明hspb1可作为诊断肝母细胞瘤的血清标志物。同时干扰hspb1可显著抑制肝母细胞瘤发生发展，hspb1可作为潜在的抗癌药物靶点加以应用。本发明为肝母细胞瘤的血清学诊断提供了新的临床手段

技术特征：

1.hspb1基因或蛋白作为诊断标志物在制备肝母细胞瘤诊断试剂或试剂盒中的应用。

2.检测hspb1基因或蛋白含量的试剂在制备肝母细胞瘤诊断试剂或试剂盒中的应用。

3.根据权利要求2所述的应用，其特征在于，所述检测hspb1基因或蛋白含量的试剂选自特异性扩增hspb1基因的引物；或特异性识别hspb1基因或其转录本的探针；或特异性抗hspb1蛋白的抗体。

4.根据权利要求2所述的应用，其特征在于，所述肝母细胞瘤诊断试剂或试剂盒包括：核酸抽提试剂；和/或聚合酶链反应试剂；和/或蛋白免疫印迹试剂；和/或酶联免疫反应试剂。

5.根据权利要求1-4任一所述的应用，其特征在于，所述肝母细胞瘤诊断试剂或试剂盒的诊断样品为组织、血清、血浆或尿液。

6.hspb1基因或蛋白或它们的抑制剂在制备治疗肝母细胞瘤的药物中的应用。

7.根据权利要求6所述的应用，其特征在于，所述抑制剂选自小分子化合物或生物大分子。

8.根据权利要求7所述的应用，其特征在于，所述生物大分子选自以hspb1基因或其转录本为靶序列、且能够抑制hspb1蛋白表达或基因转录的小干扰rna、dsrna、shrna、微小rna、反义核酸；或能表达或形成所述小干扰rna、dsrna、微小rna、反义核酸的构建物。

9.根据权利要求8所述的应用，其特征在于，所述生物大分子为hspb1基因的干扰rna，选自以下任一种：

10.一种筛选治疗肝母细胞瘤的潜在物质的方法，其特征在于，包括

技术总结
本发明涉及一种诊断肝母细胞瘤的标志物及其用途，通过5对肝母细胞瘤组织和癌旁组织中进行高通量测序分析，发现HSPB1在肝母细胞瘤中高表达，并进一步在患者血清中得到验证，通过受试者工作特征(ROC)曲线明确其诊断效能，表明HSPB1可作为诊断肝母细胞瘤的血清标志物。同时干扰HSPB1可显著抑制肝母细胞瘤发生发展，HSPB1可作为潜在的抗癌药物靶点加以应用。本发明为肝母细胞瘤的血清学诊断提供了新的临床手段。

技术研发人员：潘秋辉,孙奋勇,邾国庆,马纪,丁苗,甄妮,陈天舒,朱佳蓓,毛思薇
受保护的技术使用者：上海交通大学医学院附属上海儿童医学中心
技术研发日：
技术公布日：2024/2/25