m6A识别蛋白IGF2BP家族基因的siRNA及其应用的制作方法

本发明涉及生物，尤其是涉及m6a识别蛋白igf2bp家族基因的sirna及其在疾病治疗方面的应用。

背景技术：

1、m6a(6-甲基腺嘌呤，n6-methyladenosine)甲基化，即在rna腺苷酸(a)第六位的n上发生甲基化修饰，是真核生物rna中最常见的一种转录后修饰，约占rna甲基化修饰的80％左右。

2、m6a rna甲基化是一个动态可逆的修饰过程，该过程需要在m6a甲基转移酶复合物(编码器，writers)、m6a去甲基化酶(消码器，erasers)和m6a识别蛋白(读码器，readers)的参与下催化形成。

3、m6a识别蛋白可以将不同的调节或功能因子募集到含m6a修饰的mrna上，影响靶mrna的命运。igf2bp家族蛋白(igf2bp1/2/3)可促进m6a修饰的mrna的稳定及翻译。报道显示，igf2bp1在多种癌症中高表达，与不良预后、疾病进展和转移密切相关。igf2bp2蛋白作为m6a阅读器在aml中通过调控谷氨酰胺代谢促进aml的发生、发展及维持，以及白血病干细胞的自我更新。igf2bp3在多种肿瘤类型中表达上调，具有潜在的致癌作用，如膀胱癌、肺癌、胃癌等，igf2bp3已被确定为包括结肠癌在内的各种癌症的生物标志物。然而目前并没有针对m6a识别蛋白igf2bp家族基因的靶向治疗药物，因此，开发针对m6a识别蛋白igf2bp家族基因靶点的药物尤为迫切。

4、sirna(小干扰rna)是一段与靶基因序列同源的、长度在20-25nt的双链rna，可以特异性地引起具有相同序列的mrna的降解，从而阻断相应基因的表达，进而治疗该基因引起的各类疾病。

5、现有的技术中，目前并没有针对m6a识别蛋白igf2bp家族基因的靶向治疗药物。本发明针对m6a识别蛋白igf2bp家族基因设计sirna并有效干扰基因表达，有望突破m6a识别蛋白igf2bp家族基因引起的疾病治疗方面的瓶颈。

技术实现思路

1、针对现有技术存在的不足，本发明的目的是提供m6a识别蛋白igf2bp家族基因的sirna及其在疾病治疗方面的应用，其针对m6a识别蛋白igf2bp家族基因设计特异性sirna作为靶向治疗药物，sirna寡聚核酸组合可以有效抑制包含igf2bp1、igf2bp2、igf2bp3在内的m6a识别蛋白的表达，抑制其生物学功能的发挥。

2、本发明的上述发明目的是通过以下技术方案得以实现的：

3、m6a识别蛋白igf2bp家族基因的sirna，包含igf2bp1、igf2bp2、igf2bp3在内的m6a识别蛋白的sirna寡聚核酸组合。

4、作为本发明的进一步的技术方案：所述sirna为一种核酸分子，包括gp-igf2bp1-1、gp-igf2bp1-4、gp-igf2bp1-6、gp-igf2bp2-1、gp-igf2bp2-2、gp-igf2bp2-6、gp-igf2bp2-7、gp-igf2bp3-6、gp-igf2bp3-7、gp-igf2bp3-8、gp-igf2bp3-9。

5、作为本发明的进一步的技术方案：所述核酸分子为双链rna分子。

6、作为本发明的进一步的技术方案：所述gp-igf2bp1-1由如下序列的正义链和反义链组成：

7、正义链：5’-gagcacaagaucuccuacatt-3’，

8、反义链：5’-uguaggagaucuugugcuctt-3’；

9、所述gp-igf2bp1-4由如下序列的正义链和反义链组成：

10、正义链：5’-gacgugcauaggaaggagatt-3’，

11、反义链：5’-ucuccuuccuaugcacguctt-3’；

12、所述gp-igf2bp1-6由如下序列的正义链和反义链组成：

13、正义链：5’-guugcagggccgagcaggatt-3’，

14、反义链：5’-uccugcucggcccugcaactt-3’。

15、作为本发明的进一步的技术方案：所述gp-igf2bp2-1由如下序列的正义链和反义链组成：

16、正义链：5’-caucgagacccucucgggutt-3’，

17、反义链：5’-acccgagagggucucgaugtt-3’；

18、所述gp-igf2bp2-2由如下序列的正义链和反义链组成：

19、正义链：5’-gaauugcaugggaaaaucatt-3’，

20、反义链：5’-ugauuuucccaugcaauuctt-3’；

21、所述gp-igf2bp2-6由如下序列的正义链和反义链组成：

22、正义链：5’-caugccgcaugauucuugatt-3’，

23、反义链：5’-ucaagaaucaugcggcaugtt-3’；

24、所述gp-igf2bp2-7由如下序列的正义链和反义链组成：

25、正义链：5’-gcugagauagagauuaugatt-3’，

26、反义链：5’-ucauaaucucuaucucagctt-3’。

27、作为本发明的进一步的技术方案：所述gp-igf2bp3-6由如下序列的正义链和反义链组成：

28、正义链：5’-gcuuguaagucuauucuggtt-3’，

29、反义链：5’-ccagaauagacuuacaagctt-3’；

30、所述gp-igf2bp3-7由如下序列的正义链和反义链组成：

31、正义链：5’-guaagucuauucuggagautt-3’，

32、反义链：5’-aucuccagaauagacuuactt-3’；

33、所述gp-igf2bp3-8由如下序列的正义链和反义链组成：

34、正义链：5’-gauggugauuaucacuggatt-3’，

35、反义链：5’-uccagugauaaucaccauctt-3’；

36、所述gp-igf2bp3-9由如下序列的正义链和反义链组成：

37、正义链：5’-ggcucagggaagaauuuautt-3’，

38、反义链：5’-auaaauucuucccugagcctt-3’。

39、如上述的m6a识别蛋白igf2bp家族基因的sirna在疾病治疗方面的应用。

40、如上述的m6a识别蛋白igf2bp家族基因的sirna的检测试剂盒，包含igf2bp1、igf2bp2、igf2bp3的引物。

41、作为本发明的进一步的技术方案：所述igf2bp1由如下序列的上游引物和下游引物组成：

42、上游引物：5’-caggagatggtgcaggtgt-3’，

43、下游引物：5’-gtggtgcaatcttgatggagg-3’。

44、作为本发明的进一步的技术方案：所述igf2bp2由如下序列的上游引物和下游引物组成：

45、上游引物：5’-acacagacacagaaaccgcc-3’，

46、下游引物：5’-aactgatgcccgcttagctt-3’。

47、作为本发明的进一步的技术方案：所述igf2bp3由如下序列的上游引物和下游引物组成：

48、上游引物：5’-gcctcatttacagtgggaggt-3’，

49、下游引物：5’-gtgcttgtctagcttggtcct-3’。

50、如上述的m6a识别蛋白igf2bp家族基因的sirna在检测试剂盒方面的应用。

51、综上所述，本发明包括以下至少一种有益技术效果：

52、本发明公开了一种m6a识别蛋白igf2bp家族基因的sirna及其在疾病治疗方面的应用，其针对m6a识别蛋白igf2bp家族基因设计特异性sirna作为靶向治疗药物，sirna寡聚核酸组合可以有效抑制包含igf2bp1、igf2bp2、igf2bp3在内的m6a识别蛋白的表达，抑制其生物学功能的发挥。