一株红法夫酵母菌株及应用的制作方法

本发明涉及生物，尤其涉及一株红法夫酵母菌株及应用。

背景技术：

1、水产养殖是指利用水域或滩涂养殖水产动植物的生产活动，其中，水产动物主要包括各种鱼、虾、蟹或贝类。水产饲料一般用鱼粉、虾头粉、贝壳粉等原料制备而成。水产饲料产业是水产养殖业的重要物质基础，对水产养殖产业的发展具有非常重要的支撑作用。

2、饲料添加剂是指在饲料生产加工、使用过程中添加的少量或微量物质，在饲料中用量很少但作用显著。例如：虾青素不仅是一种良好的抗氧化剂，还是部分鱼、虾中的主要色素，因为这些水产动物缺乏生物合成虾青素的能力。在水产养殖中必须喂食含有这种类胡萝卜素化合物的饲料，才能产生正常的色素沉着，赋予其良好的外观色泽。β-葡聚糖能刺激水产动物免疫细胞，强化其免疫系统功能；提高水产动物抗应激能力；并减少肠道病原菌数量，促进有益菌繁殖，调节肠道，减少抗生素用量。甲酸盐是一种有效的防腐剂，它可以抑制细菌、霉菌和酵母等微生物的生长和繁殖，从而延长产品的保质期。

3、现有技术中，水产养殖的饲料中会添加一些酵母发酵产物来提高水产品的品质。例如，在水产饲料中添加酵母的发酵液、酵母膏、酵母提取物等。但现有的酵母菌株中，大部分菌株无法同时产生虾青素、β-葡聚糖和甲酸，防腐和抑菌性能较差。有些则虾青素或β-葡聚糖产量较低，不能获得良好的水产健康状态的作用。因此，现有菌株应用于水产养殖中，抗氧化性、抗病毒和增色能力弱。

4、因此，进一步筛选适合水产养殖的酵母菌株，是本领域亟待解决的问题。

技术实现思路

1、有鉴于此，本发明要解决的技术问题在于提供一株红法夫酵母菌株及应用。

2、本发明提供了保藏编号为cctcc no：m20211207的红法夫酵母菌(xanthophyllomyces dendrorhous)

3、本发明提供的红法夫酵母菌的its rdna的核酸序列如seq id no:1所示。

4、本发明主要提供一株新型的红法夫酵母菌株，该菌株含有丰富的虾青素、β-葡聚糖，还能产天然甲酸，且培养工艺简单。

5、进一步的，本发明还提供了红法夫酵母菌的发酵产物的制备方法，其包括：将保藏编号为cctcc no：m20211207的红法夫酵母菌活化后，经发酵获得发酵液。

6、具体的，所述制备方法包括：将该红法夫酵母接种至ypd固体培养基上培养进行菌种活化后，取单菌落接种至种子培养基进行一级种子培养和二级种子培养，二级种子接种至发酵罐进行高密度发酵，获得发酵液。

7、本发明中，所述活化包括固体培养基活化、一级种子培养和二级种子培养；

8、所述固体培养基活化的培养基为ypd固体培养基，20～22℃恒温培养；

9、所述一级种子培养的培养基为ypd液体培养基，20～22℃，200rpm培养48～60h；

10、所述二级种子培养的培养基包括蔗糖40g/l、酵母粉4g/l、硫酸铵2g/l、七水硫酸镁2g/l和磷酸二氢钾5g/l；20～22℃，200rpm培养24～48h。

11、本发明中，所述发酵的条件包括：

12、培养基包括蔗糖20g/l、酵母粉4g/l、硫酸铵5g/l、七水硫酸镁2g/l、磷酸二氢钾5g/l，znso4·7h2o 0.05g/l、cuso4.5h2o 0.005g/l、cocl2·6h2o0.0045g/l、na2moo4·2h2o0.048g/l、ki 0.015g/l、feso4·7h2o 0.028g/l和cacl2·2h2o 0.029g/l；

13、ph值为5～7，22℃～25℃，溶氧不低于30％发酵至菌体湿重≥200g/l；

14、调节ph值为2～5，22℃～25℃，溶氧60％～90％继续发酵，共发酵120h～162h。

15、将发酵液浓缩灭活后喷雾干燥制成干酵母产品，或将发酵液浓缩灭活后加钠盐或者钙盐，然后添加增稠剂、分散剂制成悬浮液产品，将红法夫酵母产品应用到水产动物的养殖中。

16、本发明中，所述发酵液经灭活和干燥，制得干酵母制品；

17、所述干燥采用喷雾干燥，进风温度140℃～160℃，出风温度60℃～90℃。

18、本发明中，所述发酵液经浓缩后与盐、增稠剂和分散剂混合，制得酵母悬浮液；

19、所述浓缩包括：将发酵液4500～8000r/min离心5～20min后去掉上清，水洗3～5次，分离结束后浓缩至干物质16wt％～20wt％。

20、所述盐的质量为发酵液的0.05‰～0.1％，所述盐选自碳酸钠、氢氧化钠、碳酸钙中的一种或多种。一些实施例中，盐的质量分数为0.05‰、0.1‰、1‰、10‰或0.1％

21、所述增稠剂的质量为发酵液的0.1％～0.8％，所述增稠剂选自黄原胶、羧甲基纤维素钠、卡拉胶、海藻酸钠中的一种或多种；一些实施例中，增稠剂的质量分数为0.1％、0.2％、0.3％、0.4％、0.5％、0.6％、0.7％或0.8％。

22、所述分散剂的质量为发酵液的1％～5％，所述分散剂选自甘油、吐温80 中的一种或两种。一些实施例中，分散剂的质量分数为1％、2％、3％、4％或5％。

23、一些实施例中，所述酵母悬浮液包括发酵液、0.05‰～0.1％碳酸钠、0.1％～0.8％黄原胶和1％～5％甘油。

24、一些实施例中，所述酵母悬浮液包括发酵液、0.05‰～0.1％碳酸钠、0.1％～0.8％黄原胶和1％～5％吐温80。

25、一些实施例中，所述酵母悬浮液包括发酵液、0.05‰～0.1％氢氧化钠、0.1％～0.8％黄原胶和1％～5％甘油。

26、一些实施例中，所述酵母悬浮液包括发酵液、0.05‰～0.1％氢氧化钠、0.1％～0.8％黄原胶和1％～5％吐温80。

27、一些实施例中，所述酵母悬浮液包括发酵液、0.05‰～0.1％碳酸钙、0.1％～0.8％黄原胶和1％～5％甘油。

28、一些实施例中，所述酵母悬浮液包括发酵液、0.05‰～0.1％碳酸钙、0.1％～0.8％黄原胶和1％～5％吐温80。

29、一些实施例中，所述酵母悬浮液包括发酵液、0.05‰～0.1％碳酸钠、0.1％～0.8％羧甲基纤维素钠和1％～5％甘油。

30、一些实施例中，所述酵母悬浮液包括发酵液、0.05‰～0.1％碳酸钠、0.1％～0.8％羧甲基纤维素钠和1％～5％吐温80。

31、一些实施例中，所述酵母悬浮液包括发酵液、0.05‰～0.1％氢氧化钠、0.1％～0.8％羧甲基纤维素钠和1％～5％甘油。

32、一些实施例中，所述酵母悬浮液包括发酵液、0.05‰～0.1％氢氧化钠、0.1％～0.8％羧甲基纤维素钠和1％～5％吐温80。

33、一些实施例中，所述酵母悬浮液包括发酵液、0.05‰～0.1％碳酸钙、0.1％～0.8％羧甲基纤维素钠和1％～5％甘油。

34、一些实施例中，所述酵母悬浮液包括发酵液、0.05‰～0.1％碳酸钙、0.1％～0.8％羧甲基纤维素钠和1％～5％吐温80。

35、一些实施例中，所述酵母悬浮液包括发酵液、0.05‰～0.1％碳酸钠、0.1％～0.8％卡拉胶和1％～5％甘油。

36、一些实施例中，所述酵母悬浮液包括发酵液、0.05‰～0.1％碳酸钠、0.1％～0.8％卡拉胶和1％～5％吐温80。

37、一些实施例中，所述酵母悬浮液包括发酵液、0.05‰～0.1％氢氧化钠、0.1％～0.8％卡拉胶和1％～5％甘油。

38、一些实施例中，所述酵母悬浮液包括发酵液、0.05‰～0.1％氢氧化钠、0.1％～0.8％卡拉胶和1％～5％吐温80。

39、一些实施例中，所述酵母悬浮液包括发酵液、0.05‰～0.1％碳酸钙、0.1％～0.8％卡拉胶和1％～5％甘油。

40、一些实施例中，所述酵母悬浮液包括发酵液、0.05‰～0.1％碳酸钙、0.1％～0.8％卡拉胶和1％～5％吐温80。

41、一些实施例中，所述酵母悬浮液包括发酵液、0.05‰～0.1％碳酸钠、0.1％～0.8％海藻酸钠和1％～5％甘油。

42、一些实施例中，所述酵母悬浮液包括发酵液、0.05‰～0.1％碳酸钠、0.1％～0.8％海藻酸钠和1％～5％吐温80。

43、一些实施例中，所述酵母悬浮液包括发酵液、0.05‰～0.1％氢氧化钠、0.1％～0.8％海藻酸钠和1％～5％甘油。

44、一些实施例中，所述酵母悬浮液包括发酵液、0.05‰～0.1％氢氧化钠、0.1％～0.8％海藻酸钠和1％～5％吐温80。

45、一些实施例中，所述酵母悬浮液包括发酵液、0.05‰～0.1％碳酸钙、0.1％～0.8％海藻酸钠和1％～5％甘油。

46、一些实施例中，所述酵母悬浮液包括发酵液、0.05‰～0.1％碳酸钙、0.1％～0.8％海藻酸钠和1％～5％吐温80。

47、本发明所述制备方法还包括将发酵液、干酵母制品或酵母悬浮液提取，获得含有虾青素、β-葡聚糖或甲酸盐中任一项的提取物。

48、本发明中，所述提取物的提取方法包括但不限于：渗漉提取、溶液浸提、加热回流提取、同时蒸馏萃取、索氏提取、超声波辅助提取、微波辅助提取、酶辅助提取或超临界流体萃取中的一种，或者它们的结合。

49、更进一步的，本发明还提供了一种红法夫酵母菌的发酵产物，包括如下i)～iv)中的至少一种：

50、i)、如前所述的红法夫酵母菌的发酵液；

51、ii)、如前所述的干酵母制品；

52、iii)、如前所述的酵母悬浮液；

53、iv)、如前所述的提取物。

54、更进一步的，本发明还提供了如前所述的红法夫酵母菌，如前所述制备方法制得的红法夫酵母菌的发酵产物，作为饲料添加剂的应用。

55、本发明所述饲料添加剂为水产动物的饲料添加剂。本发明所述饲料添加剂的剂型为液体制剂或粉剂。本发明所述的饲料添加剂粉剂中，虾青素含量＞8‰，β-葡聚糖含量＞20％。液体制剂中虾青素含量＞8‰，β-葡聚糖含量＞20％，甲酸含量＞0.01％。

56、所述水产动物包括鱼类、虾类、蟹类或贝类。一些实施例中，所述水产动物为三文鱼、南美白对虾和/或锦鲤。

57、更进一步的，本发明还提供了一种饲料添加剂，其包括如下i)～v)中的至少一种：

58、i)、如前所述的红法夫酵母菌；

59、ii)、如前所述的红法夫酵母菌的发酵液；

60、iii)、如前所述的干酵母制品；

61、iv)、如前所述的酵母悬浮液；

62、v)、如前所述的提取物。

63、更进一步的，本发明还提供了一种水产饲料，其包括如前所述的饲料添加剂。

64、本发明中，所述水产饲料中，还包括基础水产饲料。例如，包括鱼类基础饲料、虾类水产饲料，蟹类水产饲料或贝类基础饲料，本发明对基础水产饲料的配方不做限定，凡本领域基础饲料皆可应用。

65、所述饲料添加剂的添加量为2‰～1.6％。

66、具体的，每公斤基础饲料中添加2‰～4‰的红法夫干酵母制品，一些实施例中，所述饲料添加剂的添加量为2‰、3‰或4‰。

67、或者，每公斤基础饲料中添加8‰～1.6％的红法夫酵母悬浮液制品，一些实施例中，所述饲料添加剂的添加量为8‰、10‰、100‰、1％、1.1％、1.2％、1.3％、1.4％、1.5％或1.6％。

68、更进一步的，本发明还提供了一种水产养殖的方法，其包括饲喂所述的水产饲料。本发明中，所述养殖方法中，每天投喂的次数为2～4次，持续四到八周饲养能达到很好的增色、抗氧化、增强免疫力的效果。

69、本发明提供一株新型的红法夫酵母菌株，该菌株含有丰富的虾青素、β-葡聚糖，将该菌株应用于水产养殖，水产动物的抗氧化防御能力明显增强，同时免疫调节能力和抗病能力明显提高，繁殖性能和存活率增加，且颜色更加鲜艳，达到同时添加多种饲料添加剂的综合效果。并且，该菌株能产天然甲酸，由该菌株制成的悬浮液产品能在不添加防腐剂的情况下长时间保存不变质。

70、生物保藏说明

71、红法夫酵母ar204(xanthophyllomyces dendrorhous ar204)，于2021年09月24日保藏在中国典型培养物保藏中心，地址为:中国，武汉，武汉大学，保藏编号为cctcc no:m20211207。