洋葱伯克霍尔德菌R7-5菌株、菌液、代谢粗提物及其应用

本发明属于植物病害生物防治，更具体地，涉及洋葱伯克霍尔德菌r7-5菌株、菌液、代谢粗提物及其应用。

背景技术：

1、细菌性病害是由病原细菌侵染所致的植物病害，如软腐病、溃疡病、青枯病等，尤其在高温高湿的条件下容易发病，造成严重的经济损失。细菌性病害的主要症状为萎蔫、腐烂、穿孔等，且发病后期如遇潮湿天气，病害部位会有明显恶臭味，并溢出细菌粘状物。植物漫长的生长、发育、繁殖过程中均可能会患有细菌性病害，且病原细菌会侵袭植物的各个部位，如根、茎、叶、果实、种子等，影响和破坏植物的正常生理功能，对植物的生存繁殖危害极大。

2、真菌性病害是由病原真菌侵染所致的植物病害，是植物病害中最常见的原因，种类繁多，约占植物病害种类的80％～90％，如炭疽、叶斑、白粉、锈病、叶枯等，相应的发病症状也千变万化。凡属于真菌性病害，在潮湿条件下都会有菌丝的产生，一般病斑上会有霉层或是粉层，无臭味，颜色不同，这是判断真菌性病害的主要依据。病原真菌可通过雨水、风吹、土壤、机械携带等方式进行传播蔓延，且在自然条件下存活时间较长，难以防治，甚至一些病原真菌还可产生毒素，如黄曲霉毒素和伏马菌素等，对人体健康和食品安全均会造成威胁。

3、目前细菌性病害与真菌性病害的防治均以化学法为主，如施用化学药剂等，优点在于成本低、效率高，适合大规模的机械化作业，然而，化学农药有一定的毒性，会与植物体内的酶、糖原、蛋白质等产生化学反应，影响植物的正常新陈代谢，进而影响其品质，甚至会产生农药化肥超标等食品安全问题，且由于现有高效、经济、稳定的化学杀菌剂种类很少，且长时间使用同一类杀菌剂易导致病原菌产生抗药性，进而影响其防治效果，导致病害失控的风险越来越高。此外，长期使用化学农药还会引起水资源污染和农业面源污染等问题，对人体健康与生态环境造成危害。

4、生物防治，作为一种绿色的防控技术，通过生物或生物的代谢产物等来实现对植物病害的有效防治，具有无毒性、无农药残留、不杀伤天敌、不产生耐药性、安全环保、经济性高、防治效果好等优点，在现有众多植物病害防控技术中脱颖而出。因此，若能找到一种既能抑制病原细菌，也能抑制病原真菌的微生物，将能更好通过生物防治发挥抗植物病害的作用，对农业的可持续性发展而言具有相当的必要性。

技术实现思路

1、本发明针对现有技术中存在的不足，旨在提供一株洋葱伯克霍尔德菌(burkholderia cepacia)r7-5菌株，不仅能高效抑制病原细菌，也能高效抑制病原真菌，进而对多种植物病害均有防治作用，为农业的可持续性发展作出巨大贡献。

2、本发明的第一目的是提供一株洋葱伯克霍尔德菌(burkholderia cepacia)r7-5菌株。

3、本发明的第二目的是提供上述洋葱伯克霍尔德菌r7-5菌株及其菌液在抑制病原细菌中的应用。

4、本发明的第三目的是提供上述洋葱伯克霍尔德菌r7-5菌株及其菌液在抑制病原真菌中的应用。

5、本发明的第四目的是提供上述洋葱伯克霍尔德菌r7-5菌株及其菌液在抑制病原卵菌中的应用

6、本发明的第五目的是提供上述洋葱伯克霍尔德菌r7-5菌株发酵得到的代谢粗提物。

7、本发明的第六目的是提供上述代谢粗提物在抑制病原细菌中的应用。

8、本发明的第七目的是提供上述代谢粗提物在抑制病原真菌中的应用。

9、本发明的第八目的是提供上述代谢粗提物在抑制病原卵菌中的应用。

10、本发明的上述目的是通过以下技术方案实现的：

11、本发明提供了一株洋葱伯克霍尔德菌(burkholderia cepacia)r7-5菌株，该菌株于2023年03月07日保藏于广东省微生物菌种保藏中心，保藏编号为gdmcc no：63243，保藏地址为：广州市先烈中路100号大院59号楼5楼。

12、该菌株可显著抑制多种病原细菌、真菌与卵菌的生长，适用于作为和/或制备优异的广谱抑菌剂，可为生物防治领域提供一种高效抑菌的新材料，因此，上述洋葱伯克霍尔德菌r7-5菌株及其菌液在抑制病原细菌和/或病原真菌和/或病原卵菌中的应用均应在本发明的保护范围之内。

13、优选地，所述病原细菌为迪基氏菌、黄单胞菌、丁香假单胞菌、青枯菌、水稻细菌性叶枯病菌、金黄色葡萄球菌中的一种或几种。

14、进一步优选地，所述迪基氏菌为玉米迪基氏菌、水稻迪基氏菌、达旦提迪基氏菌、方中达迪基氏菌中的一种或几种。

15、进一步优选地，所述黄单胞菌为野油菜黄单胞杆菌、水稻白叶枯病菌、柑橘溃疡病菌、穿孔黄单胞菌中的一种或几种。

16、进一步优选地，所述水稻细菌性叶枯病菌为假罗根肠杆菌和/或菠萝泛菌。

17、优选地，所述病原真菌为白色念珠菌、冬瓜枯萎病菌、香蕉枯萎病菌、立枯丝核菌、稻瘟病菌的一种或几种。

18、优选地，所述病原卵菌为荔枝霜疫霉菌。

19、此外，由上述洋葱伯克霍尔德菌r7-5菌株发酵得到的代谢粗提物与洋葱伯克霍尔德菌r7-5菌液相比，对多种病原细菌、真菌与卵菌的抑制作用更佳，因此，上述洋葱伯克霍尔德菌r7-5菌株发酵得到的代谢粗提物，以及上述代谢粗提物在抑制病原细菌和/或病原真菌和/或病原卵菌中的应用也应在本发明的保护范围之内。

20、优选地，所述发酵为：将上述洋葱伯克霍尔德菌r7-5菌株在ls5培养基中，于25～30℃下发酵至对数生长期或稳定期。该方法步骤简洁，操作简单，有利于工业化生产。

21、进一步优选地，所述ls5培养基的组成为：k2hpo4 5.00～5.50g/l、kh2po42.00～2.50g/l、蔗糖9.0～11.0g/l、nh4no3 3.0～4.0g/l、kcl 0.8～1.2g/l、mgso4 0.20～0.30g/l，溶剂为水。

22、更优选地，所述ls5培养基的组成为：k2hpo4 5.25g/l、kh2po4 2.25g/l、蔗糖10.0g/l、nh4no3 3.6g/l、kcl 1.0g/l、mgso4 0.25g/l，溶剂为水。

23、优选地，所述发酵的温度为28℃。

24、优选地，所述发酵的同时还进行振荡。

25、进一步优选地，所述振荡的转速为180～250rpm。

26、优选地，所述发酵后还进行后处理，所述后处理为依次进行离心、萃取、旋干、甲醇溶解、过滤。甲醇的用量只要足够溶解旋干所得产物即可。

27、进一步优选地，所述离心为在4800～5200g下离心25～30min，最优选为在5000g下离心30min。

28、进一步优选地，所述萃取为用乙酸乙酯进行萃取。

29、更优选地，所述乙酸乙酯的体积为离心所得上清液的1.8～2.2倍，最优选为2倍。

30、优选地，所述病原细菌为迪基氏菌、黄单胞菌、丁香假单胞菌、青枯菌、水稻细菌性叶枯病菌、金黄色葡萄球菌中的一种或几种。

31、进一步优选地，所述迪基氏菌为玉米迪基氏菌、水稻迪基氏菌、达旦提迪基氏菌、方中达迪基氏菌中的一种或几种。

32、进一步优选地，所述黄单胞菌为野油菜黄单胞杆菌、水稻白叶枯病菌、柑橘溃疡病菌、穿孔黄单胞菌中的一种或几种。

33、进一步优选地，所述水稻细菌性叶枯病菌为假罗根肠杆菌和/或菠萝泛菌。

34、优选地，所述病原真菌为白色念珠菌、冬瓜枯萎病菌、香蕉枯萎病菌、立枯丝核菌、稻瘟病菌的一种或几种。

35、优选地，所述病原卵菌为荔枝霜疫霉菌。

36、本发明具有以下有益效果：

37、本发明的洋葱伯克霍尔德菌r7-5菌株、其菌液及其代谢粗提物均可显著抑制多种病原细菌、真菌与卵菌的生长，适用于作为和/或制备优异的广谱抑菌剂，可为生物防治领域提供一种高效抑菌的新材料。