抗ROR1抗体及其用途的制作方法

本公开涉及抗体领域，更具体而言涉及一种ror1抗体。

背景技术：

1、受体酪氨酸激酶(receptor tyrosine kinase,rtks)是作用于细胞因子、生长因子、激素和其他信号分子受体的一种多基团跨膜蛋白，在多种细胞过程中起重要作用，包括生长、分化、血管生成以及多种癌症的发展进程。受体酪氨酸激酶样孤儿受体1(receptortyrosine ki nase-like orphan receptor 1,ror1)是受体rtks家族成员之一，其与生长因子受体的酪氨酸激酶结构域具有很高的同源性，低表达于胚胎发育过程中，而高表达于多种实体和血液恶性肿瘤中，包括各类白血病、非霍奇金淋巴瘤、乳腺癌、卵巢癌、黑色素瘤、肺腺癌等。

2、ror1含有2类亚型：完整的细胞膜受体型以及截短型变异体。截断型变异体主要分为无胞外结构的膜结合型ror1与只含胞外结构的可溶型ror1。可溶型ror1的表达在正常人与肿瘤患者中并无差异，血清中的表达量很低或者检测不到，且与疾病的进展和严重程度无关，完整结构的膜结合型ror1在多种肿瘤组织特异性高水平表达。研究表明，ror1在正常成人组织的关键组织器官，如：心脏、肝脏、大脑、肺等中并不表达，但在甲状腺和消化道组织如食管、胃等组织有一定量的表达。56％的tnbc、38％的肺腺癌和50％的卵巢癌具有高水平的膜ror1。

3、因此，ror1是一种具有广谱抗癌潜力的新药靶点。近几年，靶向ror1的基因工程抗体都已经被陆续的开发用于肿瘤免疫治疗的研究中，包括单链片段可变抗体(single-chain fragment variables,scfvs)、嵌合抗体(chime ricantibody)、fab类抗体、抗体药物偶联物(antibody-drug conjugate,adc)、嵌合抗原受体(chimeric antigen receptor,car)和双特异性抗体(bispecific antibody,biab)等。目前，研究进展较快的抗ror1单抗为oncternal therapeutics公司的cirmtuzumab,其临床数据具有良好的抗癌效果，可以较好的抑制慢性白血病肿瘤细胞的增殖抑制、迁移和存活。

技术实现思路

1、针对上述诸问题，本公开提供了ror1抗体、其制备方法、组合物等。本公开提供的益处广泛地适用于抗体治疗和诊断领域，并且能够与各种靶标反应的抗体联合使用。

2、本发明公开了一种分离的抗体或其抗原结合片段，其中所述抗体或其抗原结合片段特异性结合ror1，且包含重链可变区(vh)和轻链可变区(vl)，

3、所述重链可变区包含：

4、(i)hcdr1，其中包含与seq id no：1、7、13和19之一具有至少80％、至少85％、至少95％、或100％序列同一性的序列或seq id no：1、7、13和19组成；

5、(ii)hcdr2，其中包含与seq id no：2、8、14和20之一具有至少80％、至少85％、至少95％、或100％序列同一性的序列或由seq id no：2、8、14和20组成；和

6、(iii)hcdr3，其中包含与seq id no：3、9、15和21之一具有至少80％、至少85％、至少95％、或100％序列同一性的序列或由seq id no：3、9、15和21组成；

7、所述轻链可变区包含：

8、(i)lcdr1，其中包含与seq id no：4、10、16和22之一具有至少80％、至少85％、至少95％、或100％序列同一性的序列或由seq id no：4、10、16和22组成；

9、(ii)lcdr2，其中包含与seq id no：5、11、17和23之一具有至少80％、至少85％、至少95％、或100％序列同一性的序列或由seq id no：5、11、17和23组成；和

10、(iii)lcdr3，其中包含与seq id no：6、12、18和24之一具有至少80％、至少85％、至少95％、或100％序列同一性的序列或由seq id no：6、12、18和24组成。

11、本发明的一些实施方式中，所述的抗体或片段，其中包括以下组合：

12、(i)seq id no：1所示的hcdr1，seq id no：2所示的hcdr2，和seq id no：3所示的hcdr3，seq id no：4所示的lcdr1，seq id no：5所示的lcdr2，和seq id no：6所示的lcdr3；或

13、(ii)seq id no：7所示的hcdr1，seq id no：8所示的hcdr2，和seq id no：9所示的hcdr3，seq id no：10所示的lcdr1，seq id no：11所示的lcdr2，和seq id no：12所示的lcdr3；或

14、(iii)seq id no：13所示的hcdr1，seq id no：14所示的hcdr2，和seq id no：15所示的hcdr3，seq id no：16所示的lcdr1，seq id no：17所示的lcdr2，和seq id no：18所示的lcdr3；或

15、(iv)seq id no：19所示的hcdr1，seq id no：20所示的hcdr2，和seq id no：21所示的hcdr3，seq id no：22所示的lcdr1，seq id no：23所示的lcdr2，和seq id no：24所示的lcdr3。

16、本发明的一些实施方式中，所述的抗体或片段，其中所述重链可变区包含与seqid no：25、27、29和31之一具有至少80％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％序列同一性的序列或者由seq id no：25、27、29和31之一组成；

17、其中所述轻链可变区包含与seq id no：26、28、30和32之一具有至少80％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％序列同一性的序列或者由seq id no：26、28、30和32之一组成。

18、本发明的一些实施方式中，所述的抗体或片段，其中包括以下组合之一：

19、(i)重链可变区，其中包含与seq id no：25具有至少80％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％序列同一性的序列或由seq id no：25组成；

20、轻链可变区，其中包含与seq id no：26具有至少80％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％序列同一性的序列或由seq id no：26组成；

21、(ii)重链可变区，其中包含与seq id no：27具有至少80％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％序列同一性的序列或由seq id no：27组成；

22、轻链可变区，其中包含与seq id no：28具有至少80％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％序列同一性的序列或由seq id no：28组成；

23、(iii)重链可变区，其中包含与seq id no：29具有至少80％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％序列同一性的序列或由seq id no：29组成；

24、轻链可变区，其中包含与seq id no：30具有至少80％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％序列同一性的序列或由seq id no：30组成；

25、(iv)重链可变区，其中包含与seq id no：31具有至少80％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％序列同一性的序列或由seq id no：31组成；

26、轻链可变区，其中包含与seq id no：32具有至少80％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％序列同一性的序列或由seq id no：32组成。

27、本发明的一些实施方式中，所述的抗体或片段，其中还包括重链恒定区和轻链恒定区，其中，所述抗体重链恒定区选自igg系列抗体，轻链恒定区选自κ或λ链，其中优选人igg1和人κ链。

28、本发明的一些实施方式中，所述的抗体或片段，其中还包含重链恒定区和轻链恒定区，该重链恒定区包含与seq id no：33具有至少80％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％序列同一性的序列，或由seq id no：33组成；该轻链恒定区包含与seq id no：34具有至少80％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％序列同一性的序列，或由seq id no：34组成。

29、本发明的一些实施方式中，所述的抗体或片段，其中所述抗体选自以下组：全抗体、双特异性抗体、单克隆抗体、嵌合抗体、人源化抗体和全人源抗体；

30、所述片段选自以下组：fab片段、fab’片段、f(ab)2片段、fv片段和scfv。

31、另一方面，本发明还提供了一种分离的核酸分子，其中包含编码所述的抗体或片段的核酸序列。

32、另一方面，本发明还提供了一种载体，其中包含所述的核酸分子。

33、另一方面，本发明还提供了一种宿主细胞，其中包含所述的核酸分子或者所述的载体。

34、另一方面，本发明还提供了一种缀合物，其中包含与至少一个可检测的标记物偶联的所述的抗体或片段。

35、另一方面，本发明还提供了一种包含抗体的抗体药物缀合物，其中包括一个或多个药物部分，所述药物部分直接或经由接头共价连接至所述的抗体或片段。

36、另一方面，本发明还提供了一种多特异性分子，其中包含所述的抗体或抗原结合片段；优选地，所述多特异性分子特异性结合ror1，并且额外地特异性结合一个或多个其他靶标；进一步优选地，所述多特异性分子还包含至少一种具有针对第二靶标的第二结合特异性的分子。

37、另一方面，本发明还提供了一种药物组合物或试剂盒，其中包含所述的抗体或片段、或所述的核酸分子、或所述的载体、或所述的宿主细胞、或所述的缀合物、或所述的抗体药物缀合物、或所述的多特异性分子，以及药学上可接受的载体。

38、另一方面，本发明还提供了所述的抗体或片段、或所述的核酸分子、或所述的载体、或所述的宿主细胞、或所述的缀合物、或所述的抗体药物缀合物、或所述的多特异性分子、或所述的药物组合物或试剂盒在制备用于诊断、检测或监测与ror1表达相关疾病的试剂盒中的用途。

39、另一方面，本发明还提供了所述的抗体或片段、或的核酸分子、或所述的载体、或所述的宿主细胞、或所述的缀合物、或所述的抗体药物缀合物、或所述的多特异性分子、或所述的药物组合物或试剂盒在制备用于治疗与ror1表达相关疾病或确定其预后的药物中的用途。

40、另一方面，本发明还提供了所述的用途，其中所述与ror1表达相关疾病是癌症，所述癌症选自下组：白血病、非霍奇金淋巴瘤、乳腺癌、卵巢癌、黑色素瘤、肺腺癌。

41、ror1抗体的开发在全球范围内尚处在临床早期阶段，现暂无靶向ror1抗体药物上市。临床早期结果显示其安全性良好、疗效显著，靶点可单药响应也可与其他多种治疗手段联用以增强肿瘤治疗疗效。因此，发展具有更高的特异性、更低的毒副作用、更优的临床药效、更方便给药方式的的抗靶向ror1抗体是迫切而必要的，这将给患者提供更多的用药选择。本发明的单克隆抗体同参比品相比有更高的亲和力，更优的内吞活性，未来有组成抗体偶联药物的潜力。