用于诱导C2型iNKT细胞的培养基、培养方法及其应用与流程

本发明涉及细胞培养，尤其涉及一种用于诱导c2型inkt细胞的培养基、培养方法及其应用。

背景技术：

1、inkt细胞(invariant natural killer t cell，恒定型自然杀伤t细胞)是一种固有样t淋巴细胞，被认为是会首先对感染作出反应的细胞。一直以来，inkt细胞被认为是组织驻留免疫细胞，调控局部和全身免疫效应。其通过识别由cd1d递呈的脂类抗原激活后分泌多种细胞因子(如ifn-γ、il-4、il-17等)和趋化因子，从而介导固有免疫和获得性免疫应答。近来研究发现inkt细胞有很强的杀肿瘤细胞活性，而且激活的inkt细胞通过分泌的细胞因子可使衰竭的cd8+t细胞和nk细胞重新活化。

2、根据cd244和cxcr6的表达，有学者将inkt分为三个亚型：c0 inkt、c1 inkt、c2inkt。其中，c2表现出更多的nk细胞特性；c2型inkt较c1型inkt分泌更高水平的ifn-γ、颗粒酶b、穿孔素等。研究表明，c2 inkt细胞在外周组织中循环，具有抑制肿瘤扩散，增强抗病毒免疫反应作用，同时在人体内表现出了高细胞毒性的特性。

3、现有些研究认为il-15能刺激促进c2 inkt细胞，但其是以相同的概率分化成c1或c2 inkt细胞，诱导效率并不高效，因此需更高效的诱导扩增的c2型inkt细胞培养基和方法等，以满足研究需求。

技术实现思路

1、本发明提供一种用于诱导c2型inkt细胞的培养基、培养方法及其应用，用以解决现有方法诱导效率低的问题，实现c2型inkt细胞的高效诱导。

2、作为本发明的第一方面，本发明提供一种用于诱导c2型inkt细胞的培养基，所述培养基包括：10～1000u/ml il-2、1～100ng/ml il-12、1～100ng/ml il-15、1～100ng/mlil-18、10～1000ng/ml7dw8-5、10～1000ng/ml gm-csf、1～100ng/ml il-4、10～1000u/mltnf-α、1～100ng/ml lps、0.1～10μm汉黄芩素、0.1～10μm金丝桃苷、1～10％自体血浆及aim-v基础培养基。

3、优选的，所述培养基包括：700u/ml il-2、10ng/ml il-12、20ng/ml il-15、10ng/ml il-18、20ng/ml 7dw8-5、50ng/ml gm-csf、10ng/ml il-4、100u/ml tnf-α、20ng/mllps、1μm汉黄芩素、1μm金丝桃苷、10％自体血浆。

4、作为本发明的第二方面，本发明还提供了用于诱导c2型inkt细胞的培养方法，所述方法包括：

5、获取待处理细胞；

6、根据预设的培养时长，基于如上述任意一项所述培养基，培养所述待处理细胞；

7、收集培养后的所述待处理细胞。

8、本发明用于诱导c2型inkt细胞的培养方法进一步方案为：所述待处理细胞的接种浓度为3.5×106个/ml。

9、本发明用于诱导c2型inkt细胞的培养方法进一步方案为：所述待处理细胞为pbmc，所述培养时长为14天。

10、作为本发明的第三方面，本发明还请求保护一种试剂盒，所述试剂盒包括上述任意一项培养基，所述试剂盒用于诱导c2型inkt细胞的培养或/和外泌体制备。

11、本发明提供一种用于诱导c2型inkt细胞的培养基，该培养基包括限定范围内的il-2、il-12、il-15、il-18、7dw8-5、gm-csf、il-4、tnf-α、lps、汉黄芩素、金丝桃苷、自体血浆及aim-v基础培养基。经该培养基培养得到c2型inkt细胞在cd3+t细胞中的比例可达32.0％，较培养前增加约133倍，实现高效诱导及有效扩增，为c2型inkt细胞的研究及临床使用等提供保障；同时对应的c2型inkt细胞在无靶细胞刺激的情况下即可分泌较高水平的ifn-γ。

技术特征：

1.一种用于诱导c2型inkt细胞的培养基，其特征在于，所述培养基包括：10～1000u/mlil-2、1～100ng/ml il-12、1～100ng/ml il-15、1～100ng/ml il-18、10～1000ng/ml7dw8-5、10～1000ng/ml gm-csf、1～100ng/ml il-4、10～1000u/ml tnf-α、1～100ng/mllps、0.1～10μm汉黄芩素、0.1～10μm金丝桃苷、1～10％自体血浆及aim-v基础培养基。

2.根据权利要求1所述的用于诱导c2型inkt细胞的培养基，其特征在于，所述培养基包括：700u/ml il-2、10ng/ml il-12、20ng/ml il-15、10ng/ml il-18、20ng/ml 7dw8-5、50ng/ml gm-csf、10ng/ml il-4、100u/ml tnf-α、20ng/ml lps、1μm汉黄芩素、1μm金丝桃苷、10％自体血浆。

3.一种用于诱导c2型inkt细胞的培养方法，其特征在于，所述方法包括：

4.根据权利要求3所述的用于诱导c2型inkt细胞的培养方法，其特征在于，所述待处理细胞浓度为3.5×106个/ml。

5.根据权利要求4所述的用于诱导c2型inkt细胞的培养方法，其特征在于，所述待处理细胞为pbmc，所述培养时长为14天。

6.一种试剂盒，其特征在于，所述试剂盒包括如权利要求1～2中任意一项培养基，所述试剂盒用于诱导c2型inkt细胞的培养或/和外泌体制备。

技术总结
本发明提供一种用于诱导C2型iNKT细胞的培养基、培养方法及其应用。所述用于诱导C2型iNKT细胞的培养包括限定范围内的IL‑2、IL‑12、IL‑15、IL‑18、7DW8‑5、GM‑CSF、IL‑4、TNF‑α、LPS、汉黄芩素、金丝桃苷、自体血浆及AIM‑V基础培养基。经该培养基培养得到C2型iNKT细胞在CD3+T细胞中的比例可达32.0％，能实现高效诱导及有效扩增，为C2型iNKT细胞的研究及临床使用等提供保障，对应的C2型iNKT细胞在无靶细胞刺激的情况下即可分泌较高水平的IFN‑γ。

技术研发人员：白宗科,陈复兴,何无霜,张月圆
受保护的技术使用者：深圳泽医细胞治疗集团有限公司
技术研发日：
技术公布日：2024/5/10