一种基因多态性位点标记及在制备ABO血型检测制品中的应用的制作方法

本发明属于生物医药产业中的基因检测诊断，具体涉及一种基因多态性位点标记及在制备abo血型检测制品中的应用。

背景技术：

0、发明背景

1、abo血型系统是最早发现的人类红细胞血型系统，1900年奥利地科学家landsteiner根据人红细胞上具有的a抗原和b抗原将红细胞分为a、b、o、ab四种类型。abo血型抗原不仅存在于红细胞膜表面，也广泛存在于很多组织细胞膜和体液、分泌液中。abo血型抗原包括a、b、h抗原等，其化学结构是糖蛋白和糖脂，a、b抗原是在h抗原的基础上再转移一个糖分子形成的。a型个体带有n-乙酰半乳糖胺转移酶，能够将n-乙酰半乳糖胺加在h物质的岩藻糖末端上，产生a抗原。b型个体带有半乳糖基转移酶，能够将半乳糖加在h物质的岩藻糖末端上，产生b抗原。ab型个体带有a和b两种糖基转移酶，因此红细胞上同时有a和b抗原生成。o型个体不具有a和b转移酶，所以不能生成a和b抗原，细胞上只有h抗原。

2、abo血型变异型是由基因突变导致的，抗原结构或抗原位点数的差异引起表型的变化。abo血型基因位于第9号染色体长臂3区第4条带第1、2亚带(9q34.1～9q34.2)，a、b基因对于o基因而言为显性基因，a、b基因为共显性基因。a型是a/a或a/o基因型的表达产物，b型是b/b或b/o基因型的表达产物，o型的基因型是o/o，ab型的基因型是a/b。abo血型基因的多态性决定了abo血型抗原的多样性，是引起弱a、弱b等表型的根本原因。a和b等位基因编码的糖基转移酶具有很高的同源性，均由354个氨基酸组成，两者仅有4个氨基酸残基的差异，分别位于多肽链的第176、235、266和268位。

3、abo血型变异型患者因输血或妊娠等免疫性因素刺激产生抗-a1或抗-b抗体，当再次输入含有相应抗原的血液时会造成急性或迟发性溶血性输血反应。a等位基因多肽链在上述各位置的氨基酸分别为精氨酸、甘氨酸、亮氨酸和甘氨酸，而b等位基因多肽链在相应位置上的氨基酸却为甘氨酸、丝氨酸、甲硫氨酸和丙氨酸。蛋白质结晶学研究结果显示，靠近蛋白质c端的两个氨基酸残基，即第266和268残基对决定糖基转移酶底物特异性起着至关重要的作用。这两个氨基酸位于酶活性区，如果发生改变就会导致酶活性位点三维结构的改变，从而引起酶活性的变化。而检测abo血型变异型对于输血安全具有重要的作用。

技术实现思路

1、本发明的目的是提供一种基因多态性位点标记及在制备abo血型检测制品中的应用。

2、本发明首先提供一种abo血型的基因多态性位点，所述的基因多态性位点位于abo基因编码区域由起始密码子起第925位，碱基为ta杂合。

3、更进一步的，所述的基因多态性位点位于序列为seq id no:1的核酸片段的664位，碱基为ta杂合。

4、ctgctgctctaagccttccaatggccgctggcgggcgggtgcaggacgggcctcctgcagcccaggggtgcacggccggcggctcccccagcccccgtccgcctgccttgcagatacgtggctttcctgaagctgttcctggagacggcggagaagcacttcatggtgggccaccgtgtccactactatgtcttcaccgaccagccggccgcggtgccccgcgtgacgctggggaccggtcggcagctgtcagtgctggaggtgggcgcctacaagcgctggcaggacgtgtccatgcgccgcatggagatgatcagtgacttctgcgagcggcgcttcctcagcgaggtggattacctggtgtgcgtggacgtggacatggagttccgcgaccatgtgggcgtggagatcctgactc

5、cgctgttcggcaccctgcaccccagcttctacggaagcagccgggaggccttcacctacg

6、agcgccggccccagtcccaggcctacatccccaaggacgagggcgatttctactacatgg

7、gggcgttcttcggggggtcggtgcaagaggtgcagcggctcaccagggcctgccaccag

8、gccatgatggtcgaccaggccaacggcatcgaggccgtgtggcacgacgagagccacctg

9、aacaagaacctactgcgccacaaacccaccaaggtgctctcccccgagtacttgtgggac

10、cagcagctgctgggctggcccgccgtcctgaggaagctgaggttcactgcggtgcccaag

11、aaccaccaggcggtccggaacccgtgagcggctgccaggggctctgggagggctgccgg

12、cagccccgtccccctcccgcccttggttttagcagaacgggtaaactctgtttcctttgtccgtcctgttgtgagtaactgaagcctaggcc。

13、本发明还提供一种检测上述基因多态性位点的引物，所述的引物为pcr扩增引物对或单倍型扩增及测序引物；

14、所述的引物对，其序列信息如下：

15、abo-e7f:5′-ctgctgctctaagccttccaa-3′(seq id no:2)、

16、abo-e7r:5′-ggcctaggcttcagttactcacaa-3′(seq id no:3)；

17、本发明还提供所述的引物的一种用途，是在制备用于检测红细胞abo血型的制品中的应用。

18、所述的制品，为pcr扩增测序检测试剂盒。

19、本发明另一个方面还提供一种检测红细胞abo血型的方法，所述的方法是采用能扩增上述基因多态性位点标记的引物，对待检样本dna进行pcr扩增，扩增产物进行测序，之后进行基因型分析，确定待检样本是否存在上述基因多态性位点标记。

20、本发明通过检测筛选获得的基因多态性位点，提供了一种有效的进行abo血型基因诊断的途径，应用效果表明本发明所提供的基因多态性位点及检测引物可以有效用于献血者及临床患者进行abo基因的快速检测。

技术特征：

1.一种abo血型的基因多态性位点，其特征在于，所述的基因多态性位点位于abo基因编码区域由起始密码子起第925位，碱基为ta杂合。

2.如权利要求1所述的基因多态性位点，其特征在于，所述的基因多态性位点位于序列为seq id no:1的核酸片段的664位，碱基为ta杂合。

3.一种检测权利要求1所述的基因多态性位点的引物，其特征在于，所述的引物为pcr扩增引物对或单倍型扩增及测序引物。

4.如权利要求3所述的引物，其特征在于，所述的引物，其上游引物的序列为seq idno:2,下游引物的序列为seq id no:3。

5.检测权利要求1所述的基因多态性位点的引物在制备用于检测红细胞abo血型的制品中的应用。

6.如权利要求5所述的应用，其特征在于，所述的制品为pcr扩增测序检测试剂盒。

7.一种检测红细胞abo血型的方法，其特征在于，所述的方法是采用权利要求3所述的引物对待检样本dna进行pcr扩增，扩增产物进行测序，之后进行基因型分析，确定待检样本是否存在权利要求1所述的基因多态性位点。

技术总结
本发明提供一种基因多态性位点标记及在制备ABO血型检测制品中的应用。所述的ABO血型的基因多态性位点，位于ABO基因编码区域由起始密码子起第925位，碱基为TA杂合。本发明通过检测筛选获得的基因多态性位点，提供了一种有效的进行ABO血型基因诊断的途径，应用效果表明本发明所提供的基因多态性位点及检测引物可以有效用于献血者及临床患者进行ABO基因的快速检测。

技术研发人员：韩斌,姜志,任希才,冯智慧
受保护的技术使用者：青岛市中心血站（青岛市输血医学研究所）
技术研发日：
技术公布日：2024/5/10