一株耐高温鸭疫里默氏杆菌噬菌体及其应用的制作方法

本发明属于微生物，具体涉及一株耐高温鸭疫里默氏杆菌噬菌体及其应用。

背景技术：

1、噬菌体又称细菌病毒，是一种在细菌体内完成增殖，通过裂解细菌将自身释放到环境中的微生物。与抗生素治疗相比，噬菌体治疗具有代谢效率低、杀死细菌的最低剂量低、高度的特异性、高效的杀菌效果、筛选速度快等优势。近年来，有关噬菌体的研究有了巨大的发展，国内外对噬菌体的应用研究范围很广，包括针对人类疾病的防治、动物疾病的防治、食品中病原菌的清除、农作物的细菌感染防治、细菌生物被膜的裂解等方面。

2、鸭传染性浆膜炎是由鸭疫里默氏杆菌（ra）引起的传染病，是鸭的主要细菌性传染病，其死亡和感染率较高。该病的感染率最高可达90%，死亡率为5%~80%。在发生ra病时，及时使用药物对病情有控制作用，由于细菌对抗菌类药物容易形成耐药性，在生产中经常出现某药物刚开始使用效果明显，历经一段时间后效果不显著甚至无效。药物防治曾经是国内诸多地区控制ra病的主要手段之一，但ra易形成耐药性，耐药性造成采用药物在防治ra过程中的疗效不断降低、防治期间资金投入量持续增加等问题。

3、另一方面，疫苗接种是目前治疗鸭疫里默氏杆菌较为有效的防治手段。现阶段公认疫苗ra血清型有21种，ra各血清型之间尚未无交叉保护。所以在开发疫苗时要立足于本地区流行的血清型菌株，并将其作为菌苗株。尽管灭活疫苗已成功用于ra病的预防免疫接种，但在产生中存在操作流程不便捷、成本较高及对雏鸭的应激较大等不足。

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技术实现思路

1、为了解决现有技术中存在的问题，本发明的目的在于提供一株耐高温鸭疫里默氏杆菌噬菌体rdp-ra-22039及其应用，本发明提供的耐高温鸭疫里默氏杆菌噬菌体rdp-ra-22039效价高，具有优异的耐高温特性和较强的遗传稳定性，在温度较高的环境中可以稳定存放，能够有效预防和治疗由鸭疫里默氏杆菌引起的浆膜炎，杀灭病原菌，快速使机体恢复健康状态，可替代抗生素和疫苗使用，安全无残留，在防治鸭传染性浆膜炎的临床应用中具有良好的前景。

2、本发明的技术方案是：

3、本发明提供了一株耐高温鸭疫里默氏杆菌噬菌体rdp-ra-22039，从山东省东营市某养鸭场中分离得到，已于2023年6月12日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏地址为北京市朝阳区北辰西路1号院3号中国科学院微生物研究所，保藏编号为cgmcc no.45587，分类学命名为鸭疫里默氏杆菌噬菌体 riemerella anatipestifer  bacteriophage。

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5、进一步地，所述的耐高温鸭疫里默氏杆菌噬菌体rdp-ra-22039于电镜下观测到：有一个多面体立体对称的头部，包裹着核酸，直径约40 nm，有一个长约150 nm的尾，有尾鞘，颈部连着头部和尾部，根据国际病毒分类学组织病毒分类第九次报告，该噬菌体归类为有尾病毒目长尾病毒科。

6、进一步地，本发明所述的耐高温鸭疫里默氏杆菌噬菌体rdp-ra-22039经全基因组测序，得到具有seq id no.1所示的核苷酸序列。

7、本发明所提供的耐高温鸭疫里默氏杆菌噬菌体rdp-ra-22039的最佳感染复数为0.01，对应最高效价为1.03×109pfu/ml；并且噬菌体rdp-ra-22039具有较强的裂解和复制能力，在传代30次的过程中，始终保持较高的效价，没有出现明显波动，说明该噬菌体具有较强的遗传稳定性。

8、进一步地，本发明提供的耐高温鸭疫里默氏杆菌噬菌体rdp-ra-22039具有优异的耐高温性能，经试验验证，将噬菌体rdp-ra-22039在80℃以下环境中放置30 min到60 min，噬菌体均可以保持较高的效价，在90℃环境中30min时，噬菌体效价仅下降2个数量级，在90℃环境中60 min时，噬菌体效价仅下降3个数量级。

9、同时，本发明提供的耐高温鸭疫里默氏杆菌噬菌体rdp-ra-22039具有优异的稳定性能，在30℃以下环境中放置60天，噬菌体可以保持较高的效价，效价没有任何的下降；噬菌体rdp-ra-22039在50℃以下环境中放置60天，噬菌体仍保持较高的效价，仅下降1个数量级。

10、进一步地，本发明提供了一种所述的耐高温鸭疫里默氏杆菌噬菌体rkp-ra-22039在制备预或治疗鸭疫里默氏杆菌感染的疾病的药物中的应用。

11、本发明还提供了一种所述的耐高温鸭疫里默氏杆菌噬菌体rkp-ra-22039在制备预或治疗鸭疫里默氏杆菌感染的疾病的饲料添加剂或环境消毒剂中的应用。

12、进一步地，本发明提供了一种噬菌体组合物，包括上述的耐高温鸭疫里默氏杆菌噬菌体rdp-ra-22039。

13、更进一步地，本发明提供了一种噬菌体药物制剂，包括上述的耐高温鸭疫里默氏杆菌噬菌体rdp-ra-22039或上述的噬菌体组合物。

14、更进一步地，所述噬菌体药物药物制剂中添加的耐高温鸭疫里默氏杆菌噬菌体rdp-ra-22039的浓度大于109pfu/g。

15、更进一步地，所述噬菌体药物制剂还包括药学上可接受的辅料，其剂型为粉剂、颗粒剂、冻干剂、溶液剂、乳剂、混悬剂或凝胶剂。

16、另外，本发明还提供了一种饲料添加剂，包括上述的耐高温鸭疫里默氏杆菌噬菌体rdp-ra-22039或上述的噬菌体组合物。

17、进一步地，所述饲料添加剂的制备方法为现有技术中的常规方法，本发明中采用低聚麦芽糖和山梨醇将噬菌体发酵液包被，接着喷洒在脱脂米糠中，烘干即得。采用本发明耐高温鸭疫里默氏杆菌噬菌体rdp-ra-22039制得的粉剂，可以有效治疗鸭疫里默氏杆菌引起的浆膜炎，有效杀灭病原菌，快速使机体恢复健康状态。

18、与现有技术相比，本发明提供的耐高温鸭疫里默氏杆菌噬菌体rdp-ra-22039具有以下优势：

19、(1)本发明于山东省东营市一养鸭场中发现并分离了一株耐高温鸭疫里默氏杆菌噬菌体rdp-ra-22039，该噬菌体对温度有很强的耐受性，在温度较高的环境中可以稳定存放，有效解决了噬菌体高温易失活的难题，突破了浆膜炎的治疗困境，为鸭传染性浆膜炎找到一种新的有效的治疗方案，解决了鸭疫里默氏杆菌的耐药性难题。

20、(2)本发明提供的耐高温鸭疫里默氏杆菌噬菌体rdp-ra-22039还具有较强的遗传稳定性，效价高，对禽没有毒害作用，可替代抗生素和疫苗使用，安全无残留，不会产生耐药性，对环境友好。在防治鸭传染性浆膜炎的临床应用中具有良好的前景。

21、生物保藏说明：

22、一株耐高温鸭疫里默氏杆菌噬菌体rdp-ra-22039，已于2023年6月12日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏地址为北京市朝阳区北辰西路1号院3号中国科学院微生物研究所，保藏编号为cgmcc no.45587，分类学命名为鸭疫里默氏杆菌噬菌体 riemerella anatipestifer bacteriophage。