一种黄酒酒糟发酵提取液及其制备方法和应用

.本发明属于生物发酵，具体是涉及一种黄酒酒糟发酵提取液及其制备方法，以及发酵液在化妆品中的应用。

背景技术：

1、黄酒酒糟是发酵成熟后的黄酒醪经压榨后得到的固形物，黄酒酒糟的成分主要来自于酿酒原料以及在糖化、发酵过程中产生的代谢产物（酒精、乳酸、葡萄糖、氨基酸等）和残留的酵母细胞。目前，黄酒酒糟大多作为饲料被低值利用或者作为废弃物处理，造成极大的资源浪费，使很多高值物质没有很好地加以利用。

2、黄酒酒糟除常见的成分外，还含有细菌、霉菌及酵母菌等多种微生物。因此，对黄酒酒糟的的利用可以从微生物入手，进行分离提取、菌体培养和发酵生产。通过酵母的代谢，可以将酒糟中的多种碳源，转化为农副产品中的菌体蛋白，然而，单独使用酵母固态发酵会存在水解酶活性降低等问题。芽孢杆菌能降解抗营养因子和有毒物质，有较好的酶活性，可增强纤维素和大分子蛋白等有机物的降解，产生的底物可用于酵母发酵生产。

3、目前，黄酒酒糟主要应用于食品和畜牧行业。作为动物饲料、食用菌培养基、直接糟制食品等粗放型方式使用，没有充分发挥黄酒酒糟潜在的高值资源价值。对于黄酒酒糟中的功能性成分的开发利用，目前主要集中在风味成分的调味品领域应用。另外，黄酒酒糟中还含有多种功能性活性物质（如活性多肽、功能性低聚糖、抗氧化酚类及黄酮类等）。应用微生物发酵等工艺，可以有效提高其含量，有很大的开发潜力。

4、在化妆品中，多糖可起到抗皱保湿的效果；黄酮类物质可清除多余的自由基，发挥抗氧化活性；蛋白质是组成人体细胞、组织的重要成分，可保持皮肤弹性润泽。因此，可探究黄酒酒糟的化妆品功效性，实现黄酒酒糟的高值化利用。利用微生物发酵能够富集有效成分,提高产品功效,降低毒副作用等，这是目前传统溶剂提取方法无法办到的。同时相比于其他的提取技术来说 ,具有无污染、能耗低、操作简便等优点。此外微生物在发酵过程中产生的部分酶,一定程度下可以起到清洁皮肤、预防青春痘和抗衰老的作用。

技术实现思路

1、本发明的目的是筛选一种能提高黄酒酒糟高质化利用的菌种，提供菌种对黄酒酒糟液态发酵制备发酵提取液的方法，本发明还提供了该黄酒酒糟发酵提取液在制备抗氧化性能和美白性能的化妆品中的应用。

2、为实现上述目的，本文经筛选提供了一种保藏编号为cgmcc no.28727的酿酒酵母（saccharomyces cerevisiae）bybc1.21100，保藏在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏地址是北京市朝阳区北辰西路1号院3号，保藏日期为2023年10月24日。该酿酒酵母菌用于化妆品具有抗氧化性和美白功能。

3、本发明还提供了一种保藏编号为cgmcc no.28726的南海芽孢杆菌（bacillusaustralimaris）bybc1.20001，保藏在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏地址是北京市朝阳区北辰西路1号院3号，保藏日期为2023年10月24日。南海芽孢杆菌均具有产蛋白酶、淀粉酶以及纤维素酶活性，可以产生大量的蛋白酶、淀粉酶以及纤维素酶，这些酶能将黄酒酒糟中大分子物质分解成小分子活性物质及营养物质，既可以发挥其功效性又可以供其它菌种生长发育和发酵生产。

4、本发明还提供一种黄酒酒糟发酵提取液，是通过酿酒酵母和/或酿酒酵母与南海芽孢杆菌对黄酒酒糟发酵原料进行液态发酵、提取制备而得。

5、本发明还提供了上述黄酒酒糟发酵提取液的制备方法，具体步骤包括有：（1）菌种培养液的制备；（2）黄酒酒糟发酵原料的制备；（3）菌种培养液与黄酒酒糟发酵原料混合进行液态发酵；（4）将步骤（3）的液态发酵的发酵液离心、膜过滤。

6、优选地，菌种培养液为酿酒酵母菌种培养液、南海芽孢杆菌菌种培养液的其中一种或组合；其中，酿酒酵母菌种培养液的制备方法：用接种环取-80℃的超低温冰箱保存的冷冻干燥管中的酿酒酵母菌种一环在yepd琼脂培养基平板上划线，在30℃培养箱中培养24～48h至长出单菌落，即得到平板活化的酿酒酵母菌种；取一环该菌种接入yepd液体培养基中，在恒温摇床中以200 r/min，30 ℃的条件振荡培养22～24h。无菌取样，稀释25倍时，od600=0.400±0.005，得到酿酒酵母菌种培养液。

7、南海芽孢杆菌菌种培养液的制备方法：用接种环取-80℃的超低温冰箱保存的冷冻干燥管中的南海芽孢杆菌菌种一环在lb琼脂培养基平板上划线，在37℃培养箱中培养16～24h至长出单菌落，即得到平板活化的南海芽孢杆菌菌种；取一环该菌种接入lb液体培养基中，在恒温摇床中以220 r/min，37 ℃的条件振荡培养14～16h。无菌取样，稀释25倍时，od600=0.300±0.005，得到南海芽孢杆菌菌种培养液。

8、优选地，菌种培养液为酿酒酵母bybc1.21100和南海芽孢杆菌bybc1.20001的菌种培养液按照体积比1：1混合。

9、黄酒酒糟发酵原料黄酒酒糟和水混合，黄酒酒糟是以稻米等淀粉质原料经糖化发酵生产黄酒后固液分离的产物，出糟率约为 20% － 30%，含有丰富的蛋白质、多肽、氨基酸、淀粉、多糖、纤维素等物质；优选地，黄酒酒糟发酵原料为黄酒酒糟与水的料液的体积比为1：9。

10、优选地，菌种培养液按体积百分比为5%添加量和黄酒酒糟发酵原料混合进行液态发酵。

11、优选地，发酵条件为发酵时间48h，培养温度30℃，转速200rpm。

12、发酵结束后，将黄酒酒糟发酵液经离心、过滤后即为黄酒酒糟发酵提取液；优选地，所述离心条件为15000r/min下离心20min，所述过膜的滤膜为0.22μm滤膜。

13、本发明所提供的黄酒酒糟提取液在制备具有美白或抗氧化作用的化妆品中的应用。

14、本发明的筛选的酿酒酵母和南海芽孢杆菌均为黄酒酒糟中分离出来，其中酿酒酵母（saccharomyces cerevisiae）bybc1.21100具有抗氧化和美白效果，南海芽孢杆菌（bacillus australimaris）bybc1.20001，南海芽孢杆菌均具有产蛋白酶、淀粉酶以及纤维素酶活性，可以产生大量的蛋白酶、淀粉酶以及纤维素酶，这些酶能将黄酒酒糟中大分子物质分解成小分子活性物质及营养物质，既可以发挥其功效性又可以供其它菌种生长发育和发酵生产。

15、采用酿酒酵母，或者采用酿酒酵母和南海芽孢杆菌复配对黄酒酒糟进行发酵，所得黄酒酒糟发酵提取液中生物活性物质多酚、黄酮和多肽的含量显著提高，对dpph自由基清除效果和对酪氨酸酶活性抑制效果明显，抗氧化性能和美白性能优越，在化妆品中应用有较好的效果。

16、本发明的有益效果具体为：

17、 1.生产该黄酒酒糟发酵提取液的发酵原料为黄酒酒糟，黄酒酒糟是以稻米等淀粉质原料经糖化发酵生产黄酒后固液分离的产物，出糟率约为 20% － 30%，含有丰富的蛋白质、多肽、氨基酸、淀粉、多糖、纤维素等物质，具有很高的重新利用的价值。

18、2.筛选出保藏编号为cgmcc no.28727的酿酒酵母saccharomyces cerevisiae，经过试验证明，与其他酵母菌相比，具有高dpph自由基清除率以及酪氨酸酶抑制率。筛选出保藏编号为cgmcc no.28726的南海芽孢杆菌bacillus australimaris，经过试验证明，与其他芽孢杆菌相比，具有高的产酶活性。

19、3.按照该方法制成的黄酒酒糟多菌发酵提取液，与不加菌的黄酒酒糟水提液相比，生物活性物质多酚、黄酮以及多肽的含量显著提高，对dpph自由基清除率和对酪氨酸酶活性抑制效果提高，抗氧化和美白性能优越。