0 UL左右，如果制成本实施方式的孔形状，在以后的评价中能够添加与培养基等量的试剂。
[0047]下面，对本实施方式的微孔板I的使用方法进行说明。
[0048]作为一例，在本实施方式中，以50 μ L/孔进行培养。因此，对应于使用细胞凝集块的评价的目的，制备细胞悬浊液，以在50 μ L中确保所需要的细胞数。
[0049]将这样制备的细胞悬浊液接种于384孔的微孔板I上，以37°C、5% 0)2浓度开始培养。接种的细胞以非粘接的状态增殖，在2天左右在孔2的最深部形成细胞凝集块。
[0050]接着，使用细胞凝集块，在微孔板I上进行药效评价的筛选。
[0051]作为一例，在本实施方式中，将与培养液同量的Cell Titer-Glo (TM)LuminescentCell Viability Assay (Promega公司制)按照制品添加的说明添加于得到的细胞凝集块中，测定与每孔的细胞内ATP量成比例的发光量。将测定值作为细胞数的指标，能够算出每孔的细胞数的变化率，在每孔中加入不同的药剂时，能够评价药剂对细胞增殖的影响。
[0052]如上所述，根据本实施方式的微孔板1，从细胞凝集块的形成起、至药效评价的筛选止，能够不移动细胞凝集块地进行。因此，即使为使用大量样本的筛选，也能够迅速地进行评价。
[0053]实施例
[0054]下面，使用实施例对本发明进行说明。
[0055](实施例1)
[0056]使用透明的聚苯乙烯树脂(PS Japan公司制、HF77)、和在透明的聚苯乙烯树脂中混合有15%白色色素钛白颜料(SUMIKA C0L0RC0., LTD.制)的着色树脂，通过注射成形形成透明、白色2种384孔微孔板。
[0057]得到的微孔板的形状为横向127.7mm、纵向85.5mm、高度14.4mm。
[0058]另外，各孔的形状如图3所示，开口部为一边3.3mm的四边形，深度为12_，底部的曲率半径为1.5mm，孔容量为108.4 μ L0
[0059]另外，开口侧部分41的深度为8.8mm，底部侧部分42和过渡部分43的合计深度为
3.2mm，深度之比为15:4。
[0060]使用等离子体处理装置(BRANS0N/IPC公司制SERIES7000)对得到的板进行等离子体处理(氧等离子体10分钟)，对板表面赋予润湿性。
[0061]接着，在用着色树脂进行了遮光的聚丙烯容器中，将水溶性树脂B1SURFINE (R) -AffP (东洋合成工业株式会社制)溶解于25容量％乙醇水溶液中，制备0.3重量％的水溶性树脂溶液。利用自动分注机(Molecular Devices公司制、AquaMax 2000)，在上述的板上在每I孔中加入80 μ L上述的水溶性树脂溶液，浸渍3秒。
[0062]其后，用该自动分注机将溶液吸引除去，以25°C—次干燥17小时。
[0063]接着，用UV灯照射250nm的UV光1.0mff/cm2X 30秒，使水溶性树脂固化。
[0064]其后，用超纯水反复清洗3次并干燥后，以吸收线量5.SkGy照射γ射线(RADIAINDUSTRY C0.，LTD.)，得到培养容器(板)。
[0065](比较例I)
[0066]除了作为成形品使用市售的微孔板之外，按照与实施例1相同的工序得到培养容器(板)。作为市售的微孔板，使用Greiner公司制的781101。形状为横向127.7mm、纵向85.5mm、高度14.4臟，孔的开口部为一边3.7mm的四边形。孔的形状为仅由开口侧部分41构成的大致多棱锥台形状，深度为11.5mm，具有约1°的抽出梯度，底面为不具有过渡部分43和底部侧部分42的、一边3.3mm的四边形的平面。
[0067]对实施例1和比较例I中得到的培养容器，进行以下的评价。
[0068](I)使用HepG2细胞(来自人肝癌的细胞)的细胞凝集块形成
[0069]根据细胞凝集块培养的培养期间的细胞的营养要求、以及由于培养中的培养基蒸发的影响，需要50 μ L/孔以上的培养液量，因此，在以下的评价中以培养液量50 μ L/孔进行。
[0070]将预先用90mmΦ的培养盘进行培养并增殖的HepG2细胞以2X 103cells/mL的浓度分散于培养液(杜尔贝科改性MEM+10 %胎牛血清)中，制备细胞悬浊液。
[0071]将上述的细胞悬浊液以每50 μ L/孔分注于由透明树脂形成的板的全部孔中，在37°C、5% CO2氛围下培养3天。
[0072]3天后，通过显微镜观察评价各孔的细胞凝集块的状态。
[0073]结果，在实施例1中，在板的全部孔中观察到单一的细胞凝集块。而在比较例I中，在I个孔内观察到多个细胞凝集块。
[0074]对于得到了单一的细胞凝集块的由实施例1得到的培养容器，进行以下的评价。
[0075](2)使用HepG2细胞的细胞凝集块的利用荧光素酶活性测定的细胞数计数
[0076]将H印G2细胞以2X 103cells/mL的浓度分散于培养液(杜尔贝科改性MEM+10%胎牛血清)，制备细胞悬浊液。
[0077]以每50 μ L/孔分注于由上述的着色树脂形成的白色板上，在37°C、5% CO2氛围下培养3天。
[0078]3天后，按照制品添加的说明，添加与培养液等量的Promega公司的Cel ITiter-Glo (TM) Luminescent Cell Viability Assay (Promega公司制)，测定与每孔的细胞内ATP量成比例的发光量。
[0079]另外，以η = 384进行评价，由预先测定的标准曲线求出细胞数。
[0080]在实施例1中，相对于初始细胞数1000个，细胞数平均值为4810个，CV值为9.5%，确认了均匀的细胞的增殖。
[0081]另外，在每孔中加入不同的药剂时，可以评价药剂对细胞增殖的影响，利用本实施方式的微孔板，能够从细胞凝集块的形成起、至药效评价的筛选止，不移动细胞凝集块地进行。因此，即使为使用大量样本的筛选，也能够迅速地进行评价。
[0082]产业上的可利用性
[0083]由于本发明的微孔板具备具有适宜形状的孔，因此，可以良好地进行细胞凝集块的形成，并且能够确保充分的孔容量。
[0084]符号说明
[0085]I微孔板
[0086]2 孔
[0087]3 开口
[0088]4 空间
[0089]41开口侧部分
[0090]42底部侧部分
[0091]43过渡部分
【主权项】
1.一种微孔板，具备具有在一个面开放的开口的孔，所述微孔板的特征在于: 所述孔划定从所述开口向所述微孔板的内部形成的空间，所述空间具有开口侧部分、从所述开口侧部分向所述微孔板的内部形成的底部侧部分、和将开口侧部分(41)与底部侧部分(42)平滑地连接的过渡部分(43)， 所述开口侧部分的横截面呈多边形， 所述底部侧部分以朝向内部横截面积逐渐减小的方式形成。
2.如权利要求1所述的微孔板，其特征在于: 所述开口侧部分的深度与所述底部侧部分和过渡部分的合计深度之比为3:1?4:1。
3.如权利要求1或2所述的微孔板，其特征在于: 所述开口侧部分的与所述开口平行的截面为四边形、五边形或六边形的任一种。
4.如权利要求1?3中任一项所述的微孔板，其特征在于: 所述底部侧部分的与所述开口平行的截面为圆形。
5.如权利要求1?4中任一项所述的微孔板，其特征在于: 所述孔的数量为384个以上。
【专利摘要】本发明的目的在于提供一种能够良好地形成细胞凝集块、并且确保充分的孔容量的微孔板，该微孔板具备具有在一个面开放的开口的孔，上述孔划定从上述开口向上述微孔板的内部形成的空间，上述空间具有开口侧部分、从上述开口侧部分向上述微孔板的内部形成的底部侧部分、和将开口侧部分(41)与底部侧部分(42)平滑地连接的过渡部分(43)，上述开口侧部分的横截面呈多边形，上述底部侧部分以朝向内部横截面积逐渐减少的方式形成。
【IPC分类】C12M1-00, C12M1-32
【公开号】CN104619826
【申请号】CN201380047519
【发明人】塚田亮平, 大久保春男
【申请人】住友电木株式会社
【公开日】2015年5月13日
【申请日】2013年9月10日
【公告号】EP2896684A1, US20150184119, WO2014042162A1