作为 加热部600,例如，可例示热源及加热块、加热器、电磁加热用的线圈等。作为加热部600的 形状，是能够插入到管200的形状、或与管200的侧面接触的形状等，只要能够加热管200 内的液体，就可以是任意的形状。
[0168] 被加热部600加热的管200的部分包括管200的长边方向中配置有蜡的第3塞子 30存在的部分。可以包括第4塞子存在的部分。加热部600可以加热包括第4塞子40存 在的部分在内的管200的其它部分。
[0169] 在图12所示的核酸提取装置3100中，作为加热部600,具备与支板310并列设置 的对包括管200的第4塞子40的位置进行加热的加热器610。加热器610具有与管200的 外周的一半左右接触的形状。
[0170] 核酸提取装置3100即使在用第2塞子20的第1清洗液和第6塞子60的第2清 洗液中的至少一方进行清洗而减少了吸附于磁性粒子M的核酸的量的情况下，也能够使充 分量的核酸溶出到第4塞子40的溶出液。由此，能够提高清洗效果，并且能够使对于PCR 而言足够浓度的核酸溶出到溶出液中。
[0171] 实施例
[0172] 以下对实施例进行说明，进一步详细说明本发明，但本发明完全不受以下的实施 例限定。
[0173] <实验例1 >
[0174] 向内径1mm的中空的聚丙烯管依次填充乙醇（25 yL)、阻隔层（25 yL)、纯水 (lyL)。作为阻隔层，使用动力粘度为2cSt(25°C)的硅油（信越化学公司制）、矿物油 (SIGMA公司制）或者熔点为60~62°C的固体石蜡（和光纯药公司制）。在已填充的管的 两端安装栓并在30°C静置。其后，保存1、2、6周，评价乙醇是否透过阻隔层而混入纯水。
[0175] 作为评价方法，利用乙醇阻碍RT-PCR的现象。即，保存规定时间后，仅取出被填 充到管中的纯水部分，添加到根据常规方法制成的RT-PCR试剂的冷冻干燥物中，充分混 合。其后，添加预先实施过提取?精制的流感A病毒RNA并进行RT-PCR。应予说明，RT-PCR 与ClinicaChimicaActa413(2012) 1742-1745中记载的方法同样地实施。将硅油和固体 石蜡的保存1周后的结果示于图13,将矿物油的保存1周后的结果示于图14,将固体石蜡 的保存2周后的结果示于图15,将固体石蜡的保存6周后的结果示于图16。阳性对照是使 用了临时制备的纯水而得到的结果。
[0176] 其结果，就硅油和矿物油而言，如果将管在30°C保存1周，则乙醇会透过而溶入纯 水，但使用固体石蜡作为阻隔层时，即便在管中以30°C保存6周，也能够防止乙醇的透过。
[0177] 由此可见，通过使用固体石蜡作为阻隔层，即便预先将前处理试剂填充到一根中 空的管中长时间保存，也能够使各试剂成分不分散，以具有所希望的功能的状态稳定保存。
[0178] <实施例2>
[0179]实验例2中，使用核酸提取装置（图17B)，用使用了固体石蜡的核酸提取设备（图 17A)进行前处理。
[0180] 第1塞子10、第3塞子30、第5塞子50和第7塞子70由熔点为60~62°C的固体 石蜡（和光纯药公司制）构成。第2塞子20为第1清洗液（70%乙醇）。第6塞子60为 第2清洗液（lmM柠檬酸缓冲液pH4. 0)。第4塞子40为溶出液（纯水）。
[0181] 首先，为了使固体石蜡液化，将核酸提取设备的管200安装于图17(B)所示的能够 加热第1塞子10、第3塞子30、第5塞子50和第7塞子70部分的加热器620、630、640,加 热到82°C。
[0182] 接下来，在容量3mL的聚乙烯制容器中收容700 y L的吸附液和2 y L的磁珠分散 液。作为吸附液的组成，是3M的硫氰酸胍、1质量％的聚氧乙烯失水山梨醇单月桂酸酯、 25mM的Tris-HCl (pH7. 2)和50%的乙醇的水溶液。另外，磁珠分散液使用400mg/mL的浓 度的溶液。
[0183] 使用移液管从容器120的开口 121加入含有流感A阳性检体（鼻腔擦拭液）的溶 液150 y L，对容器120装上盖，用手振摇30秒钟进行搅拌。其后，取下容器120的盖122， 与管200连接。应予说明，由于在管200的两端安装有栓110,所以取下第1塞子侧的栓而 将容器120与管200连接。
[0184] 然后，用手移动永久磁石，将容器内的磁珠M导入管200内。然后，边摇动磁珠，边 使其移动至第6塞子。磁珠M在管200内的各塞子中存在的时间大致如下所述。第1、3、5 塞子：各3秒，第2塞子：20秒，第4塞子：30秒，第6塞子：20秒。应予说明，在第7塞子 中，不进行振动磁珠等的操作。另外，第2塞子、第6塞子和第4塞子的体积大致为25 y L、 25 y L 和 1 y L。
[0185] 接着，利用永久磁石移动磁珠而使其退避到第2塞子后，取下管的第7塞子侧的 栓，用手使容器变形，使第4塞子和第5塞子排出到容器。
[0186] 接着，进行实时 RT-PCR。RT-PCR 是根据 CDC protocol of realtime RTPCR for swine influenzaA(HlNl)实施的。即，制备含有0.8yM正向引物、0.8yM反向引物、 0.2uM 探针、lxSuperScript III RT/Platimun Taq Mix、lxPCR Master Mix 的溶液 9yL， 向其中加入先前排出的溶出液1 UL并进行搅拌后，按照下述操作指南进行RT-PCR。
[0187] 逆转录：50 °C 30分钟
[0188] Taq 活化：95 °C 2 分钟
[0189] PCR ： 95°C 15 秒-55°C 30 秒 50 次循环
[0190] 引物：正向引物：GAC CAA TCC TGT CAC CTC TGA C
[0191] 反向引物：AGG GCA ITT TGG ACA AAG CGT CTA
[0192] 探针：TaqMan 探针：FAM-TGC AGT CCT CGC TCA CTG GGC ACG-TAMRA
[0193] 将以n = 3实施的实验结果示于图18。由图18可知使用该装置，可无问题地提取 流感A病毒的RNA，并利用RT-PCR对其进行检测。
[0194] 符号说明
[0195] 10…第1塞子，20…第2塞子，30…第3塞子，40…第4塞子，50…第5塞子，60… 第6塞子，70…第7塞子，100…管部，110…栓，120…容器，121…开口，122…盖，130…储 液部，131…开口，132…盖，200…管，210…突出部，300…安装部，310…支板，320…夹子机 构，330…铰链，340…导轨，350…驱动带，360…移动机构，400…磁力施加部，410…永磁铁， 420…马达，500…移动机构，600…加热部，610、620、630、64(>..加热器，1000、1020、1030、 1040、1100…核酸提取用设备，2000…核酸提取用试剂盒，3000、3100…核酸提取用装置， M…磁性粒子。
【主权项】
1. 一种核酸提取用设备，具有管部，该管部具有长边方向，在内部依次配置有由蜡或油 构成的第1塞子、由第1清洗液构成的第2塞子、由蜡构成的第3塞子、由溶出液构成的第 4塞子以及由蜡或油构成的第5塞子。
2. 根据权利要求1所述的核酸提取用设备，其中，在第3塞子与第4塞子之间，从第3 塞子侧具有由第2清洗液构成的第6塞子、由蜡或油构成的第7塞子。
3. 根据权利要求1或2所述的核酸提取用设备，其中，所述蜡为固体石蜡。
4. 根据权利要求1~3中任1项所述的核酸提取用设备，其中，所述蜡的熔点为41°C 以上。
5. 根据权利要求2所述的核酸提取用设备，其中，第7塞子为蜡。
6. 根据权利要求1~5中任1项所述的核酸提取用设备，其中，第1塞子和第5塞子为 赌。
7. 根据权利要求1~6中任1项所述的核酸提取用设备，其中，所述管部的第5塞子侧 的端部开放。
8. 根据权利要求7所述的核酸提取用设备，具有密封所述管部的第5塞子侧的端部的 可自由拆卸的栓。
9. 根据权利要求1~8中任1项所述的核酸提取用设备，在所述管部的第1塞子侧的 端部具有可自由拆卸的容器， 所述容器的内部与所述管部的内部连通。
10. 根据权利要求9所述的核酸提取用设备，其中，所述容器具有挠性， 通过使所述容器在与所述管部连接的状态下变形，能够对所述管部的内部加压。
11. 根据权利要求1~10中任1项所述的核酸提取用设备，在所述管部的第1塞子侧 的端部具有储液部。
12. 根据权利要求11所述的核酸提取用设备，进一步具有密封所述管部的所述储液部 侧的端部的可自由拆卸的栓。
13. 根据权利要求12所述的核酸提取用设备，其中，所述储液部具有挠性， 通过使所述储液部在用所述栓密封所述储液部的状态下变形，能够对所述管部的内部 加压。
14. 根据权利要求1~13中任1项所述的核酸提取用设备，其中，所述溶出液含有选自 逆转录酶、dNTP和逆转录用引物中的至少1个。
15. 根据权利要求1~14中任1项所述的核酸提取用设备，其中，所述溶出液的体积为 0· 5 μ L ~3. 0 μ Lo
16. 根据权利要求1~15中任1项所述的核酸提取用设备，其中，所述管部的内径为 0. 5mm ~3. Omnin
17. -种核酸提取用设备，具有管部，该管部具有长边方向，在内部配置有由蜡或油构 成的第1塞子、由水性溶液构成的第2塞子。
18. -种核酸提取用设备，具有管部，该管部具有长边方向，在内部交替配置有由多种 蜡或油构成的塞子、由多种水性溶液构成的塞子。
19. 根据权利要求17或18所述的核酸提取用设备，其中，所述管部的内径为0. 5mm~ 3. Omm0
【专利摘要】本发明提供能够缩短用于核酸扩增的核酸的分离所需的时间且保存性好的核酸提取用设备。本发明涉及的核酸提取用设备具有管部，该管部具有长边方向，内部依次配置有由蜡或油构成的第1塞子、由第1清洗液构成的第2塞子、由蜡构成的第3塞子、由溶出液构成的第4塞子以及由蜡或油构成的第5塞子。
【IPC分类】C12M1-24
【公开号】CN104651222
【申请号】CN201410583849
【发明人】花村雅人, 井手上公太郎
【申请人】精工爱普生株式会社
【公开日】2015年5月27日
【申请日】2014年10月27日
【公告号】US20150118743