用于人胚胎肾细胞高密度大规模悬浮培养的培养基及其制备方法和用图
【技术领域】
[0001] 本发明涉及生物医药技术领域，具体涉及一种采用透析血清高密度大规模悬浮培 养人胚胎肾细胞HEK293S GnH_的培养基及其制备方法和用途。
【背景技术】
[0002] 人胚胎肾细胞HEK293S是一种适用于悬浮培养的理想哺乳动物细胞，而HEK293S GnlT细胞为N端修饰后的糖基均一化的293S细胞，首先由美国MIT科学家在2002年建立 起来的，其特点是所表达的蛋白质动态构象相对简单、单一，特别适用于结构生物学及新药 开发等研究工作，例如：GPCRs的结构解析及对应的的药物开发。
[0003] 目前，HEK293S GnlT细胞培养通常使用的基本培养基为DMEM(Dulbeccc^ s modified eagle medium),在添加胎牛血清后进行大规模培养。然而，由于胎牛血清的组成 复杂，特别是它含有的各种氨基酸势必造成培养基氨基酸组成含量的不确定以及浓度的稀 释。因此，对需要明确氨基酸含量的蛋白样品制备，则必须使用经过透析后的血清，以保证 培养基氨基酸组成和含量的确定。但使用透析血清可造成细胞生长密度低、培养周期长等 问题，从而导致了最终的蛋白产量过低，难于满足工作的需求。目前唯一的解决办法就是增 大培养体积，但这势必大大增加了培养成本。因此，通过提高细胞在透析血清生长环境中的 生长密度以增加蛋白质产量，从而达到降低成本就成了目前急迫需要解决的难题。
【发明内容】
[0004] 本发明的目的在于，为人胚胎肾（HEK)293S Gnir细胞在透析血清培养环境中的 大规模悬浮培养，提供一种能使人胚胎肾细胞高密度生长的培养基，即本发明提出了一种 用于人胚胎肾细胞高密度大规模悬浮培养的确定组成的培养基，其组成成分包括氨基酸、 维生素、无机盐和其他成分，各组成成分及相应的含量包括如下：
[0005]
【主权项】
1. 一种用于人胚胎肾细胞高密度大规模悬浮培养的培养基，其特征在于，其组成成分 包括多种氨基酸、维生素、无机盐和其他成分，所述组成成分及含量范围如下： 所述氨基酸包括： L-ffiM酸 50-200 mg/L 1_-.1'.,暖￥酸 20-300 mg/L 3fM00mg/L L-11'??? 10-50 mg/L 酸 40-200 mg/L. L-4?? 酸 50-600mg/L 50-600 nig/L L-赖氣_ 90-I000tng/L L- Φ 硫 (酸 20-3 CM) mg/L L-笨内▼ ￥ _ 30-400 mg/L KWOOmgiL 50-300 mg/L L-GiMffi 10-200 mg/L L-酪氨ft 50-600 mg/L L?_M_ 50-300 mg/L 所述维生素包括： 泛酸侧 2-8 rag/L M化Iliii 3-10 mg/L 叶酸 2-5 mg/L 肌醇 5-15 mg/L 烟酸靈 2-5 mg/L 维生素 B6 2-10 mg/L 维4:索 B2 0.1-0.5 mg/L 维 1·:索 BI 2-10 mg/L 所述无机盐包括： CaCl2OH2O 20.6-30 mg/L Fc(N03X；?9 H2O 0.1-2 mg/L MgS04*7 H2O 150-300 mg/L KCl 300-500 mg/L NaCI 6400 mg/L NaH2P〇4*2 H2O _-200mg/L 柠朦f?铁 5-15 mg/L NaF 2-10 mg/L FcS04*7H20 2-10 mg/L MgCi2^H2O 40-80 mg/L CuS〇4?5H20 0.001-0.0! mg/L Na2HPO4* 12H20 150-300 mg/L ZnS04?7H20 0.2-1.0 mg/L €#丨酸钠 0.003-0.01 mg/L NaHCO3 3700 mg/L 所述其他成分包括： #1 萄糖 4500 mg/L 酸红钠 15 mg/L WS帽I 钠 70-140 mg/L AlbuMAX 〖（Lipid-rich BSA) 300-600 mg/L GIutaMAX supplement 500-600 mg/L 50-60 mg/L Pluronic acid F-68 1000-2000 mg/L 〇-
2.如权利要求1中所述的培养基，其特征在于，其组成成分包括确定含量的多种氨基 酸、维生素、无机盐和其他成分： L-精氨酸 84 mg/L L-率魏氨'酸 63 mg/L L-谷氨酸 88 mg/L L-酸 30 mg/L L-fR-M.?? 42 mg/L 1^汁*试酸 iOSmg/L 1--?? 酸 105 mg/L L-IIM酸 146 mg/L L-iFfttft 酸 30mg/L U#；lAiM酸 66 mg/L L-MMiI 42 mg/L L-苏酸 95 mg/L L-色M酸 16 mg/L HSMflI 97 mg/L L-顯M酸 94 mg/L 所述维生素包括： 泛酸ts 4 mg/L M化IlH喊 4 mg/L H窗 4 mg/L MftV 7.2 mg/L 烟隱胺 4 mg/L 维 泰 B6 4 mg/L 维B2 0.4 mg/L 维4:? BI 4 mg/L 所述无机盐包括： CaCl2OH2O 20,6 mg/L Fe(NO3)3^ H2O 0.1 mg/L MgS04*7 H2O 200 mg/L KCl 400 mg/L NaCl 6400 mg/L NaH2P〇4*2 H2O 142 mg/L 衧1蒙_铁 6.1 mg/L NaF 4.2 mg/L FcS04*7H20 3.4 mg/L MgC]2*6H2〇 61 mg/L CuS〇4*5H2〇 0.001 mg/L Na2HPO4* 12H20 178.8 mg/L ZnS04*7H20 0.432 mg/L 0.005 mg/L NaHCCb 3700 mg/L 所述其他成分包括： 偏.糖 45 00 nig/ L 酚红钠 15 mg/L WiW梭钠 110 mg/L AlbuM AX 1 400 mg/L GlulaMAX supplement 521,328 mg/L 肝岽钠 50 mg/L Pluronic acid F-68 HMK) mg/ L,:
3. 如权利要求1所述的培养基，其特征在于，在细胞培养96小时后，在所述培养基中进 一步添加葡萄糖、ZnCl2、氨基酸的混合液。
4. 如权利要求1-3之任何一项所述的培养基的制备方法，其特征在于，将权利要求1或 2所述的各组成成分溶解后在20-30°C下混合，调节所述混合液的PH值至7,然后，通过滤膜 无菌过滤后即可使用。
5. 如权利要求1-3之任何一项所述培养基的应用，其特征在于，所述培养基用于在IkD 截留的透析后胎牛血清中的人胚胎肾细胞培养。
6. 如权利要求5所述的应用，其特征在于，所述培养基的使用条件为：温度37°C，CO2浓 度5%，相对湿度> 70%。
【专利摘要】本发明公开了一种用于人胚胎肾细胞高密度大规模悬浮培养的培养基及其制备方法和用途，其包括多种氨基酸、维生素、无机盐和其他等组成成分，促使HEK293S GnTl-细胞的高密度旺盛生长，既降低样品制备成本，又适用于制备含有昂贵标记氨基酸的蛋白样品，是极具有商业价值的真核细胞培养基。
【IPC分类】C12N5-073, C12N5-02
【公开号】CN104651297
【申请号】CN201310582562
【发明人】赵欣, 曹胜魁
【申请人】华东师范大学
【公开日】2015年5月27日
【申请日】2013年11月19日