一种多肽合成方法
【技术领域】
[0001]本发明涉及多肽的合成，特别是涉及一种多肽液相合成方法，属于生物技术领域。
【背景技术】
[0002]随着人们对多肽药物的需求逐渐增加，对化学家，特别是药物化学家而言，如何高效合成廉价的多肽药物，是一个亟待解决的技术问题。
[0003]随着科技水平的提高和人类对多肽的重视与研发，越来越多的多肽药物被开发应用于临床，为提高人类健康水平和治疗、预防疾病，提供高效安全的新型药物和疫苗。多肽的化学合成已经成为获得多肽药物的最重要途径。
[0004]目前，液相合成多肽是合成短肽及片段肽的非常高效廉价的制备手段，而结合固相合成和液相合成优点的片段缩合工艺，与液相合成多肽的方法相比，则更是廉价且高效。但是，采用传统的液相合成方法合成多肽时，除了必须使用保护氨基酸、缩合剂和反应溶剂(一般为有机溶剂)之外，还需要使用大量有机溶剂用于反应后的处理，常用的有机溶剂包括石油醚、乙醚、甲基叔丁基醚、乙酸乙酯、氯仿、二氯甲烷等，易污染环境。
[0005]由于必须使用大量有机溶剂，不仅提高了多肽的生产成本，而且造成非常严重的环境污染，因此，如何降低液相合成多肽的成本和减少对环境的污染，是本领域亟待解决的技术问题。
【发明内容】
[0006]为了克服上述【背景技术】的不足，本发明的目的在于提供一种多肽合成方法，其能够大幅度降低多肽的生产成本，并减少因大量使用有机溶剂而对环境造成的污染。
[0007]为了实现上述发明目的，本发明采取的技术方案为:
一种多肽合成方法，其包括以下步骤:将氨基酸衍生物置于N，N-二甲基甲酰胺中缩合，将反应溶液加入水中，析出固体后，经过滤、洗涤、干燥，得到中间体，脱除所述中间体的氨基保护基后加入水中，并调节溶液酸碱性，将脱除氨基保护基的中间体析出，干燥；将所述脱除氨基保护基的中间体与待缩合的氨基酸衍生物置于N，N- 二甲基甲酰胺中缩合，然后重复上述过程，直至得到全保护多肽，再脱除所述全保护多肽的保护基，得到目标多肽。
[0008]作为优选实施方案之一，所述中间体的氨基保护基包括叔丁氧羰基和9-芴甲氧羰基，采用三氟乙酸脱除叔丁氧羰基，采用哌啶和DMF的混合溶液脱除9-芴甲氧羰基。
[0009]优选的，将脱除叔丁氧羰基后的反应溶液加入水中，再通过弱碱来调节溶液酸碱性，使脱除叔丁氧羰基的中间体析出，然后过滤、洗涤、干燥。
[0010]优选的，将脱除9-芴甲氧羰基后的反应溶液加入水中，再通过弱酸来调节溶液酸碱性，使脱除9-芴甲氧羰基的中间体析出，然后过滤、洗涤、干燥。
[0011]与现有技术相比，本发明的优点如下:
本发明避免大量使用有机溶剂进行反应后的处理，改用水作为析出保护多肽中间体的溶剂。本发明适用于规模化生产小分子多肽，不需大规模改变原有工艺，只需在合成环节中采用易溶于水的N，N-二甲基甲酰胺(DMF)作为反应溶剂，在脱除氨基保护基的过程中，选用易溶于水的三氟乙酸(TFA)来脱除叔丁氧羰基(Boc)，选用哌啶和DMF的混合溶液来脱除9-芴甲氧羰基(Fmoc)。因此，本发明不仅能够大幅度降低多肽的生产成本，而且能够减少因大量使用有机溶剂而对环境造成的污染。
【具体实施方式】
[0012]下面结合实施例对本发明作进一步的详细描述。
[0013]本发明实施例提供的多肽液相合成方法，包括以下步骤:将氨基酸衍生物置于N，N-二甲基甲酰胺(DMF)中缩合，将反应溶液加入水中，析出固体后，经过滤、洗涤、干燥，得到中间体，脱除所述中间体的氨基保护基后加入水中，并调节溶液酸碱性，将脱除氨基保护基的中间体析出，干燥；将所述脱除氨基保护基的中间体与待缩合的氨基酸衍生物置于N，N-二甲基甲酰胺(DMF)中缩合，然后重复上述过程，直至得到全保护多肽，再脱除所述全保护多肽的保护基，得到目标多肽。
[0014]其中，所述中间体的氨基保护基包括叔丁氧羰基(Boc)和9-芴甲氧羰(Fmoc)，采用三氟乙酸(TFA)脱除叔丁氧羰基(Boc)，采用哌啶和DMF的混合溶液脱除9-芴甲氧羰基(Fmoc)。将脱除叔丁氧羰基(Boc)后的反应溶液加入水中，再通过弱碱来调节溶液酸碱性，使脱除叔丁氧羰基(Boc)的中间体析出，然后过滤、洗涤、干燥。将脱除9-芴甲氧羰基(Fmoc)后的反应溶液加入水中，再通过弱酸来调节溶液酸碱性，使脱除9-芴甲氧羰基(Fmoc)的中间体析出，然后过滤、洗涤、干燥。
[0015]反应过程的具体实施通式如下:
I号保护氨基酸+2号保护氨基酸一在二甲基甲酰胺(DMF)中缩合一全保护二肽溶液一加入纯水中析出全保护二肽(固体)一过滤洗涤得到全保护二肽(纯化的保护二肽)一干燥，脱除全保护二肽的氨基保护基一脱除氨基保护基的侧链保护二肽溶液一加入纯水中并用弱酸(或弱碱)调节溶液酸碱性使侧链保护二肽析出完全一过滤洗涤得侧链保护二肽一干燥，与3号保护氨基酸缩合一过程循环一得全保护多肽一脱除保护基一多肽。
[0016]以上所述仅为本发明的较佳实施例，并不用以限制本发明，凡在本发明的精神和原则之内，所作的任何修改、等同替换、改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。
【主权项】
1.一种多肽合成方法，其特征在于，该方法包括以下步骤:将氨基酸衍生物置于N，N-二甲基甲酰胺中缩合，将反应溶液加入水中，析出固体后，经过滤、洗涤、干燥，得到中间体，脱除所述中间体的氨基保护基后加入水中，并调节溶液酸碱性，将脱除氨基保护基的中间体析出，干燥；将所述脱除氨基保护基的中间体与待缩合的氨基酸衍生物置于N，N- 二甲基甲酰胺中缩合，然后重复上述过程，直至得到全保护多肽，再脱除所述全保护多肽的保护基，得到目标多肽。
2.如权利要求1所述的多肽液相合成方法，其特征在于，所述中间体的氨基保护基包括叔丁氧羰基和9-芴甲氧羰基，采用三氟乙酸脱除叔丁氧羰基，采用哌啶和DMF的混合溶液脱除9-芴甲氧羰基。
3.如权利要求2所述的多肽液相合成方法，其特征在于，将脱除叔丁氧羰基后的反应溶液加入水中，再通过弱碱来调节溶液酸碱性，使脱除叔丁氧羰基的中间体析出，然后过滤、洗涤、干燥。
4.如权利要求2所述的多肽液相合成方法，其特征在于，将脱除9-芴甲氧羰基后的反应溶液加入水中，再通过弱酸来调节溶液酸碱性，使脱除9-芴甲氧羰基的中间体析出，然后过滤、洗涤、干燥。
【专利摘要】本发明公开了一种多肽合成方法，其包括以下步骤：将氨基酸衍生物置于N，N-二甲基甲酰胺中缩合，将反应溶液加入水中，析出固体后，经过滤、洗涤、干燥，得到中间体，脱除所述中间体的氨基保护基后加入水中，并调节溶液酸碱性，将脱除氨基保护基的中间体析出，干燥；将所述脱除氨基保护基的中间体与待缩合的氨基酸衍生物置于N，N-二甲基甲酰胺中缩合，然后重复上述过程，直至得到全保护多肽，再脱除所述全保护多肽的保护基，得到目标多肽。本发明避免大量使用有机溶剂进行反应后的处理，改用水作为析出保护多肽中间体的溶剂，能够大幅度降低多肽的生产成本，而且能够减少因大量使用有机溶剂而对环境造成的污染。
【IPC分类】C07K1-06, C07K1-02
【公开号】CN104725463
【申请号】CN201510072355
【发明人】袁建新
【申请人】南通奥斯特鞋业有限公司
【公开日】2015年6月24日
【申请日】2015年2月12日