一种鼠灰链霉菌及其应用
【技术领域】
[0001] 本发明属于微生物领域，具体涉及一种鼠灰链霉菌及其应用。
【背景技术】
[0002] 油茶（Camellia oleifera Abel)属山茶科山茶属常绿小乔木或灌木，是我国特 有的木本油料树种，与椰子、油棕、油橄榄并称"世界四大木本油料树种"。茶油具有很高 的药用、食用、生态和经济价值，是世界上极为珍贵的保健植物食用油之一。我国是油茶 资源大国，现有油茶栽培面积3400万亩，主要分布在长江流域及其以南的18个省（区、 市），海南省现有油茶面积约2万亩，主要分布于海南中部地区，其中五指山市占海南油茶 面积的80%。随着国家对油茶产业的重视，油茶栽种面积也与日俱增，因而带来的病害种 类繁多，其危害程度也愈发严重。每年因病害而造成的经济损失巨大，其中油茶叶枯病是 一种常见的重要病害，在海南发生尤为严重。其病原是小孢拟盘多毛孢（Pestalotiopsis microspora)。油茶叶枯病主要危害叶片，叶片染病后，常提早脱落，新稍出现枯死现象，导 致油茶产量大幅下降。由该菌引起的病斑形状不规则，红褐色至灰褐色，病斑连片而成大枯 斑，病斑背面有肉眼可见的黑色小颗粒，该病菌也侵害油茶果实，使得果实表层产生褐色斑 块。
[0003] 目前，油茶病害的防治主要是化学防治，但长期使用化学杀菌剂，不仅影响茶果的 品质，还导致病菌抗药性的产生，而且加大用药剂使用量，又会增加生产成本和农药残留 量，影响生态环境，破坏生态平衡。人们越来越重视食物链中化学残留物对人类健康的影 响，要求降低果蔬产品农药用量，许多生产上常用的杀菌剂已被明令禁止使用。因此，寻求 安全、无毒、有效的控制植物病害的新方法成为当务之急。目前利用拮抗微生物防治植物病 害有望成为代替化学药剂的一种安全、无毒、有效的新方法。为了寻求安全、有效和无污染 的新方法，人们把目光转向了生物防治，其中研宄和利用生防菌是一条重要的思路，对于替 代或减少化肥和农药的使用，改善农业生态系统，保持植物微生态系统的生物多样性，以及 维护农田生态平衡实现农业可持续发展将起到重要作用。
【发明内容】
[0004] 本发明的目的是针对当前技术空白，提供一种鼠灰链霉菌，能够有效抑制油茶叶 枯病菌的生长和孢子萌发，防效显著，无污染，环境安全性好，且对其他病菌：尖孢镰刀菌 (Fusarium oxysporum)、可可毛色二抱菌（Lasiodiplodia theobrcymae)、菜豆间座壳菌 (Diaporthe phaseolorum)、狗尾草平脐懦孢菌（Bipolaris setariae)、弥泽那拟盘多毛孢 菌（Pestalotiopsis menezesiana)等也具有良好的抑制效果。
[0005] 本发明的第一个方面是提供鼠灰链霉菌，命名为鼠灰链霉菌（Streptomyces murinus)FXQ-5B，于2014年10月16日保藏于中国典型培养物保藏中心，地址为湖北省武 汉大学，保藏号为CCTCC M2014487。
[0006] 所述鼠灰链霉菌FXQ-5B的16S rDNA的序列如SEQ ID NO. 1所示。
[0007] 本发明的第二个方面是提供本发明第一个方面所述的鼠灰链霉菌FXQ-5B在制备 诘抗小孢拟盘多毛孢菌（Pestalotiopsis microspora)中制剂中的应用。
[0008] 本发明的第三个方面是提供本发明第一个方面所述的鼠灰链霉菌FXQ-5B在制备 防治油茶叶枯病病菌制剂中的应用。
[0009] 本发明第四个方面是提供本发明第一个方面所述的鼠灰链霉菌FXQ-5B在制备抑 制油茶叶枯病菌菌丝分生孢子萌发的制剂中的应用。
[0010] 本发明的第五个方面是提供本发明第一个方面所述的鼠灰链霉菌FXQ-5B在制备 抑制和/或致畸油茶叶枯病菌菌丝制剂中的应用。
[0011] 本发明的第六个方面是提供本发明第一个方面所述的鼠灰链霉菌FXQ-5B在制备 抑制尖抱镜刀菌（Fusarium oxysporum)、可可毛色二抱菌（Lasiodiplodia theobrcymae)、 菜豆间座壳菌（Diaporthe phaseolorum)、狗尾草平脐懦孢菌（Bipolaris setariae)、弥泽 那拟盘多毛孢菌（Pestalotiopsis menezesiana)病原菌菌丝生长的制剂中的应用。
[0012] 本发明的第七个方面是提供一种抑制小孢拟盘多毛孢的发酵液，将本发明第一个 方面所述的鼠灰链霉菌FXQ-5B置于液体高氏一号培养基里，25-32°C培养5-10d，即得。
[0013] 优选地，在将鼠灰链霉菌FXQ-5B置于液体高氏一号培养基里之前，先将鼠灰链霉 菌FXQ-5B接种于固体高氏一号培养基上，于25-32°C培养3-8d。
[0014] 本发明提供的菌株，经多项分类鉴定，确定为鼠灰链霉菌的一个新种，暂命名 为鼠灰链霉菌 FXQ_5B(Streptomyces murinus sp. FXQ-5B)，已于 2014 年 10 月 16 日在 中国典型培养物保藏中心（CCTCC)进行了菌种保藏，并证明存活，其保藏登记号为CCTCC M2014487,地址为中国湖北武汉大学。
[0015] 本发明提供的鼠灰链霉菌FXQ-5B，能够有效抑制油茶叶枯病菌的生长和孢子萌 发，防效显著，无污染，环境安全性好，且对其他病菌尖孢镰刀菌（Fusarium oxysporum)、可 可毛色二抱菌（Lasiodiplodia theobrcymae)、菜豆间座壳菌（Diaporthe phaseolorum)、 狗尾草平脐懦孢菌（Bipolaris setariae)、弥泽那拟盘多毛孢菌（Pestalotiopsis menezesiana)等也具有良好的抑制效果。具有广谱抗病性，对油茶及其他病害的防治具有 重大而深远的意义。
【附图说明】
[0016] 图1为本发明提供的灰链霉菌FXQ-5B的平板菌落形态图；
[0017] 图2为本发明提供的灰链霉菌FXQ-5B在显微镜（1000X)下的形态图；
[0018] 图3为本发明提供的灰链霉菌FXQ-5B对油茶叶枯病菌的拮抗效果图；
[0019] 图4为本发明提供的灰链霉菌FXQ-5B对油茶叶枯病菌丝的致畸效果图。
【具体实施方式】
[0020] 下面参照附图，结合具体的实施例对本发明做进一步的说明，以更好地理解本发 明。
[0021] 一、放线菌的筛选
[0022] 从海南文昌红树林采集土壤样品，将土样自然风干，采用梯度稀释法分离放线菌。 取一定浓度梯度的土壤稀释液IOOuL均匀涂布于高氏一号培养基上，28°C培养7d后，计数 并根据菌落形态、色泽、大小、气生菌丝有无、产色素情况等特点，对分离到的放线菌菌落进 行编号。同时，在高氏平板上纯化有编号的菌株，纯化培养后的放线菌于高氏斜面培养基上 培养7d后，低温保存，备用。
[0023] 二、拮抗菌的初筛
[0024] 采用平板对峙培养法，在平板中央接放线菌菌饼（直径为6mm)，周围35mm处等距 离接4株同样供试病原物菌饼（直径为6mm)。以中央只接病原菌，不接放线菌做对照，每处 理重复3次，25°C培养，待各对照菌株长满平板后。观察放线菌对各菌株的抑菌效果，并进 行抑菌圈测量统计，将抑菌宽度大于20mm的8株菌株进行复筛，分别是F14、SY3-20、几6、 F20M10、JL5、FXQ-4B、JL10、FXQ15、FXQ-5B (见表 1)。筛选出最好的拮抗菌 FXQ-5B，测其广 普抑菌性的方法同上，只是病原菌及对照不同（见表2)。
[0025] 表1 土壤放线菌对油茶叶枯病菌的抑菌效果
[0026]
【主权项】
1. 一种鼠灰链霉菌，其特征在于，命名为鼠灰链霉菌（Streptomycesmurinus)FXQ-5B， 于2014年10月16日保藏在中国典型培养物保藏中心，保藏号为CCTCCM2014487。
2. 根据权利要求1所述的鼠灰链霉菌，其特征在于，其16SrDNA的序列如SEQIDNO. 1 所示。
3. -种如权利要求1所述的鼠灰链霉菌在制备拮抗小孢拟盘多毛孢菌 (Pestalotiopsismicrospora)制剂中的应用。
4. 一种如权利要求3所述的鼠灰链霉菌在制备防治油茶叶枯病病菌制剂中的应用。
5. -种如权利要求3所述的鼠灰链霉菌在制备抑制油茶叶枯病菌菌丝分生孢子萌发 的制剂中的应用。
6. -种如权利要求3所述的鼠灰链霉菌在制备防治在制备抑制和/或致畸油茶叶枯病 菌菌丝中的应用。
7. -种如权利要求1所述的鼠灰链霉菌在制备抑制尖孢镰刀菌（Fusarium oxysporum)、可可毛色二抱菌（Lasiodiplodiatheobrcymae)、菜豆间座壳菌（Diaporthe phaseolorum)、狗尾草平脐懦孢菌（Bipolarissetariae)、弥泽那拟盘多毛孢菌 (Pestalotiopsismenezesiana)病原菌的制剂中的应用。
8. -种抑制小孢拟盘多毛孢的发酵液，其特征在于，将权利要求1所述的鼠灰链霉菌 置于液体高氏一号培养基里，25-32°C培养5-10d，即得。
9. 根据权利要求8所述的发酵液，其特征在于，在将权利要求1所述的鼠灰链霉菌置于 液体高氏一号培养基里之前，先将权利要求1所述的鼠灰链霉菌接种于固体高氏一号培养 基上，于25-32°C培养3-8d。
【专利摘要】本发明提供了一种鼠灰链霉菌及其应用，所述鼠灰链霉菌命名为鼠灰链霉菌(Streptomyces murinus)FXQ-5B，于2014年10月16日保藏在中国典型培养物保藏中心，保藏号为CCTCC M2014487。鼠灰链霉菌FXQ-5B能够有效抑制油茶叶枯病菌的生长和孢子萌发，防效显著，无污染，环境安全性好，且对其他病菌如尖孢镰刀菌、可可毛色二孢菌、菜豆间座壳菌、狗尾草平脐蠕孢菌、弥泽那拟盘多毛孢菌等也具有良好的抑制效果。具有广谱抗病性，对油茶及其他病害的防治具有重大而深远的意义。CCTCC NO:M201448720141016
【IPC分类】C12N1-20, A01P3-00, C12P1-06, C12R1-465, A01N63-02, A01N63-00
【公开号】CN104726362
【申请号】CN201410832429
【发明人】牛晓庆, 朱辉, 覃伟权, 陈良秋, 余同玉
【申请人】中国热带农业科学院椰子研究所
【公开日】2015年6月24日
【申请日】2014年12月29日