一种产抗生素的链霉菌txaf2及其应用
【技术领域】
[0001] 本发明属农业技术及生物医学领域，具体设及一种产新型抗生素的链霉菌TXAF2 及应用。
【背景技术】
[0002] 我国境内由于有多样的地理环境气候，为丰富的微生物资源提供了基础。故在各 种不同缔度、海拔W及气候的地域均可能蕴藏着新的微生物菌种。一般地，通过菌株的形态 特征、培养特征W及生理生化特征等可W对微生物菌种进行分类鉴别，同时采用检测微生 物菌种的16srDNA的序列可W初步确定该菌种的分类地位。
[0003] 对在全国各地采集来的微生物菌种进行培养，在得到的代谢产物中寻找各种活性 成分，进而研究开发成各种药物(包括医药、农药、兽药等），运种技术正在被广泛应用，如用 作医用抗生素的青霉素、链霉素等，在农用、兽用方面具有防止水稻纹枯病的井冈霉素、防 治多种蛾虫和夜蛾的阿维菌素等。
【发明内容】
[0004] 本发明的目的在于提供一种产抗生素的链霉菌TXAF2。
[000引本发明的又一个目的在于提供所述产抗生素的链霉菌TXAF2的应用。
[0006] 本发明中，"产抗生素的链霉菌TXAF2"是指产广谱抗生素的链霉菌TXAF2。其中， "广谱抗生素"是指可W抑制或者杀死包括多种微生物如枯草芽抱杆菌、大肠杆菌、链球菌、 霉菌或原生动物，支原体，衣原体等生命体的一种或多种物质。
[0007] 本发明提出的一种产新型抗生素的链霉菌TXAF2属链霉菌属（S化eptomyces)，并 已于2014年12月23日在中国普通微生物保藏中屯、保藏，保藏号为CGMCC No. 10235。
[000引本发明产抗生素的链霉菌TXAF2，为发明人2014年7月3日从我国浙江桐乡稻田水 渠边采集的±壤中分离而得。该菌株形态特征、培养特征、生理生化特征及16srDNA的序列 和菌种分类结果如下：
[0009] 1、形态特征：W插片法在高氏一号琼脂上培养7天后用光学显微镜和电子显微镜 分别观察菌丝和抱子的形态，结果表明，该菌基内菌丝体无横隔、不断裂，气生菌丝体分支 细长，生长茂密，抱子丝长，顶端有2-6圈螺旋，抱子楠圆形。基内菌丝短且密集。
[0010] 2、生理生化特征及碳源利用见表1:
[0011] 表1、TXAF2菌株的生理生化特征及碳源利用
[0012]
[0013]
[0014] 3、本发明所述的链霉菌TXAF2菌株的16srDNA序列如SEQ ID N0:1所示。
[001引根据形态、生理生化特征w及lesrDNA序列分析，该菌株属于链霉菌属 (Sheptomyces)。从序列比对上来看，该产新型抗生素的链霉菌TXAF2 (Streptomyces sp.) 〔61\1〔〔齡.10235，与5化691:01117。63 31111'；[13日'6]1313 8化日;[]124对比，从163抽魁序列上来 看，存在两处的不同，故为亲缘关系较近的两个不同的种。
[0016] 本发明所述的产新型抗生素的链霉菌TXAF2,其培养方法为:在pH = 7.8,30°C下， 20化mp摇床培养48小时；培养基的组成为(wt%):葡萄糖1 %，薦糖1 %，淀粉1 %，酵母膏 〇.5%，鱼粉蛋白腺1.5%，（畑4)25〇4〇.6%，&册〇4 1%，]\%5〇4*7出0 0.75%，胞(：11%。
[0017] 对培养基中的营养源无特殊要求，需要微生物生长必需的碳源、氮源W及其他营 养源。
[0018] 对溫度、pH、时间等培养条件没有严格的限制，但化C1浓度大于或等于2%时，该菌 无法生长。为了产率最大化，选择菌株生长旺盛且产抗生素活性较高的条件为宜，如培养基 的抑范围可为5-9，W接近中性为好;培养基溫度在20-35°C，培养时间在3-6天，化C1浓度控 制在2% W内。进一步地，运些条件还可能与菌株当时生长状况有关，故为了得到最好的培 养效果，均应根据实际情况进行调整。
[0019] 本发明提出了所述产抗生素的链霉菌TXAF2的应用。进一步提出了该链霉菌TXAF2 的制备药物或农药中的应用。所述药物包括人用药物。即，所述链霉菌TXAF2的抗生素提取 物可作为药物或农药使用。
[0020] 所述链霉菌TXAF2的抗生素提取物作为药物使用时，所述药物的给药剂量最低为 10ng/kg，W动物的重量计，给药方式为注射;所述链霉菌TXAF2的抗生素提取物作为农药使 用时，所述农药的给药浓度最低为lOng/L，每亩作物每次均匀喷洒5-10化，2天喷洒一次，喷 洒15次。
[0021] 优选地，所述链霉菌TXAF2的抗生素提取物作为药物使用时，所述药物的给药剂量 为50ng/kg，W动物的重量计，给药方式为注射;所述链霉菌TXAF2的抗生素提取物作为农药 使用时，所述农药的给药浓度为50ng/L，每亩作物每次均匀喷洒5-10化，2天喷洒一次，喷洒 15次。
[0022] 本发明所述的产新型抗生素的链霉菌TXAF2经过发酵，得到的产物可用于抗假单 胞杆菌属(Pseudomonas)、黄单胞菌属(Xanthomonas)、欧文氏菌属化rwinia)等多种影响农 业植物正常生长的病菌，同时对大肠杆菌、枯草杆菌、黑曲霉、酵母菌、具有卡那霉素抗性的 大肠杆菌、具有氨节霉素抗性的大肠杆菌、枯草芽抱杆菌、多抗性枯草芽抱杆菌（包括 WB980-G4/IA474枯草芽抱杆菌、PHT43-PG/WB800枯草芽抱杆菌）、金黄色葡萄球菌、假单胞 杆菌属、黄单胞菌属、欧文氏菌属的菌等细菌有好的抗菌作用。该菌的发酵产物或发酵产物 的纯化分离物出了可W抑制、杀死上述微生物W外，可W用于杀伤或抑制支原体、衣原体、 原生动物W及人、畜寄生虫。
[0023] 本发明中，所述链霉菌TXAF2用作农药，例如，杀菌剂、抑菌剂。所述链霉菌TXAF2用 作人用药物，例如，皮肤外用药等。
[0024] 本发明中，所述链霉菌TXAF2的发酵产物可使用溶媒萃取法进行提纯。
[0025] 本发明中，所述产广谱抗生素的链霉菌TXAF2通过发酵产抗生素。
[0026] 本发明中，对于大部分微生物来说，给药用量为4ng/L(体外实验)或4ng/kg(动物 实验)及W上可抑制微生物生长或杀灭大部分微生物;更优地，当用量达lOng/L(体外实验） 或lOng/kg(动物实验)及W上可W达到显著抑菌的效果;其中，"体外实验"是指所述链霉菌 TXAF2所产抗生素作为农药使用的实验。
[0027] 本发明中，给药方式可W注射、喷洒、涂抹、涂敷、颗粒等常用各种方式。
[0028] 本发明中，所述链霉菌TXAF2通过发酵培养的条件为:在抑6-8,150-220rmp摇床培 养36-48小时;培养基包括W下组成wt%:葡萄糖1%，薦糖1%，淀粉1%，酵母膏0.5%，鱼粉 蛋白腺 1.5%，（NH4)2S04 0.6%，K2HP04 l%，MgS〇4.7出0 0.75%，NaCl 1%。
[0029] 本发明还提出了一种用于培养所述链霉菌TXAF2的培养基，其包括W下组成wt%: 葡萄糖1 %，薦糖1 %，淀粉1 %，酵母膏0.5%，鱼粉蛋白腺1.5%，（NH4)2S04 0.6%，K2HP04 l%，MgS〇4*7 出0 0.75%，NaCl 1%。
[0030] 本发明还提出了一种抑菌杀菌剂，其含有所述链霉菌TXAF2产生的抗生素。其中， 所述抗生素通过发酵产生的。所述链霉菌TXAF2发酵后经过滤或离屯、去除菌体，添加赋形 剂，冷冻干燥或者喷雾干燥，获得初步分离的有效成分，包括抑菌杀菌活性成分。该有效成 分包括抗生素可W直接使用或进一步纯化。
[0031] 进一步地，有效成分抑菌、杀菌活性物质可采用溶媒萃取法进行精细提纯。W乙酸 下醋作为萃取剂，W萃取柱为萃取设备，采用逆流萃取的方式，进行溶媒萃取，用多级错流 法反萃取后进行结晶，获得抗生素产品。该产品可W直接应用或者进一步纯化。
[0032] 进一步地，上述初步纯化或萃取纯化获得的产品，包括抑菌杀菌剂等，可W用层析 住、离子交换树脂、分子筛层析等方法进一步纯化分离，获得具有不同有效组分的具有抑菌 活性的物质。
[0033] 本发明还提出了上述抑菌杀菌剂在作为药物或作为农药中的应用。在一具体实施 方案中，链霉菌TXAF2(Streptomyces SP. )CGMCC No. 10235所产的抗生素可用作药物，治疗 多种病原菌(例如，金黄色葡萄球菌）导致的外伤感染。在一具体实施方案中，链霉菌TXAF2 (5化69扣1117。68 39.)〔61〇：齡.10235所产的抗生素可用作农药，缓解多种农作物病菌（例 如，假单胞杆菌、欧文氏菌、黄单胞菌感染）引起的病害。
[0034] 本发明中，所述抑菌杀菌剂(含有所述链霉菌TXAF2产生的发酵产物)分别对酵母 菌、黑曲霉、大肠杆菌、氨节霉素抗性的大肠杆菌、枯草杆菌、多种抗性枯草芽抱杆菌、枯草 芽抱杆菌、金黄色葡萄球菌、肺炎链球菌、破伤风杆菌、军团杆菌、白喉杆菌、沙口氏菌、假单 胞杆菌属(Pseudomonas)、欧文氏菌属化rwinia)、黄单胞菌属(Xanthomonas)具有抑菌杀菌 作用。
【附图说明】
[0035] 图1为产新型抗生素的链霉菌了乂4。2(5化69扣1117。68 89.)〔61〇：齡.10235的菌株 典型菌丝体生长形态光学显微镜照片。
[0036] 图2为产新型抗生素的链霉菌TXAF2所产抗生素对细菌的抑菌圈实验图。
[0037] 图3为本发明菌株TXAF216srDNA[gb|KP113542.11 ]数据在NCBI数据库中比较后形 成的16s rDNA系统发育树示意图。
[003引图4本发明菌株TXAF216srDNA序列与最接近本发明的菌株Streptomyces