一种用于生产多黏菌素b的发酵培养基及其制备方法和用图
【技术领域】
[0001] 本发明涉及生物技术领域；尤其涉及一种发酵培养基及其制备方法和用途。
【背景技术】
[0002] 多黏菌素B(PolymyxinB，PMB)是由多黏芽抱杆菌或多黏类芽抱杆菌产生的一种 的碱性环肤类抗生素，具有良好的抗革兰氏阴性菌活性。多黏菌素B的药品包括硫酸多黏 菌素B注射剂W及硫酸多黏菌素B与其他抗生素的复方外用制剂，用来治疗革兰氏阴性菌 引起的皮肤创面、腹膜炎、泌尿系统W及呼吸系统等部位的感染；PMB还可W显著抑制内毒 素诱导的急性期反应，因此也可用于败血症。
[0003]目前多黏菌素B的制备采用发酵法，多黏芽抱杆菌或多黏类芽抱杆菌经过种子培 养后，接种在发酵罐中培养并产生多黏菌素B，再经后续的分离纯化得到高纯度的产品。发 酵培养过程中培养基配方对产量有很大的影响。现有报道涉及的相关培养基配方存在发酵 产量不高的问题。
[0004] 因此，本领域迫切需要提供一种高产多黏菌素B的发酵培养基。
【发明内容】
[0005] 本发明旨在提供一种发酵培养基。
[0006] 本发明的另一个目的是提供上述发酵培养基的制备方法。
[0007] 本发明的再一个目的是提供上述发酵培养基的用途。
[0008] 在本发明的第一方面，提供了一种用于生产多黏菌素B的发酵培养基，W培养基 的总重量计，所述的培养基含有0. 1-1. 5w/w%有机氮源、5. 0-15.Ow/w%全麦粉和0. 3-1. 2w/ W%无机盐。
[0009] 在另一优选例中，所述的有机氮源选自下述的一种或一种W上：蛋白腺、酵母抽提 物、黄豆粉或玉米浆粉；更佳地，所述有机氮源选自黄豆粉或玉米浆粉。
[0010] 所述无机盐选自下述的一种或一种W上；磯酸二氨钟、硫酸馈、硫酸镇、硫酸锋或 碳酸巧；更佳地，所述无机盐为硫酸馈或硫酸馈和选自下述的一种或一种W上物质的混合： 磯酸二氨钟、硫酸镇、硫酸锋或碳酸巧。
[0011] 在另一优选例中，所述全麦粉的含量为7. 0-13.Ow/w%。
[0012] 在本发明的第二方面，提供了一种如上所述的本发明提供的发酵培养基的制备方 法，所述的方法包括步骤：
[0013] (1)W培养基的总重量计，将0. 1-1. 5w/w%有机氮源、5. 0-15.Ow/w%全麦粉和 0. 3-1. 2w/w%无机盐混合得到混合物1;
[0014] (2)将淀粉酶作用于经糊化或未经糊化的混合物1 (优选糊化)，得到如上所述的 本发明提供的发酵培养基。
[0015] 在另一优选例中，所述淀粉酶选自a-淀粉酶、目-淀粉酶、葡萄糖淀粉酶或异淀 粉酶；更优选a-淀粉酶。
[0016] 在另一优选例中，W全麦粉的重量计，所述淀粉酶的用量为2-1500U/g;更优选为 2-lOOOU/g。
[0017] 在另一优选例中，所述淀粉酶的作用温度为50-8(TC。
[0018] 在另一优选例中，所述淀粉酶的作用时间为2-40分钟；更优选为5-20分钟。
[0019] 在本发明的第H方面，提供了一种如上所述的本发明提供的发酵培养基的用 途，用于培养多黏芽抱杆菌炬acilluspolymyxa)或多黏类芽抱杆菌（Paenibacillus polymyxa)W生产多黏菌素B。
[0020] 据此，本发明提供了一种使发酵产物多黏菌素B产量高的发酵培养基。
【具体实施方式】
[0021] 发明人经过广泛而深入的研究，意外地发现如果采用较高浓度的全麦粉作为培养 基组分，并且在灭菌前用淀粉酶处理的已糊化后的发酵培养基，可W较大的提高多黏菌素B 的产量。在此基础上，完成了本发明。
[002引定义
[0023] 如本文所用，"全麦粉"是指整粒小麦包含了款皮与胚芽全部磨成的粉。即整粒小 麦在磨粉时，仅仅经过碼碎，而不需经过除去款皮程序。
[0024] 如本文所用，"糊化"是指淀粉颗粒受热后，在一定温度范围内，淀粉粒开始破坏， 晶体结构消失，体积膨大，粘度急剧上升，呈粘稠的糊状。
[0025] 在本发明中，经过淀粉酶作用后的培养基，其中的淀粉变成了糊精和麦芽糖，糖链 由长变短，麦芽糖会增加，培养基黏度下降。
[0026] 如本文所用，"黄豆粉"可W使用本领域熟知的方法经棒油工艺生产，例如但不限 于，黄豆(大豆）经压棒脱油后的残饼，液压棒油后为圆饼状，螺旋棒油后为薄片状；为坚硬 的块状物，一般先打碎后再粉碎。也可W通过商业渠道获得，例如但不限于购自（石家庄兴 柏生物工程有限公司）。
[0027] 如本文所用，"玉米浆粉"是指W鲜玉米浆为原料经低温瞬间加热喷雾干燥而成， 其水溶性蛋白质保存完好，保持了玉米浆液的所有特性。可W使用本领域熟知的方法制备 得到，也可W通过商业渠道获得，例如但不限于购自巧P平西王生物工程有限公司）。
[0028] 本发明涉及的多黏菌素B其结构如式I所示：
[0029]
【主权项】
1. 一种用于生产多黏菌素B的发酵培养基，其特征在于，以培养基的总重量计，所述的 培养基含有〇. 1-1. 5w/w%有机氮源、5. 0-15.Ow/w%全麦粉和0. 3-1. 2w/w%无机盐。
2. 如权利要求1所述的发酵培养基，其特征在于，所述的有机氮源选自下述的一种或 一种以上：蛋白胨、酵母抽提物、黄豆粉或玉米浆粉； 所述无机盐选自下述的一种或一种以上：磷酸二氢钾、硫酸铵、硫酸镁、硫酸锌或碳酸 钙。
3. 如权利要求1所述的发酵培养基，其特征在于，所述无机盐为硫酸铵或硫酸铵和选 自下述的一种或一种以上物质的混合：磷酸二氢钾、硫酸镁、硫酸锌或碳酸钙。
4. 如权利要求2所述的发酵培养基，其特征在于，所述有机氮源选自黄豆粉或玉米浆 粉。
5. 如权利要求1-4任一项所述的发酵培养基，其特征在于，所述全麦粉的含量为 7. 0-13.Ow/w%。
6. -种如权利要求1-5任一项所述的发酵培养基的制备方法，其特征在于，所述的方 法包括步骤： (1) 以培养基的总重量计，将0. 1-1. 5w/w%有机氮源、5. 0-15.Ow/w%全麦粉和 0. 3-1. 2w/w%无机盐混合得到混合物1 ; (2) 将淀粉酶作用于经糊化或未经糊化的混合物1 (优选糊化)，得到如权利要求1-5任 一项所述的发酵培养基。
7. 如权利要求6所述的制备方法，其特征在于，所述淀粉酶选自a-淀粉酶、(6-淀粉 酶、葡萄糖淀粉酶或异淀粉酶；优选a-淀粉酶。
8. 如权利要求6所述的制备方法，其特征在于，以全麦粉的重量计，所述淀粉酶的用量 为 2-1500U/g;优选为 2-1000U/g。
9. 如权利要求6所述的制备方法，其特征在于，所述淀粉酶的作用温度为50-80°C。
10. 如权利要求6所述的制备方法，其特征在于，所述淀粉酶的作用时间为2-40分钟； 优选为5-20分钟。
11. 如权利要求1-5任一项所述的发酵培养基的用途，其特征在于，用于培养多黏芽孢 杆菌（Bacilluspolymyxa)或多黏类芽孢杆菌（Paenibacilluspolymyxa)以生产多黏菌 素B。
【专利摘要】本发明公开了一种用于生产多黏菌素B的发酵培养基及其制备方法和用途。以培养基的总重量计，所述的培养基含有0.1-1.5w/w%有机氮源、5.0-15.0w/w%全麦粉和0.3-1.2w/w%无机盐。
【IPC分类】C12R1-12, C12R1-01, C12P21-04
【公开号】CN104774892
【申请号】CN201410014183
【发明人】马川川, 那可, 赵文杰, 魏晓东, 刘永双, 张守雨
【申请人】上海医药工业研究院, 中国医药工业研究总院
【公开日】2015年7月15日
【申请日】2014年1月13日