一种具有毒杀大豆胞囊线虫活性的链霉菌及其用图
【技术领域】
[0001]本发明涉及一种链霉菌及其用途。
【背景技术】
[0002]大豆是我国传统的、重要的经济作物，具有很高的经济价值。黑龙江省是我国大豆主产区，近年来播种面积不断扩大，居全国首位。随着大豆连作面积的不断增加，大豆根部病害逐年加重，其中大豆胞囊线虫(Heterodera glycines)病又称大豆黄萎病，是危害大豆的主要土传病害，染病植株形象的称为火龙秧子，是制约大豆产量提高的重要病害之一。因其病原大豆胞囊线虫形成具有防护外壳的胞囊存在于土壤中，生活史中的几个龄期专性寄生于大豆根部，极难防治。目前通过种植抗线品种、合理的耕作方式(轮作)、物理方法(灌溉、土壤沙化改良等措施)等方法应对大豆胞囊线虫，均取得一定的防治效果。但在大豆主产区因受地理和实际条件限制，大豆耕种面积又大，难以实行合理轮作。虽然，抗线育种是一项经济有效环保的措施，但是其丰产性不佳、地域限制明显等问题严重制约了抗线品种的推广和大面积种植。
【发明内容】
[0003]本发明的目的是提供一种具有毒杀大豆胞囊线虫活性的链霉菌，从而利用微生物防治大豆胞囊线虫，具有防治成本低、环保、对人畜和环境无危害等优点，而且可以利用原有的丰产大豆品种连作，保证了大豆的高产、稳产。
[0004]本发明具有毒杀大豆胞囊线虫活性的链霉菌，其为细黄链霉菌(Streptomycesmicrof lavus) HKS1408，保藏在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏号为CGMCC N0.10714。
[0005]上述具有毒杀大豆胞囊线虫活性的链霉菌在防治大豆胞囊线虫中的用途。
[0006]本发明细黄链霉菌(Streptomyces microf lavus) HKS1408为单细胞原核生物，有发达的分枝菌丝；菌丝纤细，宽度近于杆状细菌，约0.5?I微米。在营养琼脂培养基上培养，细黄链霉菌(Streptomyces microf lavus) HKS1408菌落呈圆形，颜色为乳白色，表面光滑，不透明，菌落中部凹陷，四周凸起。在液体培养基内静置培养细黄链霉菌(Streptomycesmicrof lavus) HKS1408，在容器内壁液面处形成斑状或膜状培养物，或沉降于底部而不使培养基浑浊；振荡培养条件下则形成由短的菌丝体所构成的球状菌丝团。
[0007]本发明细黄链霉菌(Streptomyces microf lavus) HKS1408的氧化酶反应呈阳性，V-P反应呈阳性，淀粉水解实验结果呈阳性，酪素反应结果呈阳性，马尿酸反应结果呈阴性，丙酸盐反应结果呈阴性，柠檬酸盐反应呈阳性，葡萄糖反应呈阳性，阿拉伯糖反应呈阳性，木糖反应呈阳性，甘露糖反应呈阳性。
[0008]本发明细黄链霉菌(Streptomyces microf lavus) HKS1408可利用果胶为碳源进行生长，可利用豆柏粉为氮源生长。
[0009]本发明细黄链霉菌(Streptomyces microflavus)HKS1408的最适生长温度为30°C?35 °C，最适合生长环境pH值为7?7.5。
[0010]本发明细黄链霉菌(Streptomyces microf lavus) HKS1408在实验室条件下对大豆胞囊线虫成幼虫和卵都有明显的杀灭效果；尤其对幼虫杀灭效果明显；大田实验中对大豆胞囊线虫的幼虫和成虫灭杀效果同样显著。
[0011]本实施方式细黄链霉菌(Streptomyces microf lavus) HKS1408，属于链霉菌属(Streptomyces)，保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心进行保藏，保藏地址为北京市朝阳区北辰西路I号院3号，保藏日期为2015年4月13日，保藏编号为CGMCCN0.10714。
【具体实施方式】
[0012]本发明技术方案不局限于以下所列举【具体实施方式】，还包括各【具体实施方式】间的任意组合。
[0013]【具体实施方式】一:本实施方式具有毒杀大豆胞囊线虫活性的链霉菌，其为细黄链霉菌(Streptomyces microflavus)HKS1408，保藏在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏号为CGMCC N0.10714。
[0014]本实施方式细黄链霉菌(Streptomyces microf lavus) HKS1408从香坊农场东北农大大?试验田尚获得。
[0015]本实施方式细黄链霉菌(Streptomyces microf lavus) HKS1408经菌落形态和16SrDNA序列综合分析为细黄链霉菌(Streptomyces microflavus)。
[0016]【具体实施方式】二:本实施方式具有毒杀大豆胞囊线虫活性的链霉菌在防治大豆胞囊线虫中的用途。
[0017]将细黄链霉菌(Streptomyces microf lavus) HKS1408接种到PSA液体培养基中在温度为30°C?35°C，pH值为7?7.5的环境中培养72h。然后，按800?1000倍的比例稀释后直接喷洒于大豆作物即可。
[0018]实施例1
[0019]一、在喷洒过本发明细黄链霉菌(Streptomyces microflavus)HKS1408的大豆重茬试验田中取土样加入水搅拌均匀，使土样与水充分接触，静置2?3min后，把悬浮液倒入嵌在60目网筛中的40目网筛内，如此重复操作3次。倾去上层40目网筛上的残余物，用细水流把60目网筛上的沉积物中的泥沙冲去，剩余物用缓慢水流收集到干净的烧杯中。烧杯中的水悬物经缓慢多次淘洗，弃去下层沉淀的泥沙，把上层样品倒入垫有双层擦镜纸的漏斗内，然后把双层擦镜纸和过滤后的剩余物一并移入洗净的玻璃培养皿中，在解剖镜下用镊子从中挑取新鲜饱满的棕色胞囊，放入4°C冰箱备用。经鉴定为大豆胞囊线虫胞囊。
[0020]二、在培养皿底部垫上一张灭过菌的圆形定性滤纸，在滤纸上放置步骤一获得的大豆胞囊线虫胞囊，盖上皿盖后做好标记，25°C下保湿培养5d。5d后挑出表面长有菌的胞囊，放在马铃薯蔗糖(PSA)固体培养基上，25°C培养。待长出菌落后，用接种环切取菌落边缘的菌丝体转至PSA培养基中，25°C培养3d。3d后把PSA培养基上长出的菌转入PSA斜面上进行保存，认定为生防菌。
[0021]三、取大豆胞囊线虫胞囊，用浓度为0.5%的NaClO表面消毒。将生防菌转至PSA培养基上，待菌落直径长至培养皿1/2?3/4时，将消毒后的大豆胞囊线虫胞囊放入PSA培养基上的菌落边缘，每皿10个胞囊；三次重复。培养1d后，将接种的大豆胞囊线虫胞囊轻轻挑出(注意不要弄破胞囊)，0.5% NaClO表面消毒5min，每个胞囊放于一个灭菌的滤纸片上，保湿培养5d。5d后观察滤纸片上菌落生长情况，经鉴定该菌为本发明细黄链霉菌(Streptomyces microf lavus) HKS1408，经统计细黄链霉菌(Streptomyces microflavus)HKS1408对大豆胞囊线虫胞囊的寄生率为90%。
[0022]实施例2
[0023]将细黄链霉菌(Streptomyces microf lavus) HKS1408的PSA液体发酵液稀释到孢子数1000万/mL，取25mL放入25mL含0.4mmol/L的2冗12的35%蔗糖溶液中混合。挑选9头大豆胞囊线虫二龄幼虫活体放入混合液中，5次重复，于生化培养箱中32°C培养7?12d，观察细黄链霉菌(Streptomyces microflavus) HKS1408对线虫的侵染状况，并记录结果，根据公式(侵染率) = (Y-X)/Y，其中Y为侵染前二龄幼虫平均数，X为存活的二龄幼虫平均数)计算侵染率为82%。
[0024]实施例3
[0025]将喷洒过本发明细黄链霉菌(Streptomyces microf lavus) HKS1408的大豆作物的茎和叶粉碎后喂食牛和鸡3?6个月，饲喂动物未出现不良反应，生理解刨后脏器没有病变。
【主权项】
1.一种具有毒杀大豆胞囊线虫活性的链霉菌，其为细黄链霉菌(Streptomycesmicrof lavus) HKS1408，保藏在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏号为CGMCC N0.10714。
2.如权利要求1所述的具有毒杀大豆胞囊线虫活性的链霉菌在防治大豆胞囊线虫中的用途。
【专利摘要】一种具有毒杀大豆胞囊线虫活性的链霉菌及其用途，它涉及一种链霉菌及其用途。本发明提供一种具有毒杀大豆胞囊线虫活性的链霉菌，从而利用微生物防治大豆胞囊线虫，具有防治成本低、环保、对人畜和环境无危害等优点，而且可以利用原有的丰产大豆品种连作，保证了大豆的高产、稳产。该菌为细黄链霉菌(Streptomyces microflavus)HKS1408，保藏在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏号为CGMCC No.10714。具有毒杀大豆胞囊线虫活性的链霉菌在防治大豆胞囊线虫中的用途。CGMCC No.1071420150413
【IPC分类】C12N1-20, A01N63-02, C12R1-465, A01P5-00
【公开号】CN104830742
【申请号】CN201510288539
【发明人】迟君道, 樊川, 安琦, 王惠民, 杨旭升, 程国利
【申请人】黑龙江省科学院微生物研究所
【公开日】2015年8月12日
【申请日】2015年5月29日