一株八丈岛链霉菌及其应用
【技术领域】
[0001 ] 本发明涉及生物技术领域中一株八丈岛链霉菌及其应用。
【背景技术】
[0002] 我国是一个农业大国，粮食、果蔬产量和质量关乎民生和社会稳定。全世界因为植 物病害所造成的主要农作物的经济损失达数千亿美元，而病害中的70% -80%都是由病原 真菌导致的，如导致板栗疫病的病原真菌为栗疫病菌。
[0003] 栗疫病菌（Cryphonectriaparasitica)属于子囊菌门（Ascomycota)奠壳菌纲 (Sordariomycetes)间座壳目（Diaporthales)隐丛壳科（Cryphonectriaceae),可寄生于 欧洲板栗、美洲板栗、板栗、日本板栗、锥栗和其它栎类。板栗苗木和结果树都可以受到栗疫 病菌的侵染，发病后病斑迅速包围枝、干，导致栗实产量和质量都明显降低，严重时造成整 个枝条或全株枯死。栗疫病菌已成为危害板栗最严重的病菌。1904年，在美国纽约首次发 现栗疫病，随后近半个世纪的时间内，全境美洲栗树几乎全部被其摧毁。1913年，栗疫病首 次在中国被发现，之后在中国各地均发现该病，部分地区发病严重。
[0004] 目前，栗疫病菌的主要防治方法为农业防治、生物防治、化学防治和综合防治。在 意大利和法国发现了含有dsRNA的弱毒力菌株，能有效控制栗疫病菌带来的危害；部分生 物制剂也能起到抑制作用；另外多菌灵、杀菌剂等化学药品也能起到一定效果。
[0005] 放线菌（Actinomycete)是一类含有大量G/C的革兰氏阳性菌，其种类繁多，在自 然界中分布广泛，是土壤中的优势菌群。链霉菌属（Streptomyces)是放线菌目的一个属。 放线菌含有的微生物资源可创造巨大价值，它是产生生物活性物质最多的微生物种类之 一，特别是抗生素，当前在医疗和农业方面广泛应用的抗生素，70%来自放线菌，而80%以 上的放线菌抗生素都是由链霉菌（Str印tomyces)产生的。但目前还没有利用链霉菌产生 抗生素抑制板栗疫病的相关报道。
【发明内容】
[0006] 本发明所要解决的技术问题是如何防治栗疫病菌（Cryphonectriaparasitica) 及其引起的板栗疫病。
[0007] 为解决上述技术问题，本发明首先提供了一株八丈岛链霉菌。
[0008] 本发明所提供的八丈岛链霉菌是八丈岛链霉菌（Streptomyceshachijoensis) CNA-23,其在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心的登记入册编号为CGMCC No. 9497。该菌种已于2014年07月21日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生 物中心（简称CGMCC)。
[0009] 本发明的八丈岛链霉菌（Streptomyceshachijoensis)CNA-23CGMCCNo. 9497 在 高氏一号培养基上菌丝生长缓慢，包括基生菌丝和气生菌丝，菌落表面粗糙、不规则，初期 乳白色，菌丝浓密，后期偏浅黄色，不产色素。扫描电镜观察显示，菌丝表面光滑，微柔曲。
[0010] 本发明所提供的所述八丈岛链霉菌（Streptomyceshachijoensis)CNA-23CGMCC No. 9497在生产分生孢子和/或菌丝体中的应用也属于本发明的保护范围。
[0011] 为解决上述技术问题，本发明还提供了栗疫病菌抑制剂。
[0012] 本发明所提供的栗疫病菌抑制剂，其活性成分是所述八丈岛链霉菌 (Streptomyceshachijoensis)CNA_23CGMCCNo.9497 或 / 和所述八丈岛链霉菌 (Streptomyceshachijoensis)CNA_23CGMCCNo.9497 的代谢物。
[0013] 上述栗疫病菌抑制剂中，所述八丈岛链霉菌（Streptomyceshachijoensis) CNA-23CGMCCNo. 9497可为分生孢子和/或菌丝体。
[0014] 上述栗疫病菌抑制剂还可以包括载体。所述载体可为固体载体或液体载体。所述 固体载体可为矿物材料、植物材料或高分子化合物；所述矿物材料可为粘土、滑石、高岭土、 蒙脱石、白碳、沸石、硅石和硅藻土中的至少一种；所述植物材料可为玉米粉、豆粉和淀粉中 的至少一种；所述高分子化合物可为聚乙烯醇和/或聚二醇。所述液体载体可为有机溶剂、 植物油、矿物油或水；所述有机溶剂可为癸烷和/或十二烷。所述栗疫病菌抑制剂中，所述 活性成分可以以被培养的活细胞、活细胞的发酵液、细胞培养物的滤液或细胞与滤液的混 合物的形式存在。所述栗疫病菌抑制剂的剂型可为多种剂型，如液剂、乳剂、悬浮剂、粉剂、 颗粒剂、可湿性粉剂或水分散粒剂。
[0015] 根据需要，所述栗疫病菌抑制剂中还可添加表面活性剂（如吐温20、吐温80等）、 粘合剂、稳定剂（如抗氧化剂）、pH调节剂等。
[0016] 为解决上述技术问题，本发明还提供了制备所述栗疫病菌抑制剂的方法。
[0017] 本发明所提供的制备所述栗疫病菌抑制剂的方法，包括在胰蛋白胨大豆肉汤培养 基（实施例中的7号培养基）中培养所述八丈岛链霉菌（Streptomyceshachijoensis) CNA-23CGMCCNo. 9497,收集发酵液，得到栗疫病菌抑制剂。
[0018] 本发明还提供了下述1)_4)中任一种应用：
[0019] 1)所述八丈岛链霉菌（Streptomyceshachijoensis)CNA-23CGMCCNo. 9497 或 / 和所述八丈岛链霉菌（Streptomyceshachijoensis)CNA-23CGMCCNo. 9497的代谢物在抑 制栗疫病菌中的应用；
[0020] 2)所述八丈岛链霉菌（Streptomyceshachijoensis)CNA-23CGMCCNo. 9497 或 / 和所述八丈岛链霉菌（Streptomyceshachijoensis)CNA-23CGMCCNo. 9497的代谢物在制 备栗疫病菌抑制剂中的应用；
[0021] 3)所述八丈岛链霉菌（Streptomyceshachijoensis)CNA-23CGMCCNo. 9497 或 / 和所述八丈岛链霉菌（Streptomyceshachijoensis)CNA-23CGMCCNo. 9497的代谢物在制 备栗疫病菌引起的植物病害抑制剂中的应用；
[0022] 4)所述八丈岛链霉菌（Streptomyceshachijoensis)CNA-23CGMCCNo. 9497 或 / 和所述八丈岛链霉菌（Streptomyceshachijoensis)CNA-23CGMCCNo. 9497的代谢物在抑 制栗疫病菌引起的植物病害中的应用。
[0023]所述八丈岛链霉菌（Streptomyceshachijoensis)CNA-23CGMCCNo. 9497 的代谢 物可从所述八丈岛链霉菌（Streptomyceshachijoensis)CNA_23CGMCCNo. 9497 的发酵 液中获得。所述八丈岛链霉菌（Streptomyceshachijoensis)CNA_23CGMCCNo. 9497 的 代谢物具体可按照如下方法制备，在液体培养基中培养所述八丈岛链霉菌（Streptomyces haChij0enSiS)CNA-23CGMCCN0?9497，除去液体培养物（发酵液）中的所述八丈岛链 霉菌（Streptomyceshachijoensis)CNA_23CGMCCNo.9497 即得到所述八丈岛链霉菌(Streptomyceshachijoensis)CNA_23CGMCCNo.9497 的代谢物。
[0024] 上述应用中，所述植物病害为板栗疫病。
[0025] 为了解决上述技术问题，本发明还提供了培养所述八丈岛链霉菌（Streptomyces hachijoensis)CNA-23CGMCCNo.9497 的方法。
[0026] 本发明所提供的培养所述八丈岛链霉菌（Streptomyceshachijoensis) CNA-23CGMCCNo. 9497 的方法，包括将所述八丈岛链霉菌（Streptomyceshachijoensis) CNA-23CGMCCNo. 9497在用于培养八丈岛链霉菌的培养基中培养的步骤。
[0027]上述培养所述八丈岛链霉菌（Streptomyceshachijoensis)CNA-23CGMCC No. 9497的方法，可包括在液体培养基中培养所述八丈岛链霉菌（Streptomyces hachijoensis)CNA-23CGMCCNo. 9497的步骤；所述液体培养基具体可为液体发酵培养基 (4号培养基）、1号培养基、2号培养基、3号培养基、5号培养基、6号培养基和7号培养基； 所述培养温度可为26-30°C，具体可为28°C;所述培养时间可为8-10d，具体可为8d。
[0028]实验证明，本发明的八丈岛链霉菌（Streptomyceshachijoensis)CNA-23CGMCC No. 9497能够明显抑制栗疫病菌（Cryphonectriaparasitica)孢子的发生，导致栗疫病菌 (Cryphonectriaparasitica)菌丝体脱水、畸变，具有高效的抑制作用，同时确定了不同含 量CNA-23菌株的滤液以及不同类型发酵培养基对CNA-23菌株抗栗疫病菌（Cryphonectria parasitica)效果的影响。八丈岛链霉菌（Streptomyceshachijoensis)CNA_23CGMCC No. 9497培养条件简单、容易保存，易于工业化生产，具有良好的开发应用前景。
[0029] 保藏说明
[0030] 菌种名称：八丈岛链霉菌
[0031]拉丁名：Streptomyces hachijoensis
[0032]菌株编号：CNA-23
[0033] 保藏机构：中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心
[0034] 保藏机构简称：CGMCC
[0035] 地址：北京市朝阳区北辰西路1号院3号
[0036] 保藏日期：2014年7月21日
[0037] 保藏中心登记入册编号：CGMCCNo. 9497
【附图说明】
[0038]图 1 为八丈岛链霉菌（Streptomyceshachijoensis)CNA-23CGMCCNo. 9497 的菌 丝形态。
[0039]图 2 为基于 16SrDNA序列的八丈岛链霉菌（Streptomyceshachijoensis) CNA-23CGMCCNo. 9497菌株与其它链霉菌构成的系统发育树。
[0040]图 3 为受八丈岛链霉菌（Streptomyceshachijoensis)CNA-23CGMCCNo. 9497 菌 株抑制的栗疫病菌（Cryphonectriaparasitica)和正常生长的栗疫病菌（Cryphonectria parasitica)的菌丝形态的电镜照片。其中，A为对照组，B为实验组。
[0041]图 4 为受八丈岛链霉菌（Streptomyceshachijoensis)CNA-23CGMCCNo. 9497 菌 株抑制的栗疫病菌（Cryphonectriaparasitica)和正常生长的栗疫病菌（Cryphonectria parasitica)的孢子的电镜照片。其中，A为对照组，B为实验组。
【具体实施方式】
[0042] 下面结合【具体实施方式】对本发明进行进一步的详细描述，给出的实施例仅为了阐 明本发明，而不是为了限制本发明的范围。
[0043] 下述实施例中的实验方法，如无特殊说明，均为常规方法。
[0