一种铟暴露的分子标志物的制作方法
【技术领域】
[0001] 本发明涉及生物技术领域，尤其涉及一种铟暴露分子标志物。
【背景技术】
[0002] 铟（indium，In)是液晶屏、LED灯和半导体制造的必要原料之一，随着全球电子工 业的迅速发展其需求量越来越大。自2003年日本学者报道铟暴露中毒者以来，引起了各制 造业强国的高度重视，我国和美国也报道了职业性铟暴露中毒者。2013年12月23日，国家 卫生计生委、安全监管总局、人力资源社会保障部和全国总工会联合组织印发了我国《职业 病分类和目录》，其中，将铟及其化合物中毒增加至职业性化学中毒。Kazuyuki Omae等对这 种新的职业性铟肺病进行了流行病学调查研宄。运用计算机检索关于铟相关的肺部疾病的 病例报告和流行病学研宄。结果截至2010年3月，日本铟作业工人发生7例间质性肺炎， 美国铟暴露工人发生2例肺泡蛋白沉积症（PAP)，中国铟暴露工人发生1例铟中毒，并对日 本的4例病人的横断面调查。在日本对所有病例及流行病学研宄中表明，暴露于难溶性铟 化合物可引起间质性肺炎以及肺气肿，定义之为"铟肺"。基于流行病学研宄结果并结合限 制KL-6增加幅度，日本职业健康协会建议3微克/升血清铟作为职业暴露限值。研宄认为 对长期随访当前和曾经从事过铟作业工人是非常必要的，不仅要了解铟肺的自然历史，而 且要跟踪肺癌的发生率。上述所在病例发病后不可逆转，已经有3例死亡，因此避免职业危 害，探宄其发病原因非常必要。铟主要致病机理未完全明确，之前大量的研宄发现铟及其 化合物中毒主要是氧化损伤引起的。铟及其化合物可产生毒性和诱发肺泡细胞和吞噬细胞 异常增生，机理主要是通过对线粒体的氧化应激、DNA损伤、加速细胞凋亡等方式。国内外 学者对线粒体与铟及其化合物中毒的发生进行了研宄，主要聚集在血清蛋白标志物的研 宄，但未见有针对铟及其化合物中毒引起氧化损伤的重要靶细胞器-线粒体的研宄。
[0003] NDl基因是线粒体基因中最保守的，其表达产物为NADH脱氢酶（复合体I)亚单 位1。线粒体基因含量的改变可能反应了外源性物质激活了细胞氧化应激过程。线粒体基 因含量的增加会产生两方面的影响。一方面，它刺激线粒体增生提供能量以满足细胞生存 的必要性，包括修复损伤和合成新的蛋白质。另一方面，日益丰富的线粒体功能失调导致 活性氧过剩生产和进一步氧化损伤，可能启动细胞衰老或死亡，进而导致更严重的病理后 果。
【发明内容】
[0004] 本发明的一个目的是提供铟或其化合物的应用。
[0005] 本发明提供了铟或其化合物在促进线粒体氧化损伤中的应用。
[0006]或，
[0007] 本发明提供了铟或其化合物在制备促进线粒体氧化损伤产品中的应用。
[0008] 上述应用中，所述促进线粒体氧化损伤体现在提高线粒体NDl基因基因相对含 量。
[0009] 上述应用中，所述线粒体NDl基因基因相对含量为线粒体NDl基因 CT值-HGBl基 因 CT值得到的值。
[0010] 上述应用中，所述线粒体NDl基因 CT值通过引物对1的RT-PCR扩增得到，所述引 物对1由序列表中序列1所示的单链DNA分子和序列表中序列2所示的单链DNA分子组 成；
[0011] 所述线粒体HGBl基因 CT值通过引物对2的RT-PCR扩增得到，所述引物对2由序 列表中序列3所示的单链DNA分子和序列表中序列4所示的单链DNA分子组成。
[0012] 上述应用中，所述线粒体来源于离体细胞，具体为离体血液细胞。
[0013] 本发明的另一个目的是提供铟或其化合物的另一个用途。
[0014] 本发明提供了铟或其化合物在提高线粒体NDl基因基因相对含量中的应用；
[0015] 或，
[0016] 铜或其化合物在制备提尚线粒体NDl基因基因相对含量广品中的应用。
[0017] 上述应用中，所述线粒体NDl基因基因相对含量为线粒体NDl基因 CT值-HGBl基 因 CT值得到的值。
[0018] 上述应用中，所述线粒体NDl基因 CT值通过引物对1的RT-PCR扩增得到，所述引 物对1由序列表中序列1所示的单链DNA分子和序列表中序列2所示的单链DNA分子组 成；
[0019] 所述线粒体HGBl基因 CT值通过引物对2的RT-PCR扩增得到，所述引物对2由序 列表中序列3所示的单链DNA分子和序列表中序列4所示的单链DNA分子组成。
[0020] 上述应用中，所述线粒体来源于离体细胞，具体为离体血液细胞。
[0021] 上述应用中，所述铟化合物为氯化铟。
[0022] 检测线粒体是否氧化损伤的物质在制备诊断或辅助诊断机体是否铟暴露或铟中 毒的产品中的应用也是本发明保护的范围；
[0023] 或，
[0024] 检测线粒体中NDl基因含量是否提高的物质在制备诊断或辅助诊断机体是否铟 暴露或铟中毒的产品中的应用也是本发明保护的范围。
[0025] 上述应用中，上述物质包括铟或其化合物，上述物质还包括引物对1和引物对2。
[0026] 本发明的实验证明，本发明通过体外血液中加入氯化铟进行培养，其血液细胞线 粒体的改变与正常细胞存在差异，发现氯化铟可以提高细胞中线粒体NDl基因相对含量。 说明在铟暴露进程中线粒体发生了氧化损伤，线粒体定量检测可作为铟及其化合物暴露危 害的潜在生物标志物。
【附图说明】
[0027] 图1为荧光PCR扩增曲线图。
[0028] 图2为溶解曲线图。
【具体实施方式】
[0029] 下述实施例中所使用的实验方法如无特殊说明，均为常规方法。
[0030] 下述实施例中所用的材料、试剂等，如无特殊说明，均可从商业途径得到（是的）。
[0031] 下述实施例中所用仪器设备如下：美国ABI7300荧光PCR扩增仪、可调定量加 液器、酒精灯、高压消毒器械、超净工作台、分析天平及普通药物天平、培养瓶、刻度离心管 (5ml，IOml)、肝素钠抗凝管、一次性塑料吸管、隔水式恒温培养箱（配备温度指示控制仪）、 电热恒温干燥箱、电动离心机（水平式）
[0032] 下述实施例中所用主要配套试剂如下：DNA提取试剂购自北京天恩泽基因公司天 净沙系列柱式血液DNA提取试剂，荧光PCR反应试剂购自大连宝生物公司RR820A荧光PCR 反应试剂，其他生化试剂和引物探针合成物购自上海生工生物工程公司。改良型RPMI-1640 培养基、胎牛血清、PHA (植物血球凝集素）、双蒸水、注射用肝素钠。
[0033] 下述实施例中玻璃管皿清洗与消毒：首先用洗衣粉把器皿洗刷干净，自来水冲洗 晾干，然后置洗涤液中浸泡1 一 2天，经浸泡的器皿取出后用自来水冲15 - 20分钟，然后 用自来水边冲边摇洗5遍，再用双蒸水冲3遍，在100