高血糖风险判定用标记肽及其用图
【技术领域】
[0001] 本发明涉及高血糖风险判定用标记肽及其用途。
【背景技术】
[0002] 2011年日本的糖尿病患病者超过1000万人，人数较多排世界第6名。糖尿病是在 严重阶段引起视网膜病变、坏疽等并发症，由于该并发症存在丧命的危险性的严重的症状。 日本人的体质是难以消耗所吃食物易于储藏的体质，因此被认为易患糖尿病，推荐通过对 食物的摄取方法的研宄和/或运动的坚持，从而预防糖尿病的患病、严重化。
[0003] 作为糖尿病的预备军，可列举高血糖状态。根据高血糖状态的阶段掌握定期的血 糖状态、维持使血糖值不上升的生活习惯或改善使血糖值上升的生活习惯是必要的。若能 通过非侵袭性且可随时采集的样品进行定期的血糖状态的掌握，则能在家中进行自我药 疗。
[0004] 半胱氨酸蛋白酶抑制剂是具有抗氧化作用的一系列的肽群。专利文献1中记载了 可以使用半胱氨酸蛋白酶抑制剂-c作为糖尿病检测时的生物标记。专利文献2中记载了可 以使用半胱氨酸蛋白酶抑制剂-C作为糖尿病的检查参数。专利文献3中记载了含有抗半胱 氨酸蛋白酶抑制剂-SN抗体的大肠癌和/或大肠息肉的诊断药。半胱氨酸蛋白酶抑制剂-C 多存在于精液、骨髓液中，仅少量存在于唾液中。另一方面，半胱氨酸蛋白酶抑制剂-SN主 要存在于唾液、泪液中。
[0005] 喊性唾液腫氨酸丰富蛋白（Basicsalivaryprolin-richprotein) 1和喊性唾液 脯氨酸丰富蛋白2是包含脯氨酸中富含的非周期性的氨基酸序列部分的富含脯氨酸蛋白 质（富含脯氨酸肽）中的一种。非专利文献1中记载了，相比于对照组，糖尿病模型大鼠的 唾液腺内富含脯氨酸肽的表达下降，以及通过胰岛素给药糖尿病模型大鼠的富含脯氨酸肽 表达下降的情况得到改善。 现有技术文献 专利文献
[0006] 专利文献1 :日本专利特表2011-515680号公报 专利文献2 :日本专利特表2012-507020号公报 专利文献3 :国际公开第06/064844号 非专利文献
[0007] 非专利文献1 :《国际实验病理学杂志》（IntJExpPath)，90,412-422
【发明内容】
发明要解决的课题
[0008] 然而，不论采集部位，从唾液中也能正确检出的高血糖风险标记肽，以及使用它的 高血糖风险的检测方法，现在都是未知的。此外，半胱氨酸蛋白酶抑制剂-SN、碱性唾液脯氨 酸丰富蛋白1以及碱性唾液脯氨酸丰富蛋白2与高血糖有关，在此之前也未知。半胱氨酸 蛋白酶抑制剂-SN相对于半胱氨酸蛋白酶抑制剂-C的同源性分数只有54. 6099,因此，可以 说半胱氨酸蛋白酶抑制剂-SN和半胱氨酸蛋白酶抑制剂-C是结构上大不相同的蛋白质。
[0009] 本发明的目的是提供能高精度判定生物体内的高血糖风险的标记物。 解决课题的手段
[0010] 本发明提供以下的〔1〕~〔10〕。 〔1〕一种高血糖风险判定用标记肽，选自下述（A)~（0)形成的群。 (A) 包含序列号1的氨基酸序列中连续5个以上的氨基酸残基的多肽； (B) 包含序列号1的氨基酸序列中连续5个以上的氨基酸残基中缺失、附加、置换或插 入了 1个或多个氨基酸的氨基酸序列，能够用作高血糖风险判定用标记的多肽； (C) 包含与序列号1的氨基酸序列中连续5个以上的氨基酸残基有90%以上同源性的 氨基酸序列，能够用作高血糖风险判定用标记的多肽； (D) 包含序列号1的氨基酸序列中缺失、附加、置换或插入了 1个或多个氨基酸的氨基 酸序列中的连续5个以上的氨基酸残基，能够用作高血糖风险判定用标记的多肽； (E) 包含与序列号1的氨基酸序列有90%以上同源性的氨基酸序列中的连续5个以上 的氨基酸残基，能够用作高血糖风险判定用标记的多肽； (F) 包含序列号2的氨基酸序列中连续5个以上的氨基酸残基的多肽； (G) 包含序列号2的氨基酸序列中连续5个以上的氨基酸残基中缺失、附加、置换或插 入了 1个或多个氨基酸的氨基酸序列，能够用作高血糖风险判定用标记的多肽； (H) 包含与序列号2的氨基酸序列中连续5个以上的氨基酸残基有90%以上同源性的 氨基酸序列，能够用作高血糖风险判定用标记的多肽； (I) 包含序列号2的氨基酸序列中缺失、附加、置换或插入了 1个或多个氨基酸的氨基 酸序列中的连续5个以上的氨基酸残基，能够用作高血糖风险判定用标记的多肽； (J) 包含与序列号2的氨基酸序列有90%以上同源性的氨基酸序列中的连续5个以上 的氨基酸残基，能够用作高血糖风险判定用标记的多肽； (K) 包含序列号3的氨基酸序列中连续5个以上的氨基酸残基的多肽； (L) 包含序列号3的氨基酸序列中连续5个以上的氨基酸残基中缺失、附加、置换或插 入了 1个或多个氨基酸的氨基酸序列，能够用作高血糖风险判定用标记的多肽； (M) 包含与序列号3的氨基酸序列中连续5个以上的氨基酸残基有90%以上同源性的 氨基酸序列，能够用作高血糖风险判定用标记的多肽； (N) 包含序列号3的氨基酸序列中缺失、附加、置换或插入了 1个或多个氨基酸的氨基 酸序列中的连续5个以上的氨基酸残基，能够用作高血糖风险判定用标记的多肽；以及 (〇)包含与序列号3的氨基酸序列有90%以上同源性的氨基酸序列中的连续5个以上 的氨基酸残基，能够用作高血糖风险判定用标记的多肽。 〔2〕一种抗体或适体，其结合于上述〔1〕所述的高血糖风险判定用标记肽。 〔3〕一种微阵列，其是将结合于上述〔1〕所述的高血糖风险判定用标记肽结合的抗体或 适体固定于载体而成的。 〔4〕一种高血糖风险的判定方法，其测定从受试者采集到的生物样品中的上述〔1〕所述 的高血糖风险判定用标记肽的量或其有无。 〔5〕上述〔4〕所述的判定方法，当从受试者采集到的生物样品中的上述〔1〕所述的高血 糖风险判定用标记肽的量，低于从健康者采集到的生物样品中的该量时，判定高血糖风险 尚。 〔6〕上述〔4〕所述的判定方法，当从受试者采集到的生物样品中的上述〔1〕所述的高血 糖风险判定用标记肽的量，等同于或低于从高血糖人群采集到的生物样品中的该量时，判 定尚血糖风险尚。 〔7〕如上述〔4〕~〔6〕的任一项所述的判定方法，通过从质谱分析法、使用〔2〕所述的 抗体或适体的免疫测定法和使用〔3〕所述的微阵列的免疫测定法中选出的方法进行上述〔 1〕所述的高血糖风险判定用标记肽的量的测定。 〔8〕如上述〔4〕~〔7〕的任一项所述的判定方法，其中，生物样品为唾液。 〔9〕高血糖风险判定用试剂盒，其包含上述〔2〕的抗体或适体，或者上述〔3〕的微阵列。 〔10〕上述〔9〕所述的试剂盒，其进一步包含口香糖。 发明的效果
[0011] 根据本发明，能够高精度判定高血糖风险。若利用本发明在医生的诊断之前进行 高血糖风险的判定，则可以及早寻求高血糖的预防策略，能对高血糖症、糖尿病等疾病防范 于未然，对于维持健康是有用的。
【附图说明】
[0012] [图1]图1是表示各受试者组的半胱氨酸蛋白酶抑制剂-SN肽片段的峰强度的 图。
[图2]图2是表示各受试者组的碱性唾液脯氨酸丰富蛋白2肽片段的峰强度的图。 [图3]图3是表示各受试者组的碱性唾液脯氨酸丰富蛋白1肽片段的峰强度的图。
【具体实施方式】
[0013] 本发明中高血糖风险的判定，是指对受试者是否为高血糖、是否已经恢复正常水 平、或者今后有无变为高血糖的可能性进行判定（评价、判别、鉴别、推测），或者进行受试 者是否具有变为高血糖风险的可能性的区别（分类）。高血糖风险的判定，是指受试者是否 高血糖、是否已经恢复正常水平、以及是否有今后变为高血糖的可能性的判定。高血糖风险 的判定精度，是受试者中，通常，是统计学上显著的比例的受试者中，能够正确判定高血糖 风险的程度，例如，能够正确判定50%以上、60%以上、70%以上、80%以上、85%以上、90% 以上的受试者中高血糖风险的程度。本发明的判定方法，作为医生的诊断前的预备判定方 法是有用的。
[0014] 本发明中，高血糖是指空腹时血糖在110mg/dL以上和/或血红蛋白Ale在5. 8% 以上的状态。
[0015] 本发明中的受试者，通常为动物，优选人、试验用动物（小鼠、大鼠、豚鼠、仓鼠、兔 子等），更优选人。
[0016] (1)本发明的标记肽 本发明的高血糖风险判定用标记肽，是选自上述（A)~（0)组成的群中的1种以上。本 发明的肽，作为高血糖风险判定用标记是有用的。
[0017] 使用本发明的高血糖风险判定用标记肽判定高血糖风险时，可以使用选自（A)~ (〇)的1种，但2种以上组合时能更高精度地判定。2种以上的组合，优选从选自（A)~（E) 的1种以上、选自（F)~（J)的1种以上、和选自⑷~（0)的1种以上中选出的2种以上 的组合。
[0018] (1-1)关于⑷~（C) (A)~（C)中，序列号1的氨基酸序列，是编码人半胱氨酸蛋白酶抑制剂-SN肽的氨 基酸序列（全长141氨基酸），在数据库中登记为入藏登记号（7夕七7シ3 >番号） P01037. 3。半胱氨酸蛋白酶抑制剂-SN的相对于半胱氨酸蛋白酶抑制剂家族中所含的其 它的类型的同源性分数如下所示都较低：半胱氨酸蛋白酶抑制剂_C(54. 6099% )、半胱氨 酸蛋白酶抑制剂_M(27. 6596% )、半胱氨酸蛋白酶抑制剂-E(27. 6596% )、半胱氨酸蛋白 酶抑制剂_F(26. 2411 % )、半胱氨酸蛋白酶抑制剂-A(17. 3469% )、半胱氨酸蛋白酶抑制 剂-B(14. 2857% )(括号内是同源性分数）。另外，上述同源性分数是在CLUSTALW软件的 多序列比对分析（MultipleSequenceAlignmentbyCLUSTALW)(http://www.genome,jp/ tools/clustalw/)中输入氨基酸序列算出的值。
[0019] (A)~（C)中，序列号1的氨基酸序列中的连续5个以上的氨基酸残基，优选序列 号1的氨基酸序列中的连续7个以上的氨基酸残基，更优选连续10个以上的氨基酸残基， 进一步优选连续12个以上的氨基酸残基，更进一步优选连续14个以上的氨基酸残基，特别 优选连续15个以上的氨基酸残基。没有特别的上限规定，也可以是序列号1的氨基酸序列 的全长（141个残基）或超过该全长，例如200个以下、100个以下、90个以下、80个以下、70 个以下、60个以下、50个以下、40个以下、30个以下、20个以下。
[0020] (A)~（C)中，序列号1的氨基酸序列中连续5个以上的氨基酸残基中，优选上述 5个以上的氨基酸残基中含有氨基酸残基号25位~39位的至少一部分，更优选上述5个以 上的氨基酸残基为序列号1的氨基酸残基号25位~39位中连续5个以上的氨基酸残基。 优选上述5个以上的氨基酸残基为序列号1的氨基酸残基号25位~39位的氨基酸序列， 或序列号1的氨基酸序列。
[0021] (A)只要是包含序列号1的氨基酸序列中连续5个以上的氨基酸残基的多肽即可， 优选序列号1的氨基酸序列中连续5个以上的氨基酸残基构成的多肽。
[0022] (B)只要是包含序列号1的氨基酸序列中连续5个以上的氨基酸残基中缺失、附 加、置换或插入了 1个或多个氨基酸的氨基酸序列，能够用作高血糖风险判定用标记的多 肽即