一种小麦秸秆腐熟剂及其制备方法
【技术领域】
[0001] 本发明涉及微生物菌剂领域，具体是一种小麦秸杆腐熟剂及其制备方法。
【背景技术】
[0002] 我国是农业生产大国，虽然每年粮食大丰收，但同时产生的小麦秸杆数以亿吨计， 这些巨量的秸杆造成严重的社会问题和环境问题，焚烧秸杆不但会导致大气污染，还会影 响人们的出行安全，乱堆乱放秸杆则会占据大量土地，各个大小秸杆堆也会带来火灾隐患， 因此每年夏收时，怎样处理这些巨量的秸杆，成为一大难题。
[0003] 秸杆回收利用是解决这一难题的中药手段，其中"秸杆还田"不但可以带来经济效 益，还具有重要的社会和环境意义，秸杆中含有丰富的N、P、K和其它有机营养成分，利用微 生物对秸杆进行降解、腐熟，使其成为有机肥回用于农田，从而，及解决的环境污染问题，又 带来了巨大经济效益。秸杆腐熟剂在此过程中扮演着十分重要的角色，直接决定秸杆的腐 熟效果及秸杆有机肥的应用效果。而现有的秸杆腐熟剂存在着分解能力差、发酵周期长、腐 熟不彻底等问题。
【发明内容】
[0004] 本发明要解决的技术问题是针对现有技术的不足，提供一种小麦秸杆腐熟剂，该 小麦秸杆腐熟剂能快速、彻底地对农作物秸杆特别是小麦秸杆进行腐熟，而且，腐熟后的小 麦秸杆有机肥肥效高。
[0005] 为解决上述技术问题，本发明提供了一种小麦秸杆腐熟剂，包括枯草芽孢杆菌、绿 色木霉、黑曲霉、白腐真菌和假丝酵母，所述的枯草芽孢杆菌、绿色木霉、黑曲霉、白腐真菌 和假丝酵母的质量比为2:1:2:2:1，其中，枯草芽孢杆菌彡0. 6亿cfu/g、绿色木霉彡0. 5亿 cfu/g、黑曲霉彡0. 4亿cfu/g、白腐真菌彡0. 6亿cfu/g、假丝酵母彡0. 2亿cfu/g，所述的 小麦猜杆腐熟剂为液体。
[0006] 其中，枯草芽孢杆菌主要以孢子悬浮液形式存在，黑曲霉主要以孢子悬浮液形式 存在，绿色木霉主要以菌丝和孢子悬浮液形式存在，白腐真菌主要以菌丝球和孢子形式存 在，假丝酵母主要以悬浮液形式存在。
[0007] 本发明的小麦秸杆腐熟剂能快速、彻底地对农作物秸杆进行腐熟，而且，腐熟后的 小麦秸杆有机肥肥效高，能有效提高农作物产量与质量。
[0008] 本发明还提供了小麦秸杆腐熟剂的制备方法，包括以下步骤：
[0009] 1)、制备培养基：
[0010] A、制备LB液体培养基：取胰化蛋白胨10g、酵母提取物5g和NaCl10g溶解于1L 的容量瓶中，用1M的NaOH调节pH值到7. 0~7. 5,用水定容至1L，然后高压灭菌；
[0011] B、制备LB固体培养基：在步骤A制备的LB液体培养基内加入琼脂，琼脂的加入量 为 15g/L;
[0012] C、制备PDA液体培养基：取马铃薯200g、葡萄糖20g溶解于1L的容量瓶中，用水 定容至1L，然后高压灭菌；
[0013] D、制备PDA固体培养基：在步骤C制备的PDA液体培养基内加入琼脂，琼脂的加入 量为15g/L;
[0014] E、制备PDA液体诱导培养基：取马铃薯200g、葡萄糖5g、羧甲基纤维素钠15g溶解 于1L容量瓶中，用1M的NaOH调节pH值到7.0,定容至1L，高压灭菌；
[0015] F、制备PDA固体诱导培养基：在步骤E制备的PDA液体诱导培养基内加入琼脂，琼 脂的加入量为15g/L。
[0016] 2)、制备囷剂：
[0017]A、制备枯草芽孢杆菌菌液：
[0018] 将实验室保存的枯草芽孢杆菌接种于LB固体培养基上，在恒温箱内38°C培养 24h，再把培养好的菌落接种于LB液体培养基中，保持温度在38°C，搅拌转速为200rpm摇瓶 培养12h，得到枯草芽孢杆菌菌种液；然后将培养好的枯草芽孢杆菌菌种液接种于发酵罐 中的LB液体培养基中，进行扩大再培养，得到枯草芽孢杆菌菌液，低温保存备用；
[0019]B、制备黑曲霉菌液：
[0020] 将黑曲霉在无菌条件下接种于PDA固体斜面培养基上，在恒温箱中30°C培养48h， 待上面长出黑色菌丝后，转接于PDA液体培养基中，30°C，150rpm摇瓶培养72h，得到黑曲霉 菌种液；然后将黑曲霉菌种液转接到发酵罐中进行扩大再培养，得到黑曲霉菌液，进行低温 保存备用；
[0021] C、制备绿色木霉菌液：
[0022] 将绿色木霉在无菌条件下接种于PDA固体斜面培养基上，在恒温箱中32°C培养 48h，挑上层面白色菌丝转接于PDA液体培养基中，32°C，180rpm摇瓶培养72h，待液体颜色 变深，产生孢子，得到绿色木霉种液，再将绿色木霉种液转接到发酵罐中的发酵培养基中进 行扩大再培养，得到绿色木霉菌液，进行低温保存；
[0023] D、制备白腐真菌菌液：
[0024] 将白腐真菌在无菌条件下接种于PDA固体斜面培养基上，在恒温箱中37°C培养 48h，待长出菌丝后，转接于PDA液体培养基中，37°C，180rpm摇瓶培养72h，长出菌丝球，得 到白腐真菌种液，然后将白腐真菌种液转接到发酵罐中进行扩大再培养，得到白腐真菌菌 液，进行低温保存；
[0025]E、制备假丝酵母菌液：
[0026] 将假丝酵母在无菌条件下接种于PDA固体斜面培养基上，在恒温箱中33°C培养 48h，待上面长出菌落后，转接于PDA液体培养基中，33°C，200rpm摇瓶培养72h，然后将种子 液转接到发酵罐中进行扩大再培养，得到假丝酵母菌液，进行低温保存；
[0027] 3)、菌剂混合：
[0028] 将步骤2)制得的枯草芽孢杆菌菌液、黑曲霉菌液、绿色木霉菌液、白腐真菌菌液 和假丝酵母菌液按质量比为2 :1:2:2:1进行混合，混合后得到的菌液为小麦秸杆腐熟剂， 经测定，有效活菌数彡4亿cfu/g。
[0029]本发明的小麦秸杆腐熟剂的制备方法，操作简单，菌种容易培养，各菌种之间优劣 互补，不产生拮抗反应，和传统腐熟剂相比，腐熟效率显著提升；该小麦秸杆腐熟剂解决了 传统腐熟剂腐熟效率低，腐熟不彻底的技术难题，质量稳定可靠，具有一定的社会效益和经 济效益。
【附图说明】
[0030] 图1是喷洒不同腐熟剂的秸杆堆的温度变化曲线图。
[0031] 图2是喷洒不同腐熟剂的秸杆堆的秸杆失重率变化曲线图。
[0032] 图3是喷洒不同腐熟剂的秸杆堆的纤维素降解率变化曲线图。
[0033] 图4是喷洒不同腐熟剂的秸杆堆的半纤维素降解率变化曲线图。
[0034]图5是喷洒不同腐熟剂的秸杆堆的木质素降解率变化曲线图。
【具体实施方式】
[0035] 下面通过【具体实施方式】对发明作进一步说明。此处所描述的【具体实施方式】仅以解 释发明，并不用于限定本发明的保护范围。
[0036] 实施例一
[0037] 小麦秸杆腐熟剂，包括枯草芽孢杆菌、绿色木霉、黑曲霉、白腐真菌和假丝酵母，其 中，枯草芽孢杆菌多〇. 6亿cfu/g、绿色木霉多0.5亿cfu/g、黑曲霉多0.4亿cfu/g、白腐真 菌多0.6亿cfu/g、假丝酵母多0.2亿cfu/g，所述的小麦猜杆腐熟剂为液体。
[0038] 实施例二
[0039] 上述小麦秸杆腐熟剂的制备方法包括以下具体步骤：
[0040] 1)、制备培养基：
[0041] A、制备LB液体培养基：取胰化蛋白胨10g、酵母提取物5g和NaCl10g溶解于1L 的容量瓶中，用1M的NaOH调节pH值到7.0~7. 5,用水定容至1L，然后121°C高压灭菌 20min；
[0042]B、制备LB固体培养基：在步骤A制备的LB液体培养基内加入琼脂，琼脂的加入量 为15g/L;
[0043] C、制备PDA液体培养基：取马铃薯200g、葡萄糖20g溶解于1L的容量瓶中，用水 定容至1L，然后121°C高压灭菌20min;
[0044] D、制备PDA固体培养基：在步骤C制备的PDA液体培养基内加入琼脂，琼脂的加入 量为15g/L;
[0045]E、制备PDA液体诱导培养基：取马铃薯200g、葡萄糖5g、羧甲基纤维素钠15g溶解 于1L容量瓶中，用1M的NaOH调节pH值到7. 0,定容至1L，121°C高压灭菌20min;
[0046] F、制备PDA固体诱导培养基：在步骤E制备的PDA液体诱导培养基内加入琼脂，琼 脂的加入量为15g/L。
[0047] 2)、制备菌剂：
[0048] A、制备枯草芽孢杆菌菌液：
[0049] 将枯草芽孢杆菌接种于LB固体培养基上，在恒温箱内38 °C培养24h，再把培养好 的菌落接种于LB液体培养基中，保持温度在38°C，搅拌转速为200rpm摇瓶培养12h，得到 枯草芽孢杆菌菌种液；然后将培养好的枯草芽孢杆菌菌种液接种于发酵罐中的LB液体培 养基中，进行扩大再培养，发酵罐体积为50L，培养基为40L，搅拌转速为200rpm，通气比为 0. 8vvm，发酵20h后得到枯草芽孢杆菌菌液，低温保存备用；
[0050] B、制备黑曲霉菌液：
[0051] 将黑曲霉在无菌条件下接种于PDA固体斜面培养基上，在恒温箱中30°C培养48h， 待上面长出黑色菌丝后，转接于PDA液体培养基中，30°C，150rpm摇瓶培养72h，得到黑曲霉 菌种液；然后将黑曲霉菌种液转接到发酵罐中进行扩大再培养，发酵罐体积为50L，培养基 为20L，搅拌转速为150rpm，通气比为lvvm，发酵72h后得到黑曲霉菌液，进行低温保存备 用；
[0052] C、制备绿色木霉菌液：
[0053] 将绿色木霉在无菌条件下接种于PDA固体斜面培养基上，在恒温箱中32°C培养 48h，挑上层面白色菌丝转接于PDA液体培养基中，32°C，180rpm摇瓶培养72h，待液体颜色 变深，产生孢子，得到绿色木霉种液，再将绿色木霉种液转接到发酵罐中的发酵培养基中， 发酵罐体积为50L，培养基为40L，搅拌转速为180rpm，通气比为lvvm，发酵72h后得到绿色 木霉菌液，进行低温保存；
[0054] D、制备白腐真菌菌液：
[0055] 将白腐真菌在无菌