酒精饮料中降低的毒性的制作方法
【专利说明】酒精饮料中降低的毒性
[0001] 以下说明书特别地描述本发明和本发明被进行的方式。 发明领域
[0002] 本公开内容提供具有降低的肝毒性的酒精饮料。本发明还涉及用于制备所述饮料 的工艺。
[0003] 发明背景
[0004] 乙醇消耗可以导致60种医疗状况。乙醇的急性以及慢性毒性作用可以引发不可 逆的器官损伤（DasS.K.等人，IndianJournalofBiochemistry&Biophysics, 2010，第 47卷，32)。酒精性肝病（ALD)的广泛接受的形式是单纯性脂肪肝（脂肪变性），其是随着 节制可逆的，伴随炎症的脂肪肝（脂肪性肝炎）导致瘢痕组织形成（纤维化）、正常肝结构 的破坏（肝硬化），其可以或可以不随着节制改善并且随后导致肝癌（肝细胞癌）。在2010 年，WHO提出在美国10%的成人人群罹患酒精使用紊乱并且肝硬化在美国是第12主要死亡 原因（AlcoholandHealth，Focuson:AlcoholandtheLiver，2010,第33卷，第 1和 2 期，87)。已知人类摄取的5%的乙醇（ethylalcohol)即乙醇（ethanol)(下文中酒精） 被未改变地排泄，然而剩下的95%被降解成乙醛。酒精从胃肠道被快速吸收。在禁食状态 中，峰值血液酒精浓度在30分钟内达到。分布是快速的，且组织水平接近血液浓度。肝负 责近90%的酒精代谢，其余通过肺&尿被排泄。典型的成人可以代谢7-10g的酒精/小时 (美国专利第7666909B2号）。
[0005] 酒精代谢的主要路径，当以低至中度的量被消耗时，主要在肝细胞的细胞质中被 醇脱氢酶（ADH)催化以形成乙醛。NADH在肝中的累积（过量还原当量）随着慢性酒精使用 在更显著见到的肝损伤中起作用。通过微粒体乙醇氧化系统（ME0S)产生的乙醛初始地代 表可能地解释小于10%的肝氧化乙醇的能力的乙醇氧化的次要路径。
[0006]在较高酒精水平（>l〇〇mg/dl)下，ME0S取决于使用NADH作为辅因子&02在酒精 代谢中起重要作用的CYP450(2E1，1A2& 3A4)。在禁食状态中，在过氧化氢产生系统存在下 过氧化氢酶尤其能够氧化乙醇。乙醛在肝中经由线粒体烟酰胺腺嘌呤二核苷酸（NAD+)依 赖性醛脱氢酶（ALDH)被氧化成乙酸盐。ALDH的活性比ADH低近3倍，因此发生乙醛的累 积。乙酸盐被进一步代谢成乙酰CoA并且可以进入TCA循环或合成脂肪酸。这些路径中的 每个随着细胞氧化还原状态中伴随的变化导致自由基的形成（像活性氧{R0S})(即，NADH 与NAD+的比率导致产生更多NADH(被两个电子还原的烟酰胺腺嘌呤二核苷酸（NAD+))。在 线粒体呼吸链中在确定反应的动力学的此系统的最大能力下，细胞具有使NADH氧化回至 NAD+的限制的能力。与酒精代谢相关的氧化还原状态引起对肝细胞的正常代谢是典型的 NAD+介导的酶反应的抑制。柠檬酸循环是最受影响的，因为其受到抑制。这导致正的NADH/ NAD比率，其被认为是酒精诱导的脂肪肝的发展的最重要的原因。线粒体呼吸链的最大能 力取决于身体代谢的总体水平。改变的氧化还原状态的结果包括低氧（缺氧细胞）。酒精 诱导的肝毒性的其他合理的路径包括通过肠内毒素刺激的枯否细胞过量产生促炎症细胞 因子。R0S主要与线粒体电子传递系统相关地产生；其在肝中也由CYP2E1和由激活的枯否 细胞产生。急性和慢性酒精消耗两者均可以提高ROS产生，ROS产生通过以上提及的多种 路径导致氧化应激[(Zakhari，S.AlcoholResearch&Health, 2006, 29, 4, 245)，（Wheeler M.D.等人，FreeRadicalBiology&Medicine，2001,第31 卷，第 12 期，1544)，（Koop，D. R.，AlcoholResearch&Health, 2006, 29, 4, 274)，（美国专利第 7666909B2 号）]。
[0007] 酒精引起细胞损伤的涉及的机制是若干互相关联的路径的复合和组合。R0S主要 与细胞膜反应（紧密的连接变得更可渗透的）并且进而渗漏脂多糖（LPS)，结果损害肠道结 构的完整性。转氨酶[天冬氨酸转氨酶（AST)和丙氨酸转氨酶（ALT)]的提高指示细胞渗 漏和细胞膜的功能性完整性的损失（Yue等人，2006)。细胞完整性的损失影响肝胆功能，导 致提高的碱性磷酸酶（ALKP)活性，且同时血清胆红素水平升高并且总血浆蛋白含量降低。 R0S的水平的升高和降低两者均可以导致肝细胞的细胞凋亡（WheelerM.D.AlcoholRes. Health, 2003 ;27, 300)。对于正常地起作用的细胞，GSH对于保护自身免受在线粒体呼吸链 的活动期间产生的R0S是重要的。酒精消耗快速耗尽GSH水平；酒精干扰细胞色素c以从 线粒体渗漏到细胞质内，其可以激活被称为可以引发细胞凋亡的半胱天冬酶的酶。
[0008]R0S诱导LP0[R0S与丙二醛（MDA)、4_羟基壬烯醛（HNE)反应]并且被认为是肝 细胞损伤的重要的起始点。内毒素激活的枯否细胞影响线粒体，导致释放R0S(过氧化氢 自由基、羟基自由基、特别地超氧化物自由基）和若干细胞因子（也就是，肿瘤坏死因子 {TNF-a})，导致肝细胞坏死和凋亡。已经通过临床研究建立的是，具有酒精性肝病的患者 具有炎症性细胞因子IL-1、IL-6、和TNF-a以及趋化因子IL-8和其他细胞因子的提高的 水平。
[0009] 酒精可以提高肝细胞的敏感性，这因此可以导致线粒体中R0S的提高的产生。R0S 可以激活称为核因子kB(NFkB)的调节蛋白，其在调节免疫应答中起关键作用并且控制 大量基因的活动，包括表达TNF-a&其受体以及促进细胞凋亡的基因编码蛋白的活动。因 此，恶性循环将在肝细胞中建立：TNF-a促进R0S产生，这进而激活NFkB，导致另外的 TNF-a和其受体的提高的产生以及导致促进细胞凋亡的因子的产生。此循环最终改变肝细 胞的结构，损害其功能，并且可以导致肝细胞凋亡。TNF-a还通过促进增殖有助于肝细胞再 生[(WheelerM.D.AlcoholResHealth, 2003 ;27, 300)，（MolinaP.，Happel，K.I.，Zhang P.,RollsJ.K. ,NelsonS.,Focuson:alcoholandtheimmunesystem.AlcoholRes. Health，2010, 33(1 & 2)，97)1)]。
[0010] TGF-e(转化生长因子e)可以参与酒精诱导的肝损伤的形成，这可以引起肝细 胞产生通常负责给予细胞其形状的像转谷氨酰胺酶、细胞角蛋白的分子。过量地，这些分子 交联以形成称为马洛里小体的显微结构，其是酒精性肝炎的标志物。TGF-P还可以通过激 活星形细胞促进肝损伤。在正常状态中，这些细胞主要用来在肝中储存脂肪和维生素A。当 被激活时，星形细胞产生胶原蛋白，瘢痕组织的主要组分，其导致肝纤维化的形成。酒精可 以引发TGF-P的激活并且从而有助于细胞凋亡的开始，如果此分子以较高浓度进入血液 (WheelerM.D.，AlcoholRes.Health, 2003 ;27, 300)〇
[0011] 在细胞中，乙醛或ROS与DNA或蛋白或蛋白构件和ROS与MDA或MAA(混合的 MDA-乙醛-蛋白加合物）或HNE等可以形成稳定的或不稳定的加合物，所述加合物可以是 致癌的、免疫原性的，诱导炎症过程、对线粒体的损伤等[(Zakhari,S.AlcoholResearch &Health,2006,29 (4)245) ； (D.ffu,AlcoholResearch&Health, 2006, 27, 4, 277)； (WheelerM.D. ,AlcoholRes.Health, 2003 ；27,300) ；(MolinaP.,HappelK.I. ,Zhang P.,RollsJ.K. ,NelsonS. ,Focuson:alcoholandtheimmunesystem；(AlcoholRes. Health, 2010, 33,第1&2卷，97);(NeumanM.G.,Cytokine-centralfactorinalcoholic liverdisease,AlcoholRes.Health, 2003, 27, 307) ]〇
[0012] 多种内源性酶促的或非酶促的机制已经发展以保护细胞抵抗R0S。这包括移除 〇2的超氧化物歧化酶（S0D);移除H202的过氧化氢酶（CAT)和谷胱甘肽过氧化物酶（GPX)系 统和诸如还原的谷胱甘肽（GSH)、维生素E、维生素C、维生素A、泛醌、尿酸和胆红素的非酶 促低分子量抗氧化剂。但这些能够在受限制的程度上保护细胞。可以通过口服施用像S-腺 苷-L-甲硫氨酸（SAMe)、N-乙酰基半胱氨酸（NAC)的谷胱甘肽前体或像维生素E、维生素 C、植物生物活性物（没食子酸、槲皮素等）等的抗氧化剂实现另外的保护（D.Wu，Alcohol Research&Health, 2006, 27, 4, 277)〇
[0013] 本发明现有技术
[0014] 文献公开具有多种类型的添加剂的酒精饮料。以下文献存在于本发明的领域中并 且已经以其整体被考虑。
[0015] 美国专利公布第20100086666号公开酒精饮料，其中像酪蛋白的蛋白水解以提高 较顺口的味道并且向消费者给出某些营养益处。
[0016]DasS.K?等人（IndianJournalofBiochemistry&Biophysics, 2010，第 47 卷，32)描述白藜芦醇或维生素E与酒精的联合治疗在小鼠中改善酒精诱导的氧化应激、血 管生成过程并且帮助控制免疫调节活性。
[0017]美国专利公布第20100086666号公开酒精饮料，其包含像表没食子儿茶素没食子 酸酯（EGCG)、表没食子儿茶素（EGC)、表儿茶素（EC)、表儿茶素没食子酸酯（ECG)、