一种蔓荆子黄素的制备方法
【技术领域】
[0001] 本发明属于天然药物提取分离领域，特别设及一种蔓荆子黄素的制备方法。
【背景技术】
[0002] 蔓荆子为马鞭草科牡荆属单叶蔓荆VitextrifoliaL.var.simplicifolia 化arm.或蔓荆Vitextri化IiaL的干燥成熟果实，主要产于山东、广西、云南、江西、浙江、 福建、及广东等地。蔓荆子为常用中药，具有疏散风热、清利头目、止痛的功效。临床上用于 治疗风热、感冒头痛、偏头痛等症。据报道，蔓荆子的主要活性成分是黄酬类化合物，其中蔓 荆子黄素作为我国2010版药典规定的蔓荆子药材的质控指标。
[0003] 现在研究表明，蔓荆子黄素具有抗缺氧、抗不良刺激、抗疲劳、双向调节机体、抑制 血糖升高和影响学习记忆等多种作用。由此可见，目标成分的开发具有广泛的商业价值。结 构式如下：
[0004]
[0005]目前，蔓荆子中的蔓荆子黄素提取分离主要多采用柱色谱法，分离周期长，消耗溶 剂多，操作复杂。高速逆流色谱化i曲-speedcountercurrentC虹omatogra地y，服CCC) 作为一种新型分离纯化技术，操作方便，快捷，分离度较高，克服了由固相载体带来的样品 结合、失活、污染等缺点，已被广泛应用于天然产物活性成分的分离制备和总草药的分析鉴 定。有文献报道用高速逆流色谱分离纯化蔓荆子黄素，但有上样量少，分离时间长，纯化效 果不好等缺点，不能实现规模化生产。
【发明内容】
[0006] 本发明所要解决的技术问题是提供一种蔓荆子黄素的制备方法，该方法制备蔓荆 子黄素，产品纯度高，品质好，适用于各种型号高速逆流色谱仪，易于产业化放大。
[0007] 本发明的一种蔓荆子黄素的制备方法，包括：
[000引 （1)将粉碎后的蔓荆子原料，W固液质量比1:5-10加入乙醇溶液，超声提取，浓缩 提取液得到浸膏（减压浓缩至无醇味）；将浸膏按固液质量比1:100-150用醇水溶液溶解， 萃取，减压浓缩得到萃取物；
[0009] (2)采用柱色谱，W聚酷胺为填料，醇水溶液洗脱上述萃取物，收集含有蔓荆子黄 素的流份，浓缩，干燥，得到粗提物；
[0010] (3)对上述粗提物采用高速逆流色谱法分离，高速逆流色谱的溶剂系统由正己烧、 乙酸乙醋、甲醇和水按体积比1:1-2:1-2:2组成；紫外检测器在线监测，收集流份减压浓 缩，结晶，干燥，得到蔓荆子黄素。
[0011] 所述步骤（1)中的乙醇的体积分数为30-90%。
[0012] 所述步骤（1)中的超声提取次数为2~3次。
[0013] 所述步骤（1)中的醇水溶液为体积分数30-90%的乙醇水溶液。
[0014] 所述步骤（1)中的萃取所用溶剂为石油酸。
[0015] 所述步骤（2)中的醇水溶液为体积分数75-95%的乙醇水溶液。
[0016] 所述步骤（3)中的高速逆流色谱的分离条件为：主机转速750-1000巧m/min，流动 相 2. 5-15.Oml/min，水浴溫度 10-35°C。
[0017] 所述步骤（3)中的溶剂系统的上相为固定化下相为流动相。
[0018] 本发明将样品进行特殊简便预处理，使得样品纯度提高1倍，上样量增加3倍，同 时摸索溶剂体系，使得分离时间缩短1倍，旨在解决现有分离工艺效率较低，未能实现大量 制备分离的问题。
[0019]有益效果
[0020] (1)本发明分离方法简便，快捷，分离周期短，可W短时间内分离制备高纯度蔓荆 子黄素。传统的柱色谱方法操作繁琐，需要反复的进行柱层析分离，分离周期长，目标成分 死吸附严重。
[0021] (2)本发明单体制备量大，根据所需蔓荆子黄素的质量，可W调节被分离样品的进 样量，采用制备型高速逆流色谱仪，工艺重现性好，产品纯度高，具有良好的应用前景。
【附图说明】
[0022] 图1为实施例IHSCCC分离得到的蔓荆子黄素图谱；
[0023] 图2为蔓荆子黄素HPLC图谱。
【具体实施方式】
[0024] 下面结合具体实施例，进一步阐述本发明。应理解，运些实施例仅用于说明本发明 而不用于限制本发明的范围。此外应理解，在阅读了本发明讲授的内容之后，本领域技术人 员可W对本发明作各种改动或修改，运些等价形式同样落于本申请所附权利要求书所限定 的范围。
[0025] 实施例1
[0026] 取经干燥的蔓荆子原料粉碎，称2000g，每次加入IOL80%乙醇溶液超声提取60 分钟，提取3次，减压浓缩提取液得到浸膏45g。按1质量份浸膏加入100质量份50%乙醇 水溶液溶解，石油酸萃取，共萃取3次，合并萃取液回收石油酸得萃取物40g，萃取物上目数 为100-200的聚酷胺柱，W体积分数80%的乙醇水溶液洗脱，收集洗脱液，浓缩干燥得粗提 物，用于高速逆流分离。
[0027] 在分液漏斗里配制正己烧、乙酸乙醋、甲醇、水两相溶剂体系，按体积比1:2:1:2 混合，振摇后静置分层，超声脱气30min。取上相注满高速逆流色谱仪作为固定相，转动主 机，转速80化pm，同时W5ml/min累入下相做流动相，水浴溫度为20°C，建立动态平衡后， 用流动相溶解粗提物，由进样阀进样，紫外检测器在254nm波长下在线监测，收集各目标成 分，连续制备，相应合并回收试剂，浓缩后甲醇结晶，从1000 mg粗提物中分离得到高纯度的 蔓荆子黄素200mg。经HPLC检测，含量98.O%，经UV、IR、MS、HNMR、CNMR等表征其物理性 状的数据与现有技术相一致。
[002引实施例2
[0029] 取经干燥的蔓荆子原料粉碎，称2000g，每次加入10L95%乙醇溶液超声提取60分 钟，提取3次，减压浓缩提取液得到浸膏40g。按1质量份浸膏加入100质量份50%乙醇 水溶液溶解，石油酸萃取，共萃取3次，合并萃取液回收石油酸得萃取物35g，萃取物上目数 为200-300的聚酷胺柱，W体积分数95%的乙醇水溶液洗脱，收集洗脱液，浓缩干燥得粗提 物，用于高速逆流分离。
[0030] 在分液漏斗里配制正己烧、乙酸乙醋、甲醇、水两相溶剂体系，按体积比1:2:2:2 混合，振摇后静置分层，超声脱气30min。取上相注满高速逆流色谱仪作为固定相，转动主 机，转速80化pm，同时WlOml/min累入下相做流动相，水浴溫度为25°C，建立动态平衡后， 用流动相溶解粗提物，由进样阀进样，紫外检测器在254nm波长下在线监测，收集各目标成 分，连续制备，相应合并回收试剂，浓缩后甲醇结晶，从1000 mg粗提物中分离得到高纯度的 蔓荆子黄素300mg。经HPLC检测，含量97. 7 %，经UV、IR、MS、HNMR、CNMR等表征其物理性 状的数据与现有技术相一致。
[00引]实施例3
[0032] 取经干燥的蔓荆子原料粉碎，称2000g，每次加入IOL70%乙醇溶液超声提取60 分钟，提取3次，减压浓缩提取液得到浸膏60g。按1质量份浸膏加入100质量份70%乙醇 水溶液溶解加石油酸萃取，共萃取3次，合并萃取液回收石油酸得萃取物51g，萃取物上目 数为300-400的聚酷胺柱，W体积分数75%的乙醇水溶液洗脱，收集洗脱液，浓缩干燥得粗 提物，用于高速逆流分离。
[0033] 在分液漏斗里配制正己烧、乙酸乙醋、甲醇、水两相溶剂体系，按体积比1:2:1:1 混合，振摇后静置分层，超声脱气30min。取上相注满高速逆流色谱仪作为固定相，转动主 机，转速80化pm，同时W8ml/min累入下相做流动相，水浴溫度为30°C，建立动态平衡后， 用流动相溶解粗提物，由进样阀进样，紫外检测器在254nm波长下在线监测，收集各目标成 分，连续制备，相应合并回收试剂，浓缩后甲醇结晶，从1000 mg粗提物中分离得到高纯度的 蔓荆子黄素250mg。经HPLC检测，含量98. 8 %，经UV、IR、MS、HNMR、CNMR等表征其物理性 状的数据与现有技术相一致。
【主权项】
1. 一种蔓荆子黄素的制备方法，包括： (1) 将粉碎后的蔓荆子原料，以固液质量比1:5-10加入乙醇溶液，超声提取，浓缩提 取液得到浸膏；将浸膏按固液质量比1:100-150用醇水溶液溶解，萃取，减压浓缩得到萃取 物； (2) 采用柱色谱，以聚酰胺为填料，醇水溶液洗脱上述萃取物，收集含有蔓荆子黄素的 流份，浓缩，干燥，得到粗提物； (3) 对上述粗提物采用高速逆流色谱法分离，高速逆流色谱的溶剂系统由正己烷、乙酸 乙酯、甲醇和水按体积比1:1-2:1-2:2组成；紫外检测器在线监测，收集流份减压浓缩，结 晶，干燥，得到蔓荆子黄素。2. 根据权利要求1所述的一种蔓荆子黄素的制备方法，其特征在于：所述步骤（1)中 的乙醇的体积分数为30-90 %。3. 根据权利要求1所述的一种蔓荆子黄素的制备方法，其特征在于：所述步骤（1)中 的超声提取次数为2~3次。4. 根据权利要求1所述的一种蔓荆子黄素的制备方法，其特征在于：所述步骤（1)中 的醇水溶液为体积分数30-90%的乙醇水溶液。5. 根据权利要求1所述的一种蔓荆子黄素的制备方法，其特征在于：所述步骤（1)中 的萃取所用溶剂为石油醚。6. 根据权利要求1所述的一种蔓荆子黄素的制备方法，其特征在于：所述步骤（2)中 的醇水溶液为体积分数75-95 %的乙醇水溶液。7. 根据权利要求1所述的一种蔓荆子黄素的制备方法，其特征在于：所述步骤（3)中 的高速逆流色谱的分离条件为：主机转速750-1000rpm/min，流动相2. 5-15.Oml/min，水浴 温度 10-35 °C。8. 根据权利要求1所述的一种蔓荆子黄素的制备方法，其特征在于：所述步骤（3)中 的溶剂系统的上相为固定相，下相为流动相。
【专利摘要】本发明涉及一种蔓荆子黄素的制备方法，包括：(1)将粉碎后的蔓荆子原料，加入乙醇，超声提取，浓缩提取液得到浸膏；将浸膏按固液用醇水溶液溶解，萃取，减压浓缩得到萃取物；(2)采用柱色谱，以聚酰胺为填料，醇水溶液洗脱上述萃取物，收集含有蔓荆子黄素的流份，浓缩，干燥，得到粗提物；(3)对上述粗提物采用高速逆流色谱法分离，高速逆流色谱的溶剂系统由正己烷、乙酸乙酯、甲醇和水组成；紫外检测器在线监测，收集流份减压浓缩，结晶，干燥，得到蔓荆子黄素。采用本发明制备蔓荆子黄素，产品纯度高，品质好，适用于各种型号高速逆流色谱仪，易于产业化放大。
【IPC分类】C07D311/40, C07D311/30
【公开号】CN105294629
【申请号】CN201510795076
【发明人】王维娜, 邓力
【申请人】上海同田生物技术股份有限公司
【公开日】2016年2月3日
【申请日】2015年11月18日