一种羟基-β-山椒素单体的制备方法
【技术领域】
[0001 ]本发明属于天然药物提取技术领域。
【背景技术】
[0002] 花椒（Zanthoxylum L.)为芸香科(Rutaceae)花椒属（ZanthoxylumL inn)植物。花 椒果实是我国传统的"八大调味品"之一，其辛麻味是主要的风味特征，也是最重要的品质 指标。此外花椒也是我国常用中药，可用于治疗呕吐、腹泻、蛔虫病等，外用可治疗湿疹痛 痒、活血散瘀，而且对心血管系统疾病的治疗及镇痛、镇静、抗炎、抑菌等方面均有明显的药 理活性。
[0003] 花椒酰胺大多为链状不饱和脂肪酸酰胺结构，其中以山椒素为代表是花椒麻味的 主要成分，具有刺激TRPVUTRPA1等作用。花椒中酰胺类物质主要为羟基-α-山椒素和羟基- 山椒素，但是由于羟基-α_山椒素不稳定，不符合标准品要求，不具备作为麻味参比样的 条件。羟基-β_山椒素相对于羟基-α_山椒素含量略少，但是相对比较稳定，可以制备成花椒 麻味参比样。羟基-β-山椒素，具有麻醉性辛辣味，是花椒产生麻味作用机制最主要的活性 化合物之一，存在于芸香科植物山椒及川椒的果实，其分子式为C 16H25N02。高林幸子等人曾 于2012年11月13日公开了中国专利申请，名称为"含羟基山椒素的提取物的制造方法"（申 请公布号:CN 201210452421.9)，发明了低含量的羟基山椒素混合物的提取方法。赵志峰等 人曾于2012年05月31日公开了中国专利申请，名称为"一种从花椒油中提取羟基山椒素的 方法"（申请公布号:CN 201210175527.9 )，发明了提取羟基山椒素混合物的方法。目前有关 花椒麻味物质的提取制备方法主要是利用超临界C02萃取分离出花椒麻味物质山椒素，提 取物大多为花椒油树脂或精油，仅能得到混合的羟基山椒素，而不能高效地分离纯化得到 花椒的羟基-β_山椒素单体，很大程度限制了花椒麻味物质的研究及应用。
【发明内容】
[0004] 本发明的目的是提供一种羟基-β_山椒素单体的制备方法，它能有效地在花椒原 料中提取羟基_β_山椒素单体。
[0005] 本发明目的另一个目的是提供一种羟基-β_山椒素单体的制备方法，它能有效地 制备纯度较高羟基-β_山椒素单体。
[0006] 本发明的目的是通过以下技术方案来实现的:包括标的物的提取、富集，制备工艺 步骤如下：
[0007] 步骤一、羟基山椒素混合物的提取
[0008] 将干燥花椒果皮破碎，提取溶剂用体积分数为85%以上的低级醇的水溶液对花椒 果皮粉末进行冷浸提取，液料比为1:5~1:10，提取时间为48h，提取2~3次，合并浸提液，弃 药渣，浸提液减压浓缩得浓缩液，浓缩液的体积为浸提液的1/5~1/4，得到羟基山椒素混合 物；
[0009] 步骤二、羟基山椒素混合物的富集
[0010]将步骤一所得的羟基山椒素混合物用水稀释到低级醇溶液体积分数10%~20%， 通过非极性聚苯乙烯型大孔吸附树脂柱层析进行分离纯化，干燥花椒果实重量与大孔吸附 树脂体积比例为lKg: 0.5~1L，动态吸附上样，吸附速度控制在每小时2.0BV~3.0BV，吸附 完毕后，先分别用2.0BV~3.0BV的水和50 %~60 %的低级醇溶液洗脱除杂，再用2.5BV~ 4.0BV的85 %~95 %的低级醇溶液洗脱，收集洗脱液，减压浓缩得羟基山椒素混合物浸膏。 [0011]步骤三、羟基-β-山椒素的转化
[0012]由于步骤二所得的羟基山椒素混合物浸膏中羟基-α-山椒素比羟基-β-山椒含量 高，需要通过双键顺反异构反应进行转化，将羟基山椒素混合物浸膏用有机溶剂溶解，加入 碘作为催化剂进行双键顺反异构化反应，反应平衡后，部分羟基-α_山椒素转化成羟基-β_ 山椒素，反应式如下：
[0014] 反应后提高了羟基-β-山椒素在羟基山椒素混合物浸膏溶液中的含量。
[0015] 步骤四、羟基-β-山椒素的纯化
[0016] 将步骤三所得羟基山椒素混合物浸膏溶液放置于冰箱中低温冷冻析晶，过滤干燥 得到纯度达到70%以上的羟基-β-山椒素单体；
[0017] 步骤一中所述的低级醇溶液为甲醇、乙醇的一种或一种以上的混合物。
[0018] 步骤二中所述的非极性聚苯乙烯型大孔树脂型号是D101、AB-8、HP20。
[0019] 步骤三中所述有机溶剂为石油醚、丙酮、乙酸乙酯中的一种或一种以上的混合物。
[0020] 本发明的目的另一个目的是通过以下技术方案来实现的：一种羟基-β-山椒素单 体的制备方法，包括重复上述经过的步骤一~步骤三：
[0021 ]步骤一、羟基山椒素混合物的提取
[0022]将干燥花椒果皮破碎，提取溶剂用体积分数为85%以上的低级醇的水溶液对花椒 果皮粉末进行冷浸提取，液料比为1:5~1:15，提取时间为48h，提取2~3次，合并浸提液，弃 药渣，浸提液减压浓缩得浓缩液，浓缩液的体积为浸提液的1/5~1/4，得到羟基山椒素混合 物。
[0023]步骤二、羟基山椒素混合物的富集
[0024]将步骤一所得的羟基山椒素混合物用水稀释到低级醇体积分数为10%~20%，通 过非极性聚苯乙烯型大孔吸附树脂柱层析进行分离纯化，干燥花椒果实重量与大孔吸附树 脂体积比例为lKg: 0.5L~1L，动态吸附上样，吸附速度控制在每小时2.0BV~3.0BV，吸附完 毕后，先分别用2.0BV~3.0BV的水和50 %~60 %的低级醇溶液洗脱除杂，再用2.5BV~ 4.0BV的85 % -95 %的低级醇溶液洗脱，收集洗脱液，减压浓缩得羟基山椒素混合物浸膏。 [0025]步骤三、羟基-β_山椒素的转化
[0026]由于步骤二所得的羟基山椒素混合物浸膏中羟基-α-山椒素比羟基-β-山椒含量 高，需要通过双键顺反异构反应进行转化，将羟基山椒素混合物浸膏用有机溶剂溶解，加入 碘作为催化剂进行双键顺反异构化反应，反应平衡后，部分羟基-α_山椒素转化成羟基-β_ 山椒素，反应式如下：
[0028]反应后提高了羟基-β-山椒素在羟基山椒素混合物浸膏溶液中的含量。
[0029]步骤四、羟基-β_山椒素的纯化
[0030] 将步骤三得到的羟基山椒素混合物浸膏溶液放置于冰箱中低温冷冻析晶，过滤干 燥得到纯度达到70%以上的羟基-β-山椒素单体。
[0031] 步骤五、重结晶
[0032] 将羟基-β-山椒素混合物浸膏用有机溶剂溶解，冷冻放置，析晶，过滤干燥，得到纯 度达到98%以上的羟基-β-山椒素单体。
[0033] 步骤一中所述的低级醇为甲醇、乙醇中的一种或一种以上的混合物。
[0034]步骤二中所述的非极性聚苯乙烯型大孔树脂型号是D101、AB-8、HP20。
[0035]步骤三中所述的有机溶剂为石油醚、丙酮、乙酸乙酯中的一种或一种以上的混合 物。
[0036]步骤五中所述的有机溶剂为石油醚、丙酮、乙酸乙酯中的一种或一种以上的混合 物。
[0037]与现有技术相比的优点和效果：
[0038] -、本发明方法通过提取、富集、转化、纯化和重结晶五个步骤即可获得高纯度的 羟基-β-山椒素单体。整个制备过程条件温和，最高温度不超过60°C，保证了羟基-β_山椒素 的稳定性，且收率高、操作简便、对操作人员技术要求低，适合工业化推广。
[0039] 二、本发明所得的产品纯度高，制得的羟基-β-山椒素单体纯度可达98%以上。填 补了目前花椒麻度检测及花椒品质检测中羟基-β_山椒素作为参比样的空白。
[0040] 三、本发明方法使用的设备主要是，柱层析时的层析柱，减压浓缩时的旋转蒸发 仪，层析柱和旋转蒸发仪的价格低廉，生产成本低。
【附图说明】
[0041] 图1是本发明实施例5获得的羟基-β-山椒素单体的高效液相色谱分析图，图中t = 17.52min峰为羟基-β-山椒素。
[0042] 图2是本发明实施例5获得的羟基-β-山椒素单体的核磁共振氢谱图。
[0043] 图3是本发明实施例5获得的羟基-β-山椒素单体的核磁共振碳谱图。
【具体实施方式】
[0044] 实施例1
[0045] -种羟基-β-山椒素单体的制备方法，包括下述步骤：
[0046] ⑴羟基山椒素混合物的提取
[0047]取干燥花椒果皮2kg破碎，用体积分数为95 %乙醇的水溶液浸提48h，液料比为1: 10，提取3次，合并浸提