[0093] 将双键异构反应后的羟基山椒素混合物浸膏溶液放置于冰箱中低温冷冻48h，析 晶，过滤干燥得到纯度达到79%的羟基-β-山椒素单体13g;
[0094] (5)将步骤⑷所得羟基-β-山椒素单体用丙酮溶解，冷冻放置8h，析晶，过滤干燥，得 羟基-β-山椒素单体8. lg，利用高相液相色谱(HPLC)检测本例得到的羟基β-山椒素单体的 纯度，测得其纯度为99.4%。
[0095] 实施例6
[0096] -种羟基-β-山椒素单体的制备方法，包括下述步骤：
[0097]⑴羟基山椒素混合物的提取
[0098]取干燥花椒果皮10kg破碎，用体积分数为95%乙醇的水醇浸提48h，液料比为1: 15，提取3次，合并浸提液，弃药渣，浸提液在50°C温度下减压浓缩得浓缩液，浓缩液的体积 为浸提液的1/4，得到羟基山椒素混合物即花椒酰胺粗品。
[0099]⑵羟基山椒素混合物的富集
[0100]将步骤⑴所得的花椒酰胺粗品用水稀释到甲醇体积分数为10%，通过D101型大孔 吸附树脂柱层析进行分离纯化，大孔吸附树脂体积与干燥花椒果实重量比例为lKg:0.5L， 动态吸附上样，吸附速度控制在每小时2.0BV，吸附完毕后，先分别用2.0BV的水和50 %的乙 醇溶液洗脱除杂，再用4.0BV的95 %的乙醇溶液洗脱，收集洗脱液，于50°C温度下减压浓缩 得浸膏134g;
[0101] ⑶羟基-β-山椒素的转化
[0102] 由于步骤⑵所得的羟基山椒素混合物浸膏中羟基-α-山椒素比羟基-β-山椒含量 高，所以需要进行双键异构反应转化，用石油醚：乙酸乙酯（1:5)混合溶液溶解羟基山椒素 混合物浸膏，通过HPLC检测可知该溶液中羟基-α-山椒素与羟基-β-山椒素比例为2.3:1，加 入该溶液的2%碘作为催化剂进行双键异构反应，10°C反应36小时后，部分羟基-α-山椒素 转化成羟基-β_山椒素，溶液中羟基-α_山椒素与羟基-β_山椒素比例为1:2.73。
[0103] ⑷羟基-β-山椒素的纯化
[0104] 将双键异构反应后的羟基山椒素混合物浸膏溶液放置于冰箱中低温冷冻10h，析 晶，过滤干燥得到纯度达到73.4%的羟基-β-山椒素单体llg。
[0105] (5)将步骤⑷所得羟基-β-山椒素单体用石油醚乙酸乙酯（1:2)溶解，冷冻放置8h， 析晶，过滤干燥，得羟基-β-山椒素单体7g，利用高相液相色谱(HPLC)检测本例得到的羟基 山椒素单体的纯度，测得其纯度为98.2%。
[0106] 使用高效液相色谱(HPLC)对下述实施例的终产品羟基-β-山椒素单体进行纯度检 测。其中色谱条件为：流动相组成为甲醇-水70 : 3，色谱柱型号YMC-Pack 0DS-A色谱柱 (4· 6mmX 250mm，5μηι);流速 1 · OmL/min;柱温：室温；检测波长254nm。
【主权项】
1. 一种羟基-β-山椒素单体的制备方法，包括标的物的提取、富集，其特征在于： 步骤一、羟基山椒素混合物的提取 将干燥花椒果皮破碎，提取溶剂用体积分数为85%以上的低级醇的水溶液对花椒果皮 粉末进行冷浸提取，液料比为1: 5~1:10，提取时间为48h，提取2~3次，合并浸提液，弃药 渣，浸提液减压浓缩得浓缩液，浓缩液的体积为浸提液的1/5~1/4，得到羟基山椒素混合 物； 步骤二、羟基山椒素混合物的富集 将步骤一所得的羟基山椒素混合物用水稀释到低级醇溶液体积分数10%~20%，通过 非极性聚苯乙烯型大孔吸附树脂柱层析进行分离纯化，干燥花椒果实重量与大孔吸附树脂 体积比例为IKg: 0.5~IL，动态吸附上样，吸附速度控制在每小时2. OBV~3. OBV，吸附完毕 后，先分别用2. OBV~3. OBV的水和50 %~60 %的低级醇溶液洗脱除杂，再用2.5BV~4. OBV 的85 %~95 %的低级醇溶液洗脱，收集洗脱液，减压浓缩得羟基山椒素混合物浸膏； 步骤二、羟基_β_山椒素的转化 由于步骤二所得的羟基山椒素混合物浸膏中羟基-α-山椒素比羟基-β_山椒含量高，用 有机溶剂溶解羟基山椒素混合物浸膏，加入碘作为催化剂进行双键顺反异构化反应，反应 平衡后，部分羟基-α-山椒素转化成羟基-β_山椒素，反应式如下：该反应可以提高羟基-β_山椒素在羟基山椒素混合物浸膏溶液中的含量； 步骤四、羟基-β_山椒素的纯化 将步骤三所得羟基-β_山椒素混合物浸膏溶液放置于冰箱中低温冷冻析晶，过滤干燥 得到纯度达到70%以上的羟基-β-山椒素单体。2. 根据权利1要求所述的一种羟基-β_山椒素单体的制备方法，其特征在于，步骤一中 所述的低级醇溶液为甲醇、乙醇的一种或一种以上的混合物。3. 根据权利1要求所述的一种羟基-β_山椒素单体的制备方法，其特征在于，步骤二中 所述的非极性聚苯乙烯型大孔树脂型号是D101、AB-8、HP20。4. 根据权利1要求所述的一种羟基-β_山椒素单体的制备方法，其特征在于，步骤三中 所述有机溶剂为石油醚、丙酮、乙酸乙酯中的一种或一种以上的混合物。5. -种羟基-β-山椒素单体的制备方法，包括重复权利要求1的步骤一~步骤三： 步骤一、羟基山椒素混合物的提取 将干燥花椒果皮破碎，提取溶剂用体积分数为85%以上的低级醇的水溶液对花椒果皮 粉末进行冷浸提取，液料比为1: 5~1:15，提取时间为48h，提取2~3次，合并浸提液，弃药 渣，浸提液减压浓缩得浓缩液，浓缩液的体积为浸提液的1/5~1/4，得到羟基山椒素混合 物； 步骤二、羟基山椒素混合物的富集 将步骤一所得的羟基山椒素混合物用水稀释到低级醇体积分数为10%-20%，通过非 极性聚苯乙烯型大孔吸附树脂柱层析进行分离纯化，干燥花椒果实重量与大孔吸附树脂体 积比例为IKg: 0.5~1L，动态吸附上样，吸附速度控制在每小时2. OBV~3. OBV，吸附完毕后， 先分别用2. OBV~3 . OBV的水和50%~60 %的低级醇溶液洗脱除杂，再用2.5BV~4. OBV的 85 %~95 %的低级醇溶液洗脱，收集洗脱液，减压浓缩得羟基山椒素混合物浸膏； 步骤二、羟基_β_山椒素的转化 将步骤二所得的羟基山椒素混合物浸膏用有机溶剂溶解后加入碘作为催化剂进行双 键顺反异构化反应，反应平衡后，部分羟基-α_山椒素转化成羟基-β_山椒素，反应式如下：该反应可以提高羟基-β_山椒素在羟基山椒素混合物浸膏溶液中的含量； 步骤四、羟基-β_山椒素的纯化 将步骤三得到的羟基-β_山椒素混合物浸膏溶液放置于冰箱中低温冷冻析晶，过滤干 燥得到纯度达到70%以上的羟基-β-山椒素单体； 步骤五、重结晶 将步骤四中得到的70%以上的羟基-β-山椒素单体用有机溶剂溶解，冷冻放置，析晶， 过滤干燥，得到纯度达到98 %以上的羟基-β-山椒素单体。6. 根据权利要求5所述的一种羟基-β-山椒素单体的制备方法，其特征在于，步骤一中 所述的低级醇为甲醇、乙醇中的一种或一种以上的混合物。7. 根据权利要求5所述的一种羟基-β-山椒素单体的制备方法，其特征在于，步骤二中 所述的非极性聚苯乙烯型大孔树脂型号是D101、AB-8、HP20。8. 根据权利要求5所述的一种羟基-β-山椒素单体的制备方法，其特征在于：步骤三中 所述的有机溶剂为石油醚、丙酮、乙酸乙酯中的一种或一种以上的混合物。9. 根据权利要求5所述的一种羟基-β-山椒素单体的制备方法，其特征在于：步骤五中 所述的有机溶剂为石油醚、丙酮、乙酸乙酯的一种或一种以上的混合物。
【专利摘要】本发明提供了一种羟基-β-山椒素单体的制备方法，属于天然药物提取技术领域。它能有效地解决在花椒原料中提取高浓度羟基-β-山椒素单体的技术问题。主要有一下步骤：步骤一、羟基山椒素混合物的提取，得到羟基山椒素混合物；步骤二、羟基山椒素混合物的富集，减压浓缩得羟基山椒素混合物浸膏；步骤三、羟基-β-山椒素的转化，反应后提高了羟基-β-山椒素在羟基山椒素混合物浸膏溶液中的含量；步骤四、羟基-β-山椒素的纯化，得到纯度达到70％以上的羟基-β-山椒素单体。步骤五、重结晶，得到纯度达到98％以上的羟基-β-山椒素单体。主要用于制备羟基-β-山椒素单体。
【IPC分类】C07C231/12, C07C231/24, C07C233/20
【公开号】CN105481711
【申请号】CN201510844111
【发明人】周先礼, 黄帅, 张敬文, 单连海, 赵镭, 史波林
【申请人】西南交通大学
【公开日】2016年4月13日
【申请日】2015年11月26日