12h，得新橙皮苷粗品。将新橙皮苷粗品置于洁净干燥的烧杯中，以料液比1: 5g/mL的比例往烧杯中加入65%乙醇溶液，搅匀，放入电热套中加热至沸，关闭电热套，边搅拌边加2g活性炭，1min后取出烧杯，趁热抽滤，冷却;在15°C以下析晶的类白色针状晶体;抽滤，烘干，得新橙皮苷纯品;经HPLC测得纯度为95.67%，新橙皮苷得率5.36%ο
[0020]辛弗林提取
取前处理滤液，用HCl调至pH值为1.0，过DlOl大孔吸附树脂柱，用水洗涤，收集流出液和水洗液，浓缩;在硅藻土的辅助下进行抽滤，将滤液加入到经预处理后的001X7强酸性苯乙烯型阳离子柱，进柱量为2BV，以流速2BV/h放出流出液，再用2BV去离子水洗树脂柱，放出水洗液;往树脂中加入1.5BV 1.5mol/L氨水洗脱，流速为lBV/h，收集氨水洗脱液，于旋转蒸发仪中浓缩，用HCl调至pH值为2.0，再过DlOl大孔树脂柱，用1.5mol/L氨水洗脱，取洗脱液浓缩后，放置，在15°C以下结晶，得辛弗林粗品;将粗品用pH为2.0的HCl溶解，再用氨水调pH为10.0，然后浓缩，冷却，在15°C以下重结晶，所得晶体即为辛弗林，该产品中辛弗林含量达98.0%，收率达2.1%以上。
[0021 ] 实施例2
苦橙枳实小果前处理
收集柑橘皮、干燥、粉碎、过100目筛，备用;枳实小果干燥、粉碎，过100目筛，备用。按照质量比1: 2的比例，称取柑橘皮粉碎物33.3g和枳实小果粉碎物66.7g，共100.0g置于烧杯中，以料液比1:10g/mL加入100mL 20%的乙醇水溶液，搅拌均匀后，放入水浴锅中44°C下渗漉提取10h，过滤。加入0.4果胶酶处理，501下搅拌30!^11，然后将水浴锅调至701，处理30min。待其冷却后，先用纱布粗滤，再用双层滤纸抽滤，得滤液和滤渣，滤渣用于提取橙皮苷，滤液用于提取新橙皮苷及辛弗林。
[0022]橙皮苷提取
取上述滤渣10g，加水2000ml，30°C下边搅拌边加入NaOH溶液搅拌，调节pH为11.0，Ih后过滤;取滤液加适量稀盐酸调体系PH为3.0，静置12h;在15°C以下结晶，抽滤，烘干得橙皮苷粗品。以料液比1: 60g/mL加入65%的甲醇，用稀NaOH溶液调体系pH为10.0，30°C下反应30min，常压过滤，再用稀盐酸调滤液pH为3.0，在15°C以下静置12h重结晶；重结晶后，过滤、烘干，得到橙皮苷产品，橙皮苷含量为98.10%，收率为8.86%ο
[0023]新橙皮苷提取
取滤液过001X7强酸性苯乙烯型阳离子柱，收集离子柱流出液，然后用水洗。将离子柱流出液和水洗液混合，过DlOl大孔吸附树脂柱，水洗，依次用20%乙醇和65%乙醇梯度洗脱。收集65%醇洗脱液，浓缩成浸膏。往浸膏中加5%质量分数的硫酸铵/氯化钠固体，边加热边搅拌，沸腾后停止加热，冷却，在15°C以下析晶12h，得新橙皮苷粗品。将新橙皮苷粗品置于洁净干燥的烧杯中，以料液比1: 5g/mL的比例往烧杯中加入65%乙醇溶液，搅匀，放入电热套中加热至沸，关闭电热套，边搅拌边加6g活性炭，1min后取出烧杯，趁热抽滤，冷却，在15°C以下析晶的类白色针状晶体；抽滤，烘干，得新橙皮苷纯品；经HPLC检，新橙皮苷含量为98.05%，收率为 5.55%。
[0024]辛弗林提取
取前处理滤液，用HCl调至pH值为2.0，过DlOl大孔吸附树脂柱，水洗，收集流出液和水洗液，浓缩，在硅藻土的辅助下进行抽滤，滤液加入到经预处理后的001X7强酸性苯乙烯型阳离子柱，进柱量为2BV，以流速2BV/h放出流出液，再用2BV去离子水洗树脂柱，放出水洗液，往树脂中加入1.5BV 1.5mol/L氨水洗脱，流速为lBV/h，收集氨水洗脱液，浓缩，用HCl调至PH值为3.0，再过DlOl大孔树脂柱，用1.5mol/L氨水洗脱，取洗脱液浓缩后，在15°C以下放置，结晶；将粗品用pH为3.0的HCl溶解，再用氨水调pH值为10.5，然后浓缩，冷却，在15°C以下重结晶，所得晶体即为辛弗林产品，该产品中辛弗林含量位98.0%，辛弗林收率为2.16%。
【主权项】
1.一种提取橙皮苷、新橙皮苷和辛弗林的方法，其特征在于:采用如下工艺步骤: A前处理 以柑橘皮和苦橙第三次生理落果的枳实小果为原料，经干燥、粉碎，过筛备用； 柑橘皮和枳实小果按照质量比为1: 2的比例称取粉末，按照料液比为1:(10-30)的比例，用0-20%乙醇水溶液，在40-45°C进行渗漉提取10-12h;按0.01%_0.1%的比例添加入果胶酶，40-50°C下搅拌30min，然后调温度至70°C，处理15-30min;然后过滤，得到的药渣用于提取橙皮苷，滤液用于提取新橙皮苷和辛弗林； B橙皮苷提取、分离、纯化 用pH值为10.0-11.0的NaOH或者Ca(OH)2浸泡药渣，提取0.5_lh；过滤； 所得提取液浓缩，浓缩液用HCl调pH为2.0-3.0，在15°C以下放置，沉淀； 将沉淀物用水洗至中性，再用65%乙醇溶解，在15°C以下放置，结晶;得到橙皮苷粗品； 将橙皮苷粗品以料液比1:60g/mL的比例加入65%的低碳醇，用稀NaOH溶液调体系pH为10.0-11.0，30°C下反应30min，常压过滤，再用稀盐酸调滤液pH为3.0_4.0，在15°C以下静置10-12h，重结晶；重结晶后的晶体即为橙皮苷产品； C新橙皮苷提取、分离、纯化 取步骤A所述滤液过强酸性苯乙烯型阳离子柱，用水洗涤； 将阳离子柱流出液和水洗液混合，进DlOl大孔吸附树脂;经水洗后，先用20%低碳醇洗涤，再用65%低碳醇洗脱； 将65%低碳醇洗脱液浓缩，在15°C以下放置，用浓缩液5.0%的(NH4)2S04/NaCl助析，得新橙皮苷粗品； 将新橙皮苷粗品按料液比I: 5g/mL的比例往烧杯中加入65%低碳醇，加热、过滤，冷却，在15°C以下重结晶，得到新橙皮苷； D辛弗林的提取、分离、纯化 取步骤A所述的滤液，用HCl调至pH值为1.0-2.0，过DlOl大孔树脂柱，水洗，收集流出液和水洗液，进行浓缩；添加硅藻土过滤，将滤液过001 X 7阳离子柱，进柱量为2BV，以流速2BV/h放出流出液;再用2BV去离子水洗树脂柱，放出水洗液，往树脂中加入1.5BV 1.5mol/L氨水洗脱，流速为lBV/h，收集氨水洗脱液，浓缩，用HCl调至pH值为2.0-3.0，再过Dl OI大孔树脂柱，用1.5mol/L氨水洗脱，取洗脱液浓缩后，在15°C以下放置，结晶，得辛弗林粗品；将辛弗林粗品用PH为2.0-3.0的HCl溶解，再用I.5mol/L氨水调pH值为10.0-11.0，然后浓缩，冷却，在15°C以下重结晶，所得晶体即为辛弗林。2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于:步骤C所述强酸性苯乙烯型阳离子柱为001X 7阳尚子柱。3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于:所述大孔树脂为DlOI。4.根据权利要求1所述的方法，其特征在于:所述低碳醇为甲醇或者乙醇。5.根据权利要求1所述的方法，其特征在于:所述结晶、重结晶都是在在15°C以下进行。
【专利摘要】一种提取橙皮苷、新橙皮苷和辛弗林的方法，柑橘皮和枳实小果经干燥、粉碎、过筛以后，按照质量比为1:2的比例混合，进行渗漉提取。药渣用碱液提取，提取液沉淀、洗涤，用65%乙醇溶解，结晶、重结晶后得到橙皮苷产品。取渗漉提取液过强酸性苯乙烯型阳离子柱、水洗，进大孔吸附树脂柱、水洗、20%低碳醇洗涤、65%低碳醇洗脱，取洗脱液浓缩，助析、结晶、重结晶，得到新橙皮苷产品。取渗漉液过大孔吸附树脂柱，再过强酸性苯乙烯型阳离子柱，再过大孔树脂柱，用氨水洗脱，结晶、重结晶，即为辛弗林产品。所有结晶和重结晶步骤都在15℃以下进行。
【IPC分类】C07C213/10, C07H1/08, C07C215/60, C07H17/07
【公开号】CN105481920
【申请号】CN201510893062
【发明人】李桂银, 周治德, 谢冬养, 应启实, 卢照凯, 叶世伟, 赖廷晓, 杨涛, 黄荣爱
【申请人】桂林三宝生物科技有限公司, 李桂银
【公开日】2016年4月13日
【申请日】2015年12月8日