一种富铁虫草花的生产方法
【专利说明】
(一)
技术领域
[0001]本发明涉及富铁虫草花的生产方法，具体涉及一种利用农业废弃物啤酒糟清洁生产富铁虫草花的方法。
(二)
【背景技术】
[0002]虫草的药用价值很高，具有补肾益肺，止血化痰的作用，它可以治疗久咳虚喘、阳萎遗精、病后体虚、腰膝酸痛等疗效显著。由于虫草具有多种药用价值，导致国内和国际市场对虫草的需求很大，进而导致供不应求，开采过度。所以人们对于采用人工发酵培养虫草的技术非常重视。国内外研究人员采取液体深层发酵的方法来生产虫草菌丝体以及固态发酵生产虫草花，希望用人工培养菌丝体和虫草花来代替天然虫草。这种方法成本低廉、反应条件温和，因此该法被广泛应用，该法可以在一定程度上保护虫草这一珍稀物种。
[0003]铁是人体重要的必需微量元素之一，也是比较容易缺乏的元素。铁缺乏是我国主要的营养缺乏病之一。现多采用无机铁进行铁强化，但存在铁离子对粘膜的刺激，胃肠道副作用较大，吸收率低等而限制了其使用。因此研究低毒高效补铁剂一直是开发的方向。利用虫草菌经发酵生产虫草花，可使铁由无机态转变为有机态，提高生物利用率，毒副作用大大降低，且虫草花本身就含有极丰富的蛋白质，具有人体所必需的8种氨基酸及B族维生素、丰富的酶系统。因此，富铁虫草花作为强化食品的铁源是预防铁缺乏和缺铁性贫血的一项行之有效的措施。
[0004]本发明拟以啤酒糟为原料，采用蛹虫草菌发酵生产富铁虫草花，实现虫草花低成本的关键技术突破，增加农民收入。
(三)
【发明内容】
[0005]为了得到质量高、成本低廉的富铁虫草花，本发明提供一种原材料新颖、成本低、绿色生产、环境友好，易于实现工业化的富铁虫草花的生产方法。
[0006]本发明采用如下技术方案:
[0007]—种富铁虫草花的生产方法，所述方法按如下步骤进行:
[0008](I)斜面培养:将出发菌株蛹虫草(常规菌株，市购可得)接种于斜面培养基，20?30°C恒温培养7?1d，获得斜面菌体；
[0009]所述斜面培养基的配方为:蛋白胨8?12g/L、葡萄糖30?50g/L、琼脂13?20g/L、氯霉素0.08?0.12g/L，溶剂为水，pH为5.5?6.5 ；
[0010](2)种子液培养:将步骤(I)获得的斜面菌体接种至种子培养基中，在20?30°C，150?200r/min的摇床条件下振荡培养7?10d，获得种子液；
[0011]所述种子培养基的配方为:葡萄糖10?15g/L、K2HP04.3H20 0.4?0.6g/L、KH2P〇4
0.4?0.68/1、1^-甘氨酸0.8?1.28/1、]\%304.7H20 0.4?0.6g/L、氯霉素0.08?0.12g/L，溶剂为水，pH为5.5?6.5;
[0012](3)固体发酵:将烘干至恒重的啤酒糟粉末与硫酸亚铁、水混合均匀，118?130°C灭菌20?30min，得到固体发酵培养基，冷却待用;将步骤(2)培养好的种子液接种至所得固体发酵培养基中，在20?30°C进行恒温发酵培养30?40d，得到成品富铁虫草花；
[0013]所述种子液的接种体积量为5?15mL/100g固体发酵培养基;所述硫酸亚铁的添加量以烘干至恒重的啤酒糟粉末的质量计为800?1000yg/g;所述烘干至恒重的啤酒糟粉末与水的料液质量比为1:2?3。
[0014]本发明中，所述的出发菌株蛹虫草为尖头虫草I号，购自山东梁山县正大菌业科技开发中心。所述的啤酒糟为可商购获得的普通啤酒糟，任何啤酒生产企业所产生的副产物啤酒糟都可以适用。
[0015]本发明所述的生产方法，步骤(I)中，优选所述斜面培养基的配方为:蛋白胨1.0g/L、葡萄糖40g/L、琼脂15g/L、氯霉素0.1 g/L，溶剂为水，pH为6。
[0016]步骤(2)中，优选所述种子培养基的配方为:葡萄糖10g/L、K2HP04.3H20 0.5g/L、KH2PO4 0.58/1丄-甘氨酸1.(^/1、1%304.7H20 0.5g/L、氯霉素0.lg/L，溶剂为水，pH为6。
[0017]步骤(3)中，优选所述硫酸亚铁的添加量以烘干至恒重的啤酒糟粉末的质量计为900yg/g;优选所述烘干至恒重的啤酒糟粉末与水的料液质量比为1:2.3;优选所述种子液的接种体积量为I OmL/1 OOg固体发酵培养基。
[0018]与现有技术相比，本发明的优点在于:
[0019](I)使用啤酒糟为富铁虫草花发酵培养的原材料，在国内外未见相关的报道和应用；
[0020](2)本发明使用农业废弃物啤酒糟为基质，生产成本低。
(四)
【具体实施方式】
[0021]下面通过具体实施例对本发明进行进一步描述，但本发明的保护范围并不仅限于此。
[0022]以下实施例中，出发菌株:菌株蛹虫草为尖头虫草I号，购自山东梁山县正大菌业科技开发中心;啤酒糟粉末:购自英博双鹿啤酒有限公司。
[0023]实施例1
[0024](I)斜面培养:将出发菌株蛹虫草接种于斜面培养基，20°C恒温培养7d，至菌丝体布满斜面，获得斜面菌体。所述斜面培养基的配方为:蛋白胨8g/L、葡萄糖30g/L、琼脂13g/L、氯霉素0.08g/L，溶剂为水，pH为5.5。
[0025](2)种子液培养:将活化后的斜面菌体接种于种子培养基中，在22°C，150r/min的摇床条件下振荡培养7d，至培养基中有均匀分布的松散菌丝体，获得种子液。所述种子培养基的配方为:葡萄糖 10g/L、K2HP04.3H20 0.4g/L,KH2PO4 0.4g/L、L_甘氨酸0.8g/L、MgS〇4.7H20 0.4g/L、氯霉素0.08g/L，溶剂为水，pH为5.5。
[0026](3)固体发酵:将烘干至恒重的啤酒糟粉末15g与硫酸亚铁12mg、水30mL混合均匀，作为初始固体培养基，118°C灭菌30min，冷却待用。将培养好的种子液以5 % (v/w)接种量接入固体培养基中，在22°C进行恒温发酵培养30天，得到成品富铁虫草花。
[0027]上述发酵结束，对所得的虫草花进行铁含量分析，测得有机铁量21.2mg/g虫草花。
[0028]实施例2
[0029](I)斜面培养:将出发菌株蛹虫草接种于斜面培养基，20°C恒温培养Sd，至菌丝体布满斜面，获得斜面菌体。所述斜面培养基的配方为:蛋白胨10g/L、葡萄糖40g/L、琼脂15g/L、氯霉素0.1g/L，溶剂为水，pH为6。
[0030](2)种子液培养:将活化后的斜面菌体接种于种子培养基中，在22°C，180r/min的摇床条件下振荡培养Sd，至培养基中有均匀分布的松散菌丝体，获得种子液。所述种子培养基的配方为:葡萄糖 12g/L、K2HP04.3H20 0.5g/L,KH2PO4 0.5g/L、L_甘氨酸I.0g/L、MgS〇4.7H20 0.5g/L、氯霉素0.lOg/L，溶剂为水，pH为6。
[0031](3)固体发酵:将烘干至恒重的啤酒糟粉末15g与硫酸亚铁13.5mg、3水5mL混合均匀，作为初始固体培养基，121°C灭菌30min，冷却待用。将培养好的种子液以1 % (v/w)接种量接入固体培养基中，在22°C进行恒温发酵培养35天，得到成品富铁虫草花。
[0032]上述发酵结束，对所得的虫草花进行铁含量分析，测得有机铁量23.6mg/g虫草花。
[0033]实施例3
[0034](I)斜面培养:将出发菌株蛹虫草接种于斜面培养基，30°C恒温培养1d，至菌丝体布满斜面，获得斜面菌体。所述斜面培养基的配方为:蛋白胨12g/L、葡萄糖50g/L、琼脂20g/L、氯霉素0.12g/L，溶剂为水，pH为6.5。
[0035](2)种子液培养:将活化后的斜面菌体接种于种子培养基中，在30°C，200r/min的摇床条件下振荡培养10d，至培养基中有均匀分布的松散菌丝体，获得种子液。所述种子培养基的配方为:葡萄糖 15g/L、K2HP04.3H20 0.6g/L,KH2PO4 0.6g/L、L_甘氨酸I.2g/L、MgSO4.7H20 0.68/1、氯霉素0.128/1，溶剂为水，？!1为6.5。
[0036](3)固体发酵:将烘干至恒重的啤酒糟粉末15g与硫酸亚铁15mg、水40mL混合均匀，作为初始固体培养基，130°C灭菌30min，冷却待用。将培养好的种子液以15%(v/w)接种量接入固体培养基中，在30°C进行恒温发酵培养40天，得到成品富铁虫草花。
[0037]上述发酵结束，对所得的虫草花进行铁含量分析，测得有机铁量22.4mg/g虫草花。
【主权项】
1.一种富铁虫草花的生产方法，其特征在于，所述方法按如下步骤进行: (1)斜面培养:将出发菌株蛹虫草接种于斜面培养基，20?30°C恒温培养7?1d，获得斜面菌体； 所述斜面培养基的配方为:蛋白胨8?12g/L、葡萄糖30?50g/L、琼脂13?20g/L、氯霉素0.08?0.12g/L，溶剂为水，pH为5.5?6.5 ； (2)种子液培养:将步骤(I)获得的斜面菌体接种至种子培养基中，在20?30°C，150?200r/min的摇床条件下振荡培养7?10d，获得种子液； 所述种子培养基的配方为:葡萄糖10?15g/L、K2HP04.3H20 0.4?0.6g/L、KH2P040.4?0.6g/L、L-甘氨酸0.8?I.2g/L,MgSO4.7H20 0.4?0.6g/L、氯霉素0.08?0.12g/L，溶剂为水，pH为5.5 ?6.5; (3)固体发酵:将烘干至恒重的啤酒糟粉末与硫酸亚铁、水混合均匀，118?130°C灭菌20?30min，得到固体发酵培养基，冷却待用;将步骤(2)培养好的种子液接种至所得固体发酵培养基中，在20?30°C进行恒温发酵培养30?40d，得到成品富铁虫草花； 所述种子液的接种体积量为5?15mL/1 OOg固体发酵培养基;所述硫酸亚铁的添加量以烘干至恒重的啤酒糟粉末的质量计为800?1000yg/g;所述烘干至恒重的啤酒糟粉末与水的料液质量比为1:2?3。2.如权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤(I)中，所述斜面培养基的配方为:蛋白胨1.0g/L、葡萄糖40g/L、琼脂15g/L、氯霉素0.1 g/L，溶剂为水，pH为6。3.如权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤(2)中，所述种子培养基的配方为:葡萄H10g/L,K2HPO4.3H20 0.5g/L,KH2PO4 0.5g/L、L_甘氨酸I.0g/L、MgS〇4.7H20 0.5g/L、氯霉素0.1g/L，溶剂为水，pH为6。4.如权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤(3)中，所述硫酸亚铁的添加量以烘干至恒重的啤酒糟粉末的质量计为900yg/g。5.如权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤(3)中，所述烘干至恒重的啤酒糟粉末与水的料液质量比为1:2.3。6.如权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤(3)中，所述种子液的接种体积量为1OmL/1 OOg固体发酵培养基。
【专利摘要】本发明提供了一种富铁虫草花的生产方法，所述的生产方法为：将出发菌株蛹虫草接种于斜面培养基，20～30℃恒温培养7～10d，获得斜面菌体；将斜面菌体接种至种子培养基中，在20～30℃，150～200r/min的摇床条件下振荡培养7～10d，获得种子液；将烘干至恒重的啤酒糟粉末与硫酸亚铁、水混合均匀，118～130℃灭菌20～30min，得到固体发酵培养基，冷却待用；将培养好的种子液接种至所得固体发酵培养基中，在20～30℃进行恒温发酵培养30～40d，得到成品富铁虫草花；本发明使用农业废弃物啤酒糟为富铁虫草花发酵培养的原材料，在国内外未见相关的报道和应用，生产成本低。
【IPC分类】C12R1/645, C12N1/14
【公开号】CN105505795
【申请号】CN201511029655
【发明人】杨胜利, 张慧, 王贝, 陈宏
【申请人】浙江工业大学
【公开日】2016年4月20日
【申请日】2015年12月31日