一种贝诺酯的药物组合物及其对深度烫伤的保护作用

一种贝诺酯的药物组合物及其对深度烫伤的保护作用
【专利摘要】本发明公开了一种贝诺酯的药物组合物及其对深度烫伤的保护作用，本发明提供的贝诺酯的药物组合物中含有贝诺酯和一种从干燥的紫苏叶中分离得到的结构新颖的天然产物化合物(Ⅰ)，贝诺酯和该天然产物化合物(Ⅰ)单独作用时，深度烫伤保护作用一般；二者联合作用时，深度烫伤保护作用显著提高，可以开发成深度烫伤保护的药物，与现有技术相比具有突出的实质性特点和显著的进步。
【专利说明】
一种贝诺酯的药物组合物及其对深度烫伤的保护作用
技术领域
[0001] 本发明属于生物医药领域，涉及贝诺酯的新用途，具体涉及一种贝诺酯的药物组 合物及其对深度烫伤的保护作用。
【背景技术】
[0002] 贝诺酯主要用于类风湿性关节炎、急慢性风湿性关节炎、风湿痛、感冒发烧、头痛、 神经痛及术后疼痛等。
[0003] 贝诺酯为对乙酰氨基酚与阿司匹林的酯化物，具有解热，镇痛及抗炎作用，其作用 机制基本与阿司匹林及对乙酰氨基酚相同。疗效与阿司匹林相似，不良反应比阿司匹林少。 特点是较少引起胃肠道出血，患者易于耐受，作用时间比阿司匹林或对乙酰氨基酚长。
[0004] 烧烫伤是指因沸水（油）、光、烈火、电、放射线或化学物质作用于人体而引起的损 伤，是日常工作和生活中最常见的意外伤害之一。随着社会生活外延的不断扩展，受伤人群 逐年上升。急诊室医生常常发现，人们会错误地在烫烧伤的伤口涂牙膏、鸡蛋清乃至食盐、 酱油、红药水等，不仅没有治疗烧烫伤的作用，有时还会掩盖创面，使医生无法立即确定创 面的大小和深度，必须要先清洗再施救，这一过程费时费力，反而会增加患者的痛苦。
[0005] 迄今为止，尚未见贝诺酯及其药物组合物与深度烫伤保护的相关性报道。

【发明内容】

[0006] 本发明的目的在于提供一种贝诺酯的药物组合物，该药物组合物中含有贝诺酯和 一种从紫苏叶中分离得到的结构新颖的天然产物，贝诺酯和该天然产物可以协同发挥深度 烫伤保护的作用，开发成深度烫伤保护的药物。
[0007] 本发明的上述目的是通过下面的技术方案得以实现的：
[0008] 一种具有下述结构式的化合物（I)，
[0009]
[0010] -种贝诺酯的药物组合物，包括贝诺酯、如上所述的化合物（I)和药学上可以接受 的载体。
[0011] 如上所述的化合物（I)的制备方法，包含以下操作步骤：（a)将干燥的紫苏叶粉碎， 用70~80 %乙醇热回流提取，合并提取液，浓缩至无醇味，依次用石油醚、乙酸乙酯和水饱 和的正丁醇萃取，分别得到石油醚萃取物、乙酸乙酯萃取物和正丁醇萃取物；（b)步骤(a)中 正丁醇萃取物用大孔树脂除杂，先用8%乙醇洗脱6个柱体积，再用70%乙醇洗脱8个柱体 积，收集70%洗脱液，减压浓缩得70%乙醇洗脱浓缩物；（c)步骤(b)中70%乙醇洗脱浓缩物 用正相硅胶分离，依次用体积比为50:1、25:1、15:1和5:1的二氯甲烷-甲醇梯度洗脱得到4 个组分；（d)步骤(c)中组分4用正相硅胶进一步分离，依次用体积比为10:1、5:1和2:1的二 氯甲烷-甲醇梯度洗脱得到3个组分；（e)步骤(d)中组分2用十八烷基硅烷键合的反相硅胶 分离，用体积百分浓度为70 %的甲醇水溶液等度洗脱，收集8~12个柱体积洗脱液，洗脱液 减压浓缩得到纯的化合物(I)。
[0012] 进一步地，步骤(a)用75%乙醇热回流提取，合并提取液。
[0013] 进一步地，所述大孔树脂为D101型大孔吸附树脂。
[0014] 如上所述的化合物(I)在制备深度烫伤保护的药物中的应用。
[0015] 如上所述的贝诺酯的药物组合物在制备深度烫伤保护的药物中的应用。
[0016] 本发明的优点：
[0017] 本发明提供的贝诺酯的药物组合物中含有贝诺酯和一种从紫苏叶中分离得到的 结构新颖的天然产物，贝诺酯和该天然产物单独作用时，深度烫伤保护作用一般;二者联合 作用时，深度烫伤保护作用显著提高，可以开发成深度烫伤保护的药物。本发明与现有技术 相比具有突出的实质性特点和显著的进步。
【具体实施方式】
[0018] 下面结合实施例进一步说明本发明的实质性内容，但并不以此限定本发明保护范 围。尽管参照较佳实施例对本发明作了详细说明，本领域的普通技术人员应当理解，可以对 本发明的技术方案进行修改或者等同替换，而不脱离本发明技术方案的实质和范围。
[0019] 实施例1:化合物(I)分离制备及结构确证
[0020] 试剂来源：乙醇、石油醚、乙酸乙酯、正丁醇、二氯甲烷为分析纯，购自上海凌峰化 学试剂有限公司，甲醇，分析纯，购自江苏汉邦化学试剂有限公司。
[0021]分离方法：（a)将干燥的紫苏叶（5kg)粉碎，用75 %乙醇热回流提取(20L X 3次），合 并提取液，浓缩至无醇味(4L)，依次用石油醚(4L X 3次）、乙酸乙酯(4L X 3次)和水饱和的正 丁醇（4LX 3次）萃取，分别得到石油醚萃取物、乙酸乙酯萃取物和正丁醇萃取物；（b)步骤 (a)中正丁醇萃取物用D101型大孔树脂除杂，先用8%乙醇洗脱6个柱体积，再用70%乙醇洗 脱8个柱体积，收集70%洗脱液，减压浓缩得70%乙醇洗脱浓缩物；（c)步骤(b)中70 %乙醇 洗脱浓缩物用正相硅胶分离，依次用体积比为50:1 (8个柱体积）、25:1 (8个柱体积）、15:1 (8 个柱体积)和5:1(10个柱体积)的二氯甲烷-甲醇梯度洗脱得至1」4个组分；（d)步骤(c)中组分 4用正相硅胶进一步分离，依次用体积比为10:1 (8个柱体积）、5:1 (10个柱体积)和2:1 (5个 柱体积)的二氯甲烷-甲醇梯度洗脱得到3个组分；（e)步骤(d)中组分2用十八烷基硅烷键合 的反相硅胶分离，用体积百分浓度为70 %的甲醇水溶液等度洗脱，收集8~12个柱体积洗脱 液，洗脱液减压浓缩得到化合物（I) (345mg，HPLC归一化纯度大于98% )。
[0022] 结构确证：白色粉末状物，册43頂3显示[1+!1]+为111/2 273.2531，结合核磁特征可 得分子式为C2QH32,不饱和度为5。核磁共振氢谱数据SH( ppm，CDCl3,500MHZ):H-2(1.56，m)， H-3(1.24，m)，H-3(1.89，m)，H-4(1.15，dd，J=7.1，14.5Hz)，H-4(2.04，m)，H-5(1.91，m)，H- 7(1.33，dt，J = 2.2，13.0Hz)，H-7(1.72，m)，H-8(1.67，ddd，J = 2.0,6.6，15.8Hz)，H-8 (2.36，m)，H-10(2.52，t，J=8.6Hz)，H-ll(1.94，m)，H-ll(2.16，m)，H-12(1.19，m)，H-12 (1.21，m)，H-14(2.22，dd，J = 8.9，ll.lHz)，H-15(1.25，dd，J = 8.9，13.6Hz)，H-15(1.74， m)，H-16(0.85，s)，H-17(0.99，s)，H-18(1.00，d，J=7.7Hz)，H-19(1.41，s)，H-20(5.03，d，J =4.2Hz)，H-20(5.15，d，J = 4.2Hz);核磁共振碳谱数据Sc(ppm，CDCl3,125MHz) :44.8(C，Ι? Ο ，42.6(CH，2-C)，25.2(CH2,3-C)，24.9(CH2,4-C)，29.2(CH，5-C)，49.7(C，6-C)，31.6(CH2， 7-C)，31.2(CH2,8-C)，148.8(C，9-C)，54.5(CH，10-C)，20.6(CH 2，11-C)，38.2(CH2，12-C)， 43.6(C，13-C)，52.6(CH，14-C)，26.7(CH2，15-C)，25.6(CH3，16-C)，22.1(CH 3，17-C)，20.2 (CH3，18-C)，23 · 1 (CH3，19-C)，110 · 3(CH2，20-C) </3C-NMR、DEPT和HSQC谱中显示有20个碳信 号，包括四个甲基知25.6,22.1，20.2,23.1;八个亚甲基（一个烯烃碳％。25.2,24.9,31.6， 31.2,20.6,38.2,26.7，110.3;四个次甲基5。42.6,29.2,54.5,52.6;以及四个季碳(一个烯 烃碳)知44.8,49.7，148.8,43.6;以上功能结构再结合不饱和数表明该化合物为四环结构。 核磁数据表明该化合物含有一个环外亚甲基信号WH5.03(lH，d，J = 4.2Hz，H-20WP5.15 (1!1，(1，了 = 4.2抱，!1-20);3。148.8((：-9)和110.3((：-20)]。腿8(：谱中!12-7/(：-6/(：-14，!1-10与(：- 9，出-16与01、02、(：-6和(：-17，!13-17与(：-1、(：-2、(：-6和(：-16，!13-18与(：-4、(：-5和(：-6，!13-19 与C-10、C-12、C-13和C-14，H2-20与C-8、C-9和C-10的相关信号以及1Η」Η COSY谱中Η-14/ 出-15/!1-2/!12-3/!12-4/!1-5、!12-7/!1 2-8、!1-10/!12-11/!12-12的相关信号可以构建连接方式，结 果表明该化合物是Harziane型二砲，其结构中包含四环结构。综合氢谱、碳谱、HMBC谱和 N0ESY谱，以及文献关于相关类型核磁数据，可基本确定该化合物如下所示，立体构型进一 步通过ECD试验确定，理论值与实验值基本一致。该化合物化学式及碳原子编号如下：
[0023]
〇
[0024] 实施例2:对大鼠深Π 度烫伤模型的保护作用
[0025] 1、材料与方法
[0026] 1.1动物
[0027] SD大鼠，100只，体重180~230g，普通级，购自安徽长临河医药科技有限公司。动物 饲养在温度(22± 1) °C、相对湿度55%~65%、12h光照周期的通风干燥环境中，采用大小鼠 维持料1022饲养，自由饮水摄食。
[0028] 1.2试剂与样品
[0029]贝诺酯购自中国药品生物制品检定所。化合物（I)自制，制备方法见实施例1。湿润 烧伤膏（Shirun Shaoshang Gao，SRSSG)，汕头市美宝制药有限公司，批号131201;血管内皮 生长因子（vascular endothelial growth factor，VEGF)、肿瘤坏死因子-a(tumor necrosis factor-a，TNF-a)和白细胞介素-1 (interleukin-1，IL-1)酶联免疫检测试剂盒， 上海源叶生物科技有限公司。
[0030] 1.3仪器
[0031] TDZ4-WS低速自动平衡离心机，长沙湘仪离心机有限公司；HH-4数显恒温水浴锅， 国华电器有限公司；EL-104精密电子天平，梅特勒-托利多仪器(上海)有限公司；HE ID0LPH DIAX900型匀浆机，德国；Sigma3-18型台式高速冷冻离心机。
[0032] 1.4大鼠分组及模型制备
[0033]大鼠背部实验前Id用10%硫化钡脱毛，烫伤前腹腔注射10%水合氯醛（350mg · kg"1)麻醉，将直径3cm铁棒置入沸水中15min，取出后迅速用纱布擦干，一端紧贴大鼠背部皮 肤，持续7s，每只大鼠背部造成2~4个烫伤创面后立即腹腔注射乳酸林格氏液5mL抗休克。 并随机抽选1只大鼠取其创面组织做病理组织学检查，烫伤局部表皮消失，表皮、真皮及皮 下组织血管扩张，皮下组织水肿，真皮、皮下组织中可见急慢性炎细胞浸润，为深Π 度烫伤。 [0034]将贝诺酯、化合物（I)、贝诺酯和化合物⑴组合物制成贝诺酯膏状制剂(每克浸膏 含贝诺酯〇.4g)、化合物（I)膏状制剂(每克浸膏含化合物（1)0.4g)、贝诺酯和化合物⑴组 合物膏状制剂(每克浸膏含〇.2g贝诺酯+0.2化合物（I))。烫伤30min后，烫伤大鼠单笼饲养， 分为5组:模型对照组，阳性对照组(湿润烧伤膏），贝诺酯组、化合物（I)组、贝诺酯与化合物 (I)组合物组，每组20只，置室温25°C、湿度50%环境，自由摄食、饮水。给药组分别在烫伤部 位涂相应的药物0.5g/只，每天1次，给药部位用无菌纱布包扎，连续给药2d。
[0035] 1.5大鼠烫伤组织创面愈合率测定
[0036]在烫伤后2d，每组各取3只大鼠，采用描记称重法测定，即以伤后48h创面面积作为 烧伤面积，用透明方格纸描绘出创面，剪下后称重，以质量代替面积，创面愈合率=(烧伤面 积-时相点面积)/烧伤面积X100%。
[0037] 1.6大鼠烫伤组织组织含水量测定
[0038] 分别在烫伤后2d每组各取3只大鼠，取创面全层皮肤约200mg，滤纸吸干血液，电子 天平称湿重放于80°C烤箱烘烤24h，取出称干重，干湿法计算组织含水量。组织含水量=(组 织湿重-组织干重)/组织湿重X100%。
[0039] 1.7大鼠烫伤创面组织匀浆制备及组织VEGF含量测定
[0040] 10%水合氯醛(350mg · kg<)腹腔注射麻醉，取创面全层皮肤组织100mg左右，有痂 皮者先去除痂皮，滤纸吸去血迹，称重，放入生理盐水中，按lmL生理盐水/100mg组织碾磨制 成匀浆。标本4°C以下1万r · mirT1离心15min，取上清液-20°C以下保存。在烫伤后2d，每组各 取3只大鼠，采用ELISA法测VEGF含量，具体步骤按试剂盒说明书进行。
[0041 ] 1.8烫伤大鼠血清制备及血清TNF-α，IL-1水平测定
[0042] 10%水合氯醛（4mL · kg-3腹腔注射麻醉大鼠，股动脉取血，3500r · min-1离心 15min，取上清液-20 °C以下保存。分别在烫伤后24，48h，每组各取6只大鼠，采用ELISA法测 定血清TNF-a，IL-1水平，具体步骤按试剂盒说明书进行。
[0043] 1.9统计学方法
[0044]所有数据以x±s表示，运用SPSS13.0软件进行统计分析，采用t检验，P<0.05为差 异有统计学意义。
[0045] 2、实验结果
[0046] 2.1对大鼠烫伤组织创面愈合率的影响
[0047] 与模型对照组相比，各用药组大鼠创面愈合率在烫伤后均增加。与模型对照组比 较，贝诺酯与化合物（I)组合物组和阳性对照组组织创面愈合率明显增加(P<〇.01);与模 型对照组比较，贝诺酯组、化合物（I)组组织创面愈合率增加(P<〇.05)，表明药物能促进创 面愈合。
[0048] 结果见表1。
[0049] 2.2对大鼠烫伤创面组织含水量的影响
[0050] 与模型对照组相比各组大鼠创面组织含水量在烫伤后均下降。与模型对照组比 较，贝诺酯与化合物（I)组合物组和阳性对照组创面组织含水量明显下降（P<〇.01);与模 型对照组比较，贝诺酯组、化合物（I)组创面组织含水量下降(P<〇.05)。
[0051 ] 结果见表1。
[0052] 2.3对大鼠烫伤创面组织VEGF的影响
[0053]与模型对照组相比，各用药组创面VEGF含量增加。与模型对照组比较，贝诺酯与化 合物（I)组合物组和阳性对照组创面组织VEGF含量明显增加(P<0.01);与模型对照组比 较，贝诺酯组、化合物⑴组创面组织VEGF含量增加(P<0.05)。
[0054] 结果见表1。
[0055] 2.4对烫伤大鼠血清中TNF-α和IL-1水平的影响
[0056]与模型组比，各用药组血清中TNF-a和IL-1水平下降。与模型对照组比较，贝诺酯 与化合物（I)组合物组和阳性对照组血清中TNF-a和IL-1水平明显下降(P<0.01);与模型 对照组比较，贝诺酯组、化合物（I)组TNF-a和IL-1水平下降(P<0.05)。
[0057] 结果见表2。
[0058]表1对大鼠烫伤组织创面愈合率、含水量及VEGF的影响 [0059]
[0060] 表2对烫伤大鼠血清中TNF-a和E-1水平的影响
[0061]
[0062] 上述结果表明，本发明提供的贝诺酯与化合物（I)组合物，对深Π 度烫伤的保护效 果显著提高；贝诺酯与化合物（I)组合物的保护效果优于贝诺酯或化合物（I)单独作用的保 护效果，说明贝诺酯与化合物(I)存在协同作用，可以开发成防治深Π 度烫伤的药物。
[0063] 上述实施例的作用在于说明本发明的实质性内容，但并不以此限定本发明的保护 范围。本领域的普通技术人员应当理解，可以对本发明的技术方案进行修改或者等同替换， 而不脱离本发明技术方案的实质和保护范围。
【主权项】
1. 一种具有下述结构式的化合物（I)，2. -种贝诺醋的药物组合物，其特征在于:包括贝诺醋、如权利要求1所述的化合物（I) 和药学上可W接受的载体。3. 权利要求1所述的化合物（I)的制备方法，其特征在于，包含W下操作步骤：（a)将干 燥的紫苏叶粉碎，用70~80%乙醇热回流提取，合并提取液，浓缩至无醇味，依次用石油酸、 乙酸乙醋和水饱和的正下醇萃取，分别得到石油酸萃取物、乙酸乙醋萃取物和正下醇萃取 物；（b)步骤(a)中正下醇萃取物用大孔树脂除杂，先用8%乙醇洗脱6个柱体积，再用70%乙 醇洗脱8个柱体积，收集70%洗脱液，减压浓缩得70%乙醇洗脱浓缩物；（C)步骤(b)中70% 乙醇洗脱浓缩物用正相硅胶分离，依次用体积比为50:1、25:1、15:1和5:1的二氯甲烧-甲醇 梯度洗脱得到4个组分；（d)步骤k)中组分4用正相硅胶进一步分离，依次用体积比为10:1、 5:1和2:1的二氯甲烧-甲醇梯度洗脱得到3个组分；（e)步骤(d)中组分2用十八烷基硅烷键 合的反相硅胶分离，用体积百分浓度为70 %的甲醇水溶液等度洗脱，收集8~12个柱体积洗 脱液，洗脱液减压浓缩得到纯的化合物(I)。4. 根据权利要求3所述的化合物（I)的制备方法，其特征在于:步骤(a)用75%乙醇热回 流提取，合并提取液。5. 根据权利要求3所述的化合物（I)的制备方法，其特征在于:所述大孔树脂为D101型 大孔吸附树脂。6. 权利要求1所述的化合物（I)在制备深度烫伤保护的药物中的应用。7. 权利要求2所述的贝诺醋的药物组合物在制备深度烫伤保护的药物中的应用。
【文档编号】A61K31/015GK105837393SQ201610167879
【公开日】2016年8月10日
【申请日】2016年3月23日
【发明人】不公告发明人
【申请人】钱浩