一种盐酸强力霉素的药物组合物及其生物医药用图
【专利摘要】本发明公开了一种盐酸强力霉素的药物组合物及其生物医药用途，本发明提供的盐酸强力霉素的药物组合物中含有盐酸强力霉素和一种从泽泻的干燥块茎中分离得到的结构新颖的天然产物化合物(Ⅰ)，盐酸强力霉素、化合物(Ⅰ)单独作用时，可以提高小鼠肝组织中GSH含量，降低MDA含量，抑制TG的积累，具有一定的保肝作用；盐酸强力霉素和化合物(Ⅰ)联合作用时，保肝效果更好，可以开发成保护肝脏的药物，与现有技术相比具有突出的实质性特点和显著的进步。
【专利说明】
一种盐酸强力霉素的药物组合物及其生物医药用途
技术领域
[0001] 本发明属于生物医药领域，涉及盐酸强力霉素的新用途，具体涉及盐酸强力霉素 的药物组合物及其在保护肝脏中的应用。
【背景技术】
[0002] 盐酸强力霉素是七十年代开始用于国内临床的一种广谱半合成四环族抗生素，其 抗菌谱和四环素、土霉素基本相同，但抗菌作用比四环素、土霉素强5~10倍，特别对四环素 耐药的金黄色葡萄球菌有效。盐酸强力霉素口服吸收良好，排泄缓慢，血药浓度维持有效水 平较四环素、土霉素久(半衰期15_20h)，每日口服一次即可，用于上呼吸道感染、渗出性及 急性扁桃体炎、老年慢性支气管炎、肺部感染及尿路感染、菌痢、急性淋巴结炎等，有效率为 80% 〇
[0003] 迄今为止，尚未见盐酸强力霉素及其药物组合物与保护肝脏的相关性报道。
【发明内容】
[0004] 本发明的目的在于提供一种盐酸强力霉素的药物组合物，该药物组合物中含有盐 酸强力霉素和一种天然产物，盐酸强力霉素和该天然产物可以协同保护肝脏。
[0005] 本发明的上述目的是通过下面的技术方案得以实现的：
[0006] 一种具有下述结构式的化合物（I)，
[0007]
[0008] 一种盐酸强力霉素的药物组合物，包括盐酸强力霉素、如权利要求1所述的化合物 (I)和药学上可以接受的载体，制备成需要的剂型。
[0009] 进一步地，药学上可以接受的载体包括稀释剂、赋形剂、填充剂、粘合剂、湿润剂、 崩解剂、吸收促进剂、表面活性剂、吸附载体或润滑剂。
[0010] 进一步地，所述剂型包括片剂、胶囊剂、口服液、口含剂、颗粒剂、冲剂、丸剂、散剂、 膏剂、丹剂、混悬剂、粉剂、溶液剂、注射剂、栓剂、喷雾剂、滴剂或贴剂。
[0011] 上述化合物（I)的制备方法，包含以下操作步骤：（a)将泽泻的干燥块茎粉碎，用80 ~90%乙醇热回流提取，合并提取液，浓缩至无醇味，依次用石油醚、乙酸乙酯和水饱和的 正丁醇萃取，分别得到石油醚萃取物、乙酸乙酯萃取物和正丁醇萃取物；（b)步骤(a)中正丁 醇取物用大孔树脂除杂，先用30%乙醇洗脱6个柱体积，再用85%乙醇洗脱12个柱体积，收 集85%洗脱液，减压浓缩得85%乙醇洗脱浓缩物；（c)步骤(b)中85%乙醇洗脱浓缩物用正 相硅胶分离，依次用体积比为100:1、50:1、25:1和12:1的二氯甲烷-甲醇梯度洗脱得到4个 组分；（d)步骤(c)中组分4用正相硅胶进一步分离，依次用体积比为20:1、12:1和2:1的二氯 甲烷-甲醇梯度洗脱得到3个组分；（e)步骤(d)中组分2用十八烷基硅烷键合的反相硅胶分 离，用体积百分浓度为88 %的甲醇水溶液等度洗脱，收集13~16个柱体积洗脱液，洗脱液减 压浓缩得到化合物(I)。
[0012] 进一步地，化合物（I)的制备方法中，步骤(a)用85%乙醇热回流提取，合并提取 液。
[0013] 进一步地，化合物（I)的制备方法中，所述大孔树脂为D101型大孔吸附树脂。
[0014]进一步地，化合物（I)的制备方法中，步骤(a)中用二氯甲烷代替乙酸乙酯进行萃 取，得到二氯甲烷萃取物。
[0015] 上述化合物(I)在制备保护肝脏的药物中的应用。
[0016] 上述盐酸强力霉素的药物组合物在制备保护肝脏的药物中的应用。
[0017]本发明的优点：
[0018]本发明提供的盐酸强力霉素的药物组合物中含有盐酸强力霉素和一种从泽泻的 干燥块茎中分离得到的结构新颖的天然产物，盐酸强力霉素和该天然产物单独作用时，具 有肝脏作用；二者联合作用时，对肝脏的保护作用进一步提高，可以开发成保护肝脏的药 物。本发明与现有技术相比具有突出的实质性特点和显著的进步。
【具体实施方式】
[0019] 下面结合实施例进一步说明本发明的实质性内容，但并不以此限定本发明保护范 围。尽管参照较佳实施例对本发明作了详细说明，本领域的普通技术人员应当理解，可以对 本发明的技术方案进行修改或者等同替换，而不脱离本发明技术方案的实质和范围。
[0020] 实施例1:化合物(I)分离制备及结构确证
[0021] 分离方法：（a)将泽泻的干燥块茎(2kg)粉碎，用85 %乙醇热回流提取（15L X 3次）， 合并提取液，浓缩至无醇味(3L)，依次用石油醚(3LX3次）、乙酸乙酯(3LX3次)和水饱和的 正丁醇(3LX3次)萃取，分别得到石油醚萃取物、乙酸乙酯萃取物和正丁醇萃取物；（b)步骤 (a)中乙酸乙酯萃取物用D101型大孔树脂除杂，先用30%乙醇洗脱6个柱体积，再用85%乙 醇洗脱12个柱体积，收集85%洗脱液，减压浓缩得85%乙醇洗脱浓缩物；（c)步骤(b)中85% 乙醇洗脱浓缩物用正相硅胶分离，依次用体积比为100:1 (12个柱体积）、50 :1 (10个柱体 积）、25:1(8个柱体积)和12:1(8个柱体积）的二氯甲烷-甲醇梯度洗脱得到4个组分；（d)步 骤(c)中组分4用正相硅胶进一步分离，依次用体积比为20:1(6个柱体积）、12:1(8个柱体 积)和2:1(6个柱体积)的二氯甲烷-甲醇梯度洗脱得到3个组分；（e)步骤(d)中组分2用十八 烷基硅烷键合的反相硅胶分离，用体积百分浓度为88 %的甲醇水溶液等度洗脱，收集13~ 16个柱体积洗脱液，洗脱液减压浓缩得到化合物（I) (270mg，HPLC归一化纯度大于98% )。 [0022] 结构确证：淡黄色粉末，HR-ESI-MS显示[M+H]+为m/z 465.2246，结合核磁特征可 得分子式为C28H32〇6，不饱和度为13。核磁共振氢谱数据δΗ( ΡΡπι，CDC13，500MHz):H-2(2.22， ddd，J=14.5,8.7,5.3Hz)，H-2(2.64，ddd，J=14.5,9.7,6.3Hz)，H-3(1.88，m)，H-3(1.91， m)，H-4(1.23，m)，H-4(1.94，m)，H-6(3.12，br，s)，H-7(1.38，ddd，J=14.5，ll.l，1.3Hz)，H- 7(2.16，ddd，J=14.5,3.6,2.7Hz)，H-8(1.46，qd，J = ll.l，3.6Hz)，H-9(2.28，dd，J=11.2， 4.1Hz)，H-ll(4.55，d，J=4.1Hz)，H-14(2.02，m)，H-15(1.44，m)，H-15(1.93，m)，H-16 (1.92，m)，H-16(2.05，m)，H-18(1.17，s)，H-19(1.05，s)，H-21(9.62，s)，H-22(4.27，d，J= 1.9泡），!1-23(5.11，8)，!1-27(1.77,8)，!1-28(1.88,8);核磁共振碳谱数据6。(卯 111，〇0(：13， 125MHz)216.2(C，1-C)，39.5(CH2,2-C)，17.4(CH2,3-C)，29.6(CH2,4-C)，64.0(C，5-C)，60.2 (CH，6-C)，30.8(CH2,7-C)，34.9(CH，8-C)，37.9(CH，9-C)，52.7(C，10-C)，102.2(CH，11-C)， 160.4(C，12-C)，53.2(C，13-C)，46.4(CH，14-C)，35.2(CH2，15-C)，28.4(CH2，16-C)，174.2 (C，17-C)，19.9(CH3，18-C)，16.8(CH3，19-C)，137.6(C，20-C)，194.1(CH，2hC)，66.7(CH， 22-C)，99.2(CH，23-C)，167.1(C，24-C)，123.5(C，25-C)，175.7(C，26-C)，8.6(CH 3,27-C)， 21.2(CH3,28-C)。红外波谱表明该化合物含有酯（1749cm-4和酮（1713cm-4、醛基（1648cm -4基团。13C-NMR、DEPT和HSQC谱中显示有28个碳信号，包括四个甲基，六个亚甲基，八个次 甲基(三个含氧碳δ〔60.2、66.7、99.2，一个醛基碳δ〔194.1，一个烯属次甲基δ〔1〇2.2)，以及 十个季碳(一个酯基碳心175.7,一个酮基δ[216·2,四个烯碳δ[174·2、137·6、167·1、123·5， 一个连氧碳δ(；64.0和一个连氧稀碳δ(；160.4)，碳氢数量为C28H32;以上功能结构再结合不饱 和数表明该化合物为七环结构。1Η-匪R谱显示存在四个甲基质子信号δΗ1.17(3Η， 8)、1.05 (3H，s)、1.77(3H，s)、1.88(3H，s);三个连氧质子信号 SH3.12(lH，br，s，H-6)、4.27(lH，d，J =1.9取，!1-22)、5.11(1!1，8，!1-23);-个烯属次甲基质子信号5114.55(1!1，(1，了 = 4.1他，!1- 11)。碳氢核磁谱图还表明存在一个α，β_不饱和内酯边链结构[包含两个烯甲基SH-271.77与 δΗ-281.88,一个连氧次甲基δΗ-235.1 1 ( 1H，s)Jc-26175.7(C)，SC-24167.1(C)，δ。- 25123.5(C)， Sc-23 99.2 (CH)，δ。-2821.2 (CH3)，δ。-278.6 (CH3)];通过C-l2的酮与22-0Η连接为半缩醛桥后C- 12羟基与C-11氢脱去形成环外双键六元半缩醛环[δΗ-224.27(lH，d，J=1.9Hz)J H-219.62 (1H，s)Jc-2266·7(00，δ。-12160·4(0，δ。- 17140·7(0，δ。-21194.1(CH)];-个 5β，6β_ 环氧结 构[δΗ-63.12(lH，br，s);Sc-564·0(0，δ。- 660.2(CH)L13C-NMR 和 HSQC 谱显示有一个单独的酮 基碳 δ。-:216.2(0与两个亚甲基[δ。-239.5与511-22.22(1!1，(1(1(1，了=14.5,8.7,5.3抱）和2.64 (1!1，2.64，(1(1(1，了=14.5,9.7,6.3!^)存在相关信号4。-317.4与5[1- 31.88(1!1，111)和1.91(1!1， m)存在相关信号]，⑶SY谱中显示有-C(2)H2-C(3)H2-C(4)H2-片段，HMBC谱分析可知 H2-2和H2-3与C-1存在相关信号，查阅文献，对比相关信号，可知该化合物为睡前内酯化合 物。此外，C-17的17-OH与C-20的20-H脱去形成六元半缩醛环内的双键结构[δ。-17140.7(C)， 一2Q137.6(C) ]; C-21位为醛基，通过HMBC中Η-21与C-20的相关信号确证连接位置[δΗ-219.62 (1Η，d，J = 7.2Ηζ)，δ。-21194.1 (CH)]。综合氢谱、碳谱、HMBC谱和R0ESY谱，以及文献关于相关 类型核磁数据，可基本确定该化合物如下所示，立体构型进一步通过ECD试验确定，理论值 与实验值基本一致。该化合物化学式及碳原子编号如下：
[0023]
?
[0024] 实施例2:药理作用
[0025] 1、材料与方法
[0026] 1 · 1材料与仪器
[0027] 盐酸强力霉素购自中国药品生物制品检定所。化合物（I)自制，制备方法见实施例 1。ICR雌性小白鼠体重(25 ± 5)g，上海斯莱克实验动物责任有限公司；考马斯亮蓝G-250、甘 油三脂试剂盒、丙二醛测试盒、谷胱甘肽过氧化物试剂盒、乙醇脱氢酶测定试剂盒南京建成 生物工程研究所;海王金樽，广东深圳海王药业有限公司；56°红星二锅头白酒，北京红星酿 酒厂。Alpha-D2冻干机德国Christ公司；电子天平，上海天平仪器厂;UV752N紫外可见分光 光度计，上海仪电分析仪器有限公司。
[0028] 1.2动物分组
[0029] 将72只ICR小鼠在(22 ± 1) °C，湿度40 %~60 %，12h日夜交替，自由进食、进水的条 件下适应性喂养一周后，随机分为六组。空白对照组12只：实验过程中不做任何处理，自由 喂养;模型组12只：0.9%的生理盐水;盐酸强力霉素组12只：浓度为100mg/mL;化合物（I)组 12只：浓度为100mg/mL;盐酸强力霉素与化合物（I)组合物组12只：浓度为50mg/mL盐酸强力 霉素+50mg/mL化合物（I);阳性对照组12只：浓度为25mg/mL的海王金樽溶液。
[0030] 1.3给药
[0031]每日经口灌胃给予20mL/kg · BW受试样品。空白对照组不做任何灌胃，自由进食、 进水；模型对照组按体重给予生理盐水，连续给药30d。每周称重一次，根据体重调整用药 量。给予受试样品结束时，将模型对照组及各样品组一次灌胃给予白酒5mL/kg · BW，空白对 照组给蒸馏水。
[0032] 1.4肝脏样品制备
[0033]末次给药后，禁食不禁水12h，将小鼠颈椎脱白处死，解剖取出完整肝脏，预冷生理 盐水清洗至洗液无血色后，吸干肝脏表面水分。剪取〇. lg肝脏组织置于小烧杯中（于冰水）， 准备9倍(0.9mL)于肝脏组织重量的0.9%的生理盐水，转移总量2/3的生理盐水于烧杯中， 尽快剪碎组织块，倒入玻璃匀浆器，再将剩余的1/3生理盐水冲洗残留在烧杯中的碎组织 块，一起倒入匀浆管进行匀浆，充分研磨后制成10 %的组织匀浆，于离心机中以2000r/min 离心15min，取上清液备用。
[0034] 1.5检测指标
[0035]小鼠体重:每周称量一次小鼠体重，直到实验结束，以考察受试样品对各组小鼠体 重的影响。肝组织指标测定:各组肝组织中GSH、MDA和TG含量，ADH活性测定根据各试剂盒说 明书操作步骤进行。
[0036] 1.3数据统计
[0037]数据均以（平均值土标准偏差）表示，组间差异采用SPSS16.0进行单因素分析 (AN0VA)，以P<0.05或P<0.01确定差异是否有统计学意义。
[0038] 2、实验结果
[0039] 2.1对谷胱甘肽、丙二醛含量的影响
[0040]肝脏谷胱甘肽(GSH)的总含量是评价药物醒酒保肝功能的一个重要指标。由表1可 知，与空白组比较，模型组小鼠经白酒灌胃后，肝脏GSH含量极显著降低(P〈0.01)，说明该模 型造模成功。阳性对照组和盐酸强力霉素与化合物（I)组合物组小鼠肝匀浆中GSH含量与模 型组相比极显著升高(P〈〇.01)，盐酸强力霉素组、化合物（I)组小鼠肝匀浆中GSH含量也明 显升高(P〈0.05)。组合物能够维持肝脏GSH含量，对抗乙醇损伤引起的肝脏GSH耗竭，提高机 体清除自由基的能力，从而对小鼠肝脏起到保护作用。由于GSH能在一定程度上阻止肝组织 中脂质过氧化反应，而丙二醛(MDA)是脂质过氧化反应的产物之一，因此GSH浓度的降低会 间接导致肝脏MDA含量的增加。由表1可知，与空白组比较，模型组小鼠灌胃后，肝脏MDA含量 极显著升高(P〈〇.01)，说明该模型造模成功。阳性对照组和盐酸强力霉素与化合物（I)组合 物组小鼠肝匀浆中MDA含量与模型组相比显著下降P(〈0.01)，盐酸强力霉素组、化合物（I) 组也表现出MDA含量明显下降，显著性水平(P〈0.05)。
[0041 ] 表1受试样品对小鼠肝组织中GSH、MDA含量的影响
[0042]
[0043] 2.2对甘油三酯含量的影响
[0044]当机体摄入大量乙醇时，乙醇在乙醇脱氢酶的作用下大量氧化，使得三羧酸循环 和脂肪代谢受阻，使得甘油三酯(TG)在肝脏中不断堆积，不但会诱发较为严重的心血管疾 病，还会引发脂肪肝。由表2可知，与空白组比较，模型组小鼠肝脏组织TG含量极显著升高(P 〈0.01)，说明该模型造模成功。与模型组比较，盐酸强力霉素与化合物（I)组合物组和阳性 对照组小鼠肝匀浆中TG含量极显著降低(P〈0.01)。本实验中，各药物组都表现出降低醉酒 小鼠肝脏TG含量，并且组合物组都达到极显著水平(P〈0.01)，说明此组合物可降低醉酒小 鼠肝脏组织TG含量，减轻肝脏脂肪堆积，起到保护肝脏的作用。
[0045] 表2受试样品对小鼠肝组织中TG含量的影响
[0046]
[0047] 上述试验表明，盐酸强力霉素、化合物（I)可以提高小鼠肝组织中GSH含量，降低 MDA含量，抑制TG的积累，具有一定的保肝作用;盐酸强力霉素和化合物（I)联合使用时，治 疗效果更好，可开发成保肝药物。
[0048]上述实施例的作用在于说明本发明的实质性内容，但并不以此限定本发明的保护 范围。本领域的普通技术人员应当理解，可以对本发明的技术方案进行修改或者等同替换， 而不脱离本发明技术方案的实质和保护范围。
【主权项】
1. 一种具有下述结构式的化合物（I)，2. -种盐酸强力霉素的药物组合物，其特征在于:包括盐酸强力霉素、如权利要求1所 述的化合物(I)和药学上可W接受的载体，制备成需要的剂型。3. 根据权利要求2所述的盐酸强力霉素的药物组合物，其特征在于:药学上可W接受的 载体包括稀释剂、赋形剂、填充剂、粘合剂、湿润剂、崩解剂、吸收促进剂、表面活性剂、吸附 载体或润滑剂。4. 根据权利要求2所述的盐酸强力霉素的药物组合物，其特征在于：所述剂型包括片 剂、胶囊剂、日服液、口含剂、颗粒剂、冲剂、丸剂、散剂、膏剂、丹剂、混悬剂、粉剂、溶液剂、注 射剂、栓剂、喷雾剂、滴剂或贴剂。5. 权利要求1所述的化合物（I)的制备方法，其特征在于，包含W下操作步骤：（a)将泽 泻的干燥块茎粉碎，用80~90%乙醇热回流提取，合并提取液，浓缩至无醇味，依次用石油 酸、乙酸乙醋和水饱和的正下醇萃取，分别得到石油酸萃取物、乙酸乙醋萃取物和正下醇萃 取物；（b)步骤(a)中正下醇取物用大孔树脂除杂，先用30%乙醇洗脱6个柱体积，再用85% 乙醇洗脱12个柱体积，收集85%洗脱液，减压浓缩得85%乙醇洗脱浓缩物；（C)步骤(b)中 85 %乙醇洗脱浓缩物用正相硅胶分离，依次用体积比为100:1、50 :1、25:1和12:1的二氯甲 烧-甲醇梯度洗脱得到4个组分；（d)步骤(C)中组分4用正相硅胶进一步分离，依次用体积比 为20:1、12:1和2:1的二氯甲烧-甲醇梯度洗脱得到3个组分；（e)步骤(d)中组分2用十八烧 基硅烷键合的反相硅胶分离，用体积百分浓度为88%的甲醇水溶液等度洗脱，收集13~16 个柱体积洗脱液，洗脱液减压浓缩得到化合物(I)。6. 根据权利要求5所述的化合物（I)的制备方法，其特征在于:步骤(a)用85%乙醇热回 流提取，合并提取液。7. 根据权利要求5所述的化合物（I)的制备方法，其特征在于:所述大孔树脂为D101型 大孔吸附树脂。8. 根据权利要求5所述的化合物（I)的制备方法，其特征在于:步骤(a)中用二氯甲烧代 替乙酸乙醋进行萃取，得到二氯甲烧萃取物。9. 权利要求1所述的化合物（I)在制备保护肝脏的药物中的应用。10. 权利要求2~4任一所述的盐酸强力霉素的药物组合物在制备保护肝脏的药物中的 应用。
【文档编号】C07J71/00GK105837654SQ201610240987
【公开日】2016年8月10日
【申请日】2016年4月18日
【发明人】潘立, 李义高, 李小彪, 赵阳
【申请人】镇江高海生物药业有限公司