西尼地平的药物组合物及其心肌保护的医药用图
【专利摘要】本发明公开了西尼地平的药物组合物及其心肌保护的医药用途，本发明提供的西尼地平的药物组合物中含有西尼地平和一种从黄芩的干燥根中分离得到的结构新颖的天然产物化合物(Ⅰ)，西尼地平和该天然产物单独作用时，可以降低心肌缺血再灌注损伤；二者联合作用时，对心肌缺血再灌注损伤的保护作用更优，可以开发成保护心肌缺血再灌注损伤的药物，与现有技术相比具有突出的实质性特点和显著的进步。
【专利说明】
西尼地平的药物组合物及其心肌保护的医药用途
技术领域
[0001] 本发明属于生物医药领域，涉及西尼地平的新用途，具体涉及西尼地平的药物组 合物及其心肌保护的医药用途。
【背景技术】
[0002] 西尼地平即1，4_二氢-2,6-二甲基-4-(3-硝基苯基)-3,5_吡啶二羧酸2-甲氧基乙 酯肉桂醇酯。
[0003] 西尼地平为亲脂性的二氢吡啶类钙拮抗剂，能与血管平滑肌细胞膜上L型钙通道 的二氢吡啶位点结合，抑制Ca 2+通过L型钙通道的跨膜内流，从而松弛、扩张血管平滑肌，起 到降压作用。它还可通过抑制Ca2+通过交感神经细胞膜上N型钙通道的跨膜内流而抑制交感 神经末梢去甲肾上腺素的释放和交感神经活动。
[0004] 迄今为止，尚未见西尼地平及其药物组合物与心肌缺血再灌注损伤的相关性报 道。
【发明内容】
[0005] 本发明的目的在于提供一种西尼地平的药物组合物，该药物组合物中含有西尼地 平和一种从草本中分离得到的结构新颖的天然产物，西尼地平和该天然产物可以协同保护 心肌。
[0006] 本发明的上述目的是通过下面的技术方案得以实现的：
[0007] 一种具有下述结构式的化合物（I)，
[0008]
[0009] -种西尼地平的药物组合物，包括西尼地平、如上所述的化合物（I)和药学上可以 接受的载体。
[0010]如上所述的化合物（I)的制备方法，包含以下操作步骤：（a)将黄芩的干燥根粉碎， 用60~70 %乙醇热回流提取，合并提取液，浓缩至无醇味，依次用石油醚、乙酸乙酯和水饱 和的正丁醇萃取，分别得到石油醚萃取物、乙酸乙酯萃取物和正丁醇萃取物；（b)步骤(a)中 正丁醇萃取物用大孔树脂除杂，先用10%乙醇洗脱12个柱体积，再用70%乙醇洗脱15个柱 体积，收集70 %洗脱液，减压浓缩得70 %乙醇洗脱浓缩物；（c)步骤(b)中70 %乙醇洗脱浓缩 物用正相硅胶分离，依次用体积比为55:1、25:1、15:1和1:1的二氯甲烷-甲醇梯度洗脱得到 4个组分；（d)步骤(c)中组分3用正相硅胶进一步分离，依次用体积比为20:1、15:1和1:1的 二氯甲烷-甲醇梯度洗脱得到3个组分；（e)步骤(d)中组分2用十八烷基硅烷键合的反相硅 胶分离，用体积百分浓度为70 %的甲醇水溶液等度洗脱，收集7~13个柱体积洗脱液，洗脱 液减压浓缩得到化合物(I)。
[0011] 进一步地，步骤(a)中用65%乙醇热回流提取，合并提取液。
[0012]进一步地，所述大孔树脂为AB-8型大孔吸附树脂。
[0013] 如上所述的化合物(I)在制备心肌保护的药物中的应用。
[0014] 如上所述的西尼地平的药物组合物在制备心肌保护的药物中的应用。
[0015] 本发明的优点：
[0016] 本发明提供的西尼地平的药物组合物中含有西尼地平和一种从草本中分离得到 的结构新颖的天然产物，西尼地平和该天然产物单独作用时，可以降低心肌缺血再灌注损 伤;二者联合作用时，对心肌缺血再灌注损伤的防治作用更优，可以开发成防治心肌缺血再 灌注损伤的药物。
【具体实施方式】
[0017] 下面结合实施例进一步说明本发明的实质性内容。
[0018] 实施例1:化合物(I)分离制备及结构确证
[0019] 试剂来源：乙醇、石油醚、乙酸乙酯、正丁醇、二氯甲烷为分析纯，购自上海凌峰化 学试剂有限公司，甲醇，分析纯，购自江苏汉邦化学试剂有限公司。
[0020] 分离方法：（a)将黄芩的干燥根(2kg)粉碎，用65 %乙醇热回流提取(20L X 3次），合 并提取液，浓缩至无醇味(4L)，依次用石油醚(4L X 3次）、乙酸乙酯(4L X 3次)和水饱和的正 丁醇（4LX 3次）萃取，分别得到石油醚萃取物、乙酸乙酯萃取物和正丁醇萃取物；（b)步骤 (a)中正丁醇萃取物用AB-8型大孔树脂除杂，先用10%乙醇洗脱12个柱体积，再用70%乙醇 洗脱15个柱体积，收集70 %洗脱液，减压浓缩得70 %乙醇洗脱浓缩物；（c)步骤(b)中70 %乙 醇洗脱浓缩物用正相硅胶分离，依次用体积比为55:1 (8个柱体积）、25:1 (8个柱体积）、15:1 (8个柱体积)和1:1(5个柱体积）的二氯甲烷-甲醇梯度洗脱得到4个组分；（d)步骤(c)中组 分3用正相硅胶进一步分离，依次用体积比为20:1(8个柱体积）、15:1(10个柱体积)和1:1(5 个柱体积)的二氯甲烷-甲醇梯度洗脱得到3个组分；（e)步骤(d)中组分2用十八烷基硅烷键 合的反相硅胶分离，用体积百分浓度为70 %的甲醇水溶液等度洗脱，收集7~13个柱体积洗 脱液，洗脱液减压浓缩得到化合物（I) (345mg，HPLC归一化纯度大于98% )。
[0021] 结构确证:淡黄色粉末，HR-ESI-MS显示[M+H]+为m/z 253.1761，结合核磁特征可 得分子式为C15H24〇3，不饱和度为4。核磁共振氢谱数据δ Η(ΡΡπι，CDC13，500MHz): H-3 (2.54， m)，H-4a(1.82，m)，H-4b(1.62，m)，H-5a(1.77，m)，H-5b(1.69，m)，H-6(2.07，m)，H-7(2.66， br，d，J = 8.7Hz)，H-8(3.54，d，J = 9.2Hz)，H-10a(2.37，d，J=15.4Hz)，H-10b(1.90，d，J = 15.4Hz)，H-ll(9.87，s)，H-12a(3.93，dd，J = 9.2,4.5Hz)，H-12b(3.58，dd，J = 9.2,2.7Hz)， !1-13(0.88，(1，了 = 7.4抱），!1-14(0.86,8)，!1-15(1.05,8);核磁共振碳谱数据6。(卯111，〇)(：1 3， 125MHz):171.2(C，1-C)，128.3(C，2-C)51.2(CH，3-C)，24.5(CH2,4-C)，32.1(CH2,5-C)，29.3 (CH，6-C)，53.5(CH，7-C)，83.1(CH，8-C)，39.6(C，9-C)，43.7(CH2，10-C)，194.3(CH，11-C)， 51.4(CH2，12-C)，12.5(CH 3，13-C)，19.5(CH3，14-C)，25.8(CH3，15-C)。红外波谱表明该化合 物含有羟基(3340cm- 1)，羰基（1735cm-1)。13C-NMR、DEPT和HSQC谱中显示有15个碳信号，包括 三个甲基，四个亚甲基(一个连氧碳），五个次甲基(一个醛基碳和一个连氧碳），以及三个季 碳(两个烯烃碳），以上功能结构再结合不饱和数表明该化合物为双环结构。1H-匪R谱结合 HSQC谱显示三个甲基质子信号δΗ 0.88(3!1，(1，1 = 7.4!^)、0.86(3!1，8)、1.05(3!1，8)，三组亚 甲基质子信号 δΗ 1.82(lH，m)与 1.62(1!1，111)、1.77(1!1，111)与1.69(1!1，111)、2.37(1!1，(1，了 = 15.4抱）与1.90(1!1，(1，1=15.4抱），一组羟甲基质子信号5[13.93(1!1，(1(1，1 = 9.2,4.5抱）与 3.58(1!1，(1(1，了 = 9.2,2.7!^)，三个次甲基质子信号5[12.54(1!1，111)，2.07(1!1，111)与2.66(1!1， 1^，^ = 8.7抱），一个连氧次甲基质子信号6(13.54(1!1，(1，1 = 9.2抱），一个醛基质子信号611 9 · 87 (1H，s)。4-? COSY谱中存在H-3/H2-12、H-3/H2-4/H2-5/H-6/H-7/H-8相关信号，同时 HMBC 谱中显示有 H2-4 与 C-2 和 C-3，H2-5 与 C-3，H-6 与 C-8，H-7 与 C-1，H2-10 与 C-1、C-2、C-7、C-8 和 C-14，H-11 与 C-l、C-2 和 C-3，H2-12 与 C-2，H3-13 与 C-5 和 C-7，H3-14 与 C-8、C-9 和 C-10，H3-15与C-9和C-10相关信号，通过上述NMR谱中的相关信息可以构建该化合物的连接方式，并 且上述波谱数据表明该化合物为tremulane型倍半萜。HMBC谱中H 3-14与C-8和C-9的相关性 表明C-8位连有一个羟基。在tremulane型倍半萜中，H-6与H-7位为β构型，H 3-14构型通常处 是β位，Η3-15构型为α位。在该化合物的Ν0Ε试验中体现的Η-6与Η-7以及Η-7与Η 3-14相关信号 符合tremulane型倍半萜的构型关系。同时，N0ESY谱中Η2-12与Η-7以及Η 3-15与Η-8的相关性 表明羟甲基为β构型，H-8为α构型。综合氢谱、碳谱、HMBC谱和N0ESY谱，以及文献关于相关类 型核磁数据，可基本确定该化合物如下所示，立体构型进一步通过ECD试验确定，理论值与 实验值基本一致。
[0022]化学结构式及碳原子编号如下：
[0023]
[0024] 实施例2:对大鼠心肌缺血再灌注损伤模型的保护作用
[0025] 1、材料与方法
[0026] 1.1动物
[0027] SD大鼠70只，体重180~200g，雌雄各半，清洁级，由北京维通利华实验动物技术有 限公司提供。清洁级动物房饲养，定时给予全价营养饲料喂食，室温22~25°C，湿度50%~ 70% 〇
[0028] 1.2试剂与样品
[0029]西尼地平购自上海极威生物科技有限公司。化合物（I)自制，制备方法见实施例1。 丹红注射液(原儿茶醛0.05g · Γ1，约相当于生药lg 由山东济南步长制药有限公司 生产。肌f丐蛋白T(Cardiac troponin T，cTnT)试剂盒由美国Rapid Bio Lab公司生产，北京 莱博特利生物医学科技公司提供;肌酸激酶同工酶(CK-MB)试剂盒由北京中生北控生物科 技股份有限公司提供;硝基四氮唑蓝(NBT)，上海前进试剂厂生产。血栓素(TXB2)和6-酮-前 列腺素 Fla(6-ket〇-PGFla)放射免疫试剂盒，由北京普尔伟业生物技术有限公司提供;二磷 酸腺苷(adenosine diphosphate，ADP)，由美国CHRO-NOLOG公司生产，北京现代威士达医疗 器械有限公司提供，浓度〇.2mmol · L一、
[0030] 1.3仪器
[0031] SC-3人工呼吸机（上海医疗设备厂）；ECG-6511心电图机（上海光电仪器有限公 司）；RX-2000全自动生化仪(美国Technicon公司）；LBY-NJ2血小板聚集仪(北京普利生公 司）；SN-682放射免疫γ计数仪(上海核辐射仪器有限公司）。
[0032] 1.4大鼠分组及模型制备
[0033] 20%氨基甲基乙酯（乌拉坦)腹腔注射麻醉(0.7mL · kg-1)，大鼠固定在专用木板 上，气管插管，人工呼吸(潮气量为20mL · kg<，呼吸频率为50次/min)吸入室内空气，开胸， 剪开心包膜，轻轻挤压大鼠胸腔右侧壁，将心脏挤出。在左心耳下缘，肺动脉圆锥左缘与左 心耳之间进针，以冠状静脉主干为标志，左心耳下方2~3mm处用丝线结扎（垫1个半圆形硅 胶管）冠状动脉前降支造成大鼠心肌缺血，心电监护显示结扎冠状动脉成功(持续2min)后 lOmin经股静脉iv给药。假手术组只穿线不结扎，注射等剂量生理盐水;模型组结扎后，给予 等剂量生理盐水。实验过程中动物处置方法符合动物伦理学要求标准。实验分组分别作空 白对照(假手术)组、模型对照组、西尼地平组(80mg · kg^1)、化合物（I)组(80mg · kg^1)、西 尼地平与化合物（I)组合物组【40mg · kg<西尼地平+40mg · kg<化合物（I)】及阳性药对照 组。阳性药物对照组:丹红注射液(50mg · kg"1)。
[0034] 1.5标本采集
[0035] 大鼠造模缺血后40min，剪断丝线再灌注60min。记录结扎前、结扎后40min及剪开 丝线后(再灌注)60min Π 导心电图。观察60min后，腹主动脉取血，一部分放入3.8%枸橼酸 钠溶液1:9抗凝真空管和消心痛+2%EDTANa 2溶液抗凝管后离心，测定血小板聚集性和TXB2， 6-ket〇-PGFla含量。另一部分不抗凝放入真空管后离心测定血清cTnT，CK-MB含量。然后，取 出心脏，生理盐水冲洗，称量全心重，在心脏结扎线以下，平行于冠状沟均匀地将左心室部 分横断切成5片，置于NBT溶液37°C染色15min。用DeltaPix(丹麦）图像分析系统测量每片心 肌面积、心室面积和梗死区面积，然后求出梗死区占心室和全心区面积的百分比。
[0036] 1.6指标检测方法
[0037]放射免疫法测定TXB2,6-ket〇-PGFal;全自动生化仪电化学发光法和速率法测定 测定cTnT，CK-MB;比浊法测定血小板聚集率，诱导剂为ADP，浓度为0.2mmol · I/1，取其1、3、 5min及最大聚集率。
[0038] 1.7统计学方法
[0039]所有数据用x±s表示，组间比较为单因素方差分析，组间比较采用LSD方法，P〈 〇. 05为差异有统计学意义，采用SPSS19.0软件包进行统计学处理。
[0040] 2、实验结果
[0041 ] 2.1对大鼠 MI面积和I/R损伤后CK-MB和cTnT的影响
[0042] 大鼠心肌I/R损伤后，模型组血清CK-MB活性明显升高，和假手术组比较有显著差 异(P〈0.01)。模型组cTnT水平亦有一定升高，但与假手术组比较无显著差异，穿刺对心肌组 织也是一种损伤。与模型对照组比较，西尼地平与化合物（I)组合物组及阳性对照组均能显 著降低大鼠 MI面积及动物血清CK-MB水平和cTnT含量(P〈0.01);与模型对照组比较，西尼地 平组、化合物（I)组大鼠 MI面积及血清CK-MB水平和cTnT含量降低(P<0.05)。
[0043] 结果见表1。
[0044] 2.2对大鼠心肌1/^损伤后血小板聚集性、6-1?^〇-?6?14町乂82的影响 [0045]与正常对照组比较，模型对照组小鼠血小板聚集性升高(P<0.05)，TXB2升高(P< 0.05)，（P<0.05)，6-ket〇-PGF la降低；与模型对照组比较，西尼地平与化合物（I)组合物组 和阳性对照组血小板最大聚集率和TXB2显著降低斤<0.01)，6-1^丨〇-?6? 1〇1显著升高（？< 〇.〇1);与模型对照组比较，西尼地平组、化合物（I)组血小板最大聚集率和TXB 2降低（P< 0.05)，6-ket〇-PGFia 升高(Ρ<0·05)。结果见表 2。
[0046] 表1对大鼠 ΜΙ面积和I/R损伤后CK-MB和cTnT的影响
[0047]
[0048] 表2对大鼠心肌I/R损伤后血小板聚集性、e-keto-PGFic^PTXB〗的影响
[0049]
[0050] 上述结果表明，西尼地平或化合物（I)单独作用时，对心肌缺血/再灌注损伤具有 保护作用；西尼地平和化合物（I)联合作用时，对心肌缺血/再灌注损伤的保护作用更为明 显，可以开发成保护心肌缺血/再灌注损伤的药物。
[0051] 上述实施例的作用在于说明本发明的实质性内容，但并不以此限定本发明的保护 范围。本领域的普通技术人员应当理解，可以对本发明的技术方案进行修改或者等同替换， 而不脱离本发明技术方案的实质和保护范围。
【主权项】
1. 一种具有下述结构式的化合物（I)，2. -种西尼地平的药物组合物，其特征在于:包括西尼地平、如权利要求1所述的化合 物(I)和药学上可W接受的载体。3. 权利要求1所述的化合物（I)的制备方法，其特征在于，包含W下操作步骤：（a)将黄 琴的干燥根粉碎，用60~70 %乙醇热回流提取，合并提取液，浓缩至无醇味，依次用石油酸、 乙酸乙醋和水饱和的正下醇萃取，分别得到石油酸萃取物、乙酸乙醋萃取物和正下醇萃取 物；（b)步骤(a)中正下醇萃取物用大孔树脂除杂，先用10%乙醇洗脱12个柱体积，再用70% 乙醇洗脱15个柱体积，收集70%洗脱液，减压浓缩得70%乙醇洗脱浓缩物；（C)步骤(b)中 70%乙醇洗脱浓缩物用正相硅胶分离，依次用体积比为55:1、25:1、15:1和1:1的二氯甲烧- 甲醇梯度洗脱得到4个组分；（d)步骤(C)中组分3用正相硅胶进一步分离，依次用体积比为 20:1、15:1和1:1的二氯甲烧-甲醇梯度洗脱得到3个组分；（e)步骤(d)中组分2用十八烷基 硅烷键合的反相硅胶分离，用体积百分浓度为70 %的甲醇水溶液等度洗脱，收集7~13个柱 体积洗脱液，洗脱液减压浓缩得到化合物(I)。4. 根据权利要求3所述的化合物（I)的制备方法，其特征在于:步骤(a)中用65%乙醇热 回流提取，合并提取液。5. 根据权利要求3所述的化合物（I)的制备方法，其特征在于:所述大孔树脂为AB-8型 大孔吸附树脂。6. 权利要求1所述的化合物（I)在制备屯、肌保护的药物中的应用。7. 权利要求2所述的西尼地平的药物组合物在制备屯、肌保护的药物中的应用。
【文档编号】A61P9/10GK105906494SQ201610250520
【公开日】2016年8月31日
【申请日】2016年4月20日
【发明人】宋晓梅
【申请人】宋晓梅