一种好氧菌与厌氧菌复合的微生物液体菌剂及其制备方法
【专利摘要】一种好氧菌与厌氧菌复合的微生物液体菌剂及其制备方法，其特征在于：包括6种液体好氧菌剂与4种液体厌氧菌剂，液体好氧菌剂由液体巨大芽孢杆菌剂、液体褐球固氮菌剂、液体胶质芽孢杆菌剂、液体细黄链霉菌剂、液体枯草芽孢杆菌剂、液体地衣芽孢杆菌剂组成；液体厌氧菌剂由液体光合菌剂、液体植物乳菌剂、液体嗜酸乳杆菌剂、液体德氏乳杆菌剂组成。制备方法包括以下步骤：将6种好氧菌分别培养制成6种液体好氧菌剂；将4种厌氧菌培养制成4种混合的液体厌氧菌剂；将6种液体好氧菌剂注入到混合的液体厌氧菌剂中，得到微生物液体菌剂。本发明的微生物液体菌剂常温下保存期长达一年以上，具有固氮、解磷、解钾、防病害、改良土壤的功能。
【专利说明】
一种好氧菌与厌氧菌复合的微生物液体菌剂及其制备方法
技术领域
[0001]本发明涉及属于农业微生物、生态种植和微生物菌剂技术领域，尤其涉及一种好氧菌与厌氧菌复合的微生物液体菌剂及其制备方法。
【背景技术】
[0002]我国由于长期过量施用化肥，已经造成了大量的土壤板结和酸化，土壤的渗透性、供氧能力及维持养分平衡能力降低，土壤中有益微生物急剧减少，有害物质的残留及有害微生物滋生，控制了植物根系对养分、水分的吸收，导致作物生长不良、品质下降，各种病害日趋严重。同时农作物内部农药化学残留的增加，严重地威胁着人类的健康和安全;化肥过量使用造成的面源污染，也加剧了生态环境的严重破坏。最近，国家农业部已经提出了化肥农药零增长的行动方案。要实现化肥农药零增长的同时又要保证农产品增产增收，实现供给侧的有效供应，就需要能够有效替代化肥农药的产品。由此能够替代化肥和减少农药的微生物肥料成为当前发展生态农业的急需，用微生物制剂来改善土壤结构，改良作物品质，实现增产增收，已成为现代农业的必然趋势，是发展绿色可持续高效生态农业的必然选择。
[0003]近年来各种微生物肥料如雨后春笋般大量涌现，但肥效明显可以达到或超过化肥的产品却并不多见，其主要原因:一是微生物菌种单一，解决不了作物生长的诸多问题;二是菌剂保存期短，肥效不明显，无论是单一菌剂还是复合菌剂都难以解决液体菌剂腐败、有效菌死亡、保存期短的问题。
【发明内容】
[0004]本发明的目的是提供一种好氧菌与厌氧菌复合的微生物液体菌剂及其制备方法，该微生物液体菌剂及其制备方法解决了微生物菌剂菌种单一、保存期短以及肥效不明显的问题。
[0005]为达到上述发明目的，本发明采用的一种好氧菌与厌氧菌复合的微生物液体菌剂的技术方案是:所述微生物液体菌剂包括6种用液体培养基培养的液体好氧菌剂与4种用液体培养基培养的液体厌氧菌剂，所述液体好氧菌剂与液体厌氧菌剂的质量比为3:7?7:3;所述液体好氧菌剂由以下质量份的菌剂组成:
液体巨大芽孢杆菌剂I?3质量份，
液体褐球固氮菌剂I?3质量份，
液体胶质芽孢杆菌剂I?3质量份，
液体细黄链霉菌剂I质量份，
液体枯草芽孢杆菌剂I?2质量份，
液体地衣芽孢杆菌剂I?2质量份；
所述液体厌氧菌剂由以下质量份的菌剂组成:
液体光合菌剂I?2质量份，
液体植物乳菌剂I?2质量份， 液体嗜酸乳杆菌剂I?5质量份，
液体德氏乳杆菌剂I?5质量份；
其中，每一种液体好氧菌剂中的好养菌含量大于等于2亿个/毫升，每一种液体厌氧菌剂中的厌氧菌含量大于等于2亿个/毫升。
[0006]上述技术方案中的有关内容解释如下:
1、上述方案中，所述微生物液体菌剂还包括微量元素，微量元素的添加量为所述微生物液体菌剂质量的0.1-0.2%，所述微量元素选自B、Zn、Mn、Cu、Co中任意一种或至少两种以上的混合物。
[0007]为达到上述发明目的，本发明采用的一种好氧菌与厌氧菌复合的微生物液体菌剂的制备方法的技术方案是:所述制备方法包括以下步骤:
第一步，将6种好氧菌分别培养制成6种液体好氧菌剂，
(1)分别配制巨大芽孢杆菌、褐球固氮菌、胶质芽孢杆菌、细黄链霉菌、枯草芽孢杆菌以及地衣芽孢杆菌的液体好氧菌培养基，再分别向6种液体好氧菌培养基中接种各自对应的菌种，在30~37°C，120?140r/min条件下进行菌种的一级扩大培养，得到6种一级好氧菌液；
(2)再分别取6种一级好氧菌液向6种所述液体好氧菌培养基中接种各自对应的菌种，在30?37°C、120?140r/min条件下进行菌种的二级扩大培养，得到6种二级好氧菌液，其中，每种一级好氧菌液的接种量为其液体好氧菌培养基质量的0.9-1.1%;
(3 )再取6种二级好氧菌液向6种所述液体好氧菌培养基中接种各自对应的菌种，在30?37°C、120?140r/min条件下进行菌种的三级扩大培养，得到6种液体好氧菌剂，其中，每种二级好氧菌液的接种量为其液体好氧菌培养基质量的I?1.5%;
第二步，将4种厌氧菌培养制成4种混合的液体厌氧菌剂，
(1)分别配制光合菌、植物乳杆菌、嗜酸乳杆菌以及德氏乳杆菌的液体厌氧菌培养基，再分别向4种液体厌氧菌培养基中接种各自对应的菌种，在30?37 °C条件下静置，进行菌种的一级扩大培养，得到4种一级厌氧菌液；
(2)再分别取4种一级厌氧菌液向4种所述液体厌氧菌培养基中接种各自对应的菌种，在30?37°C条件下静置，进行菌种的二级扩大培养，得到4种二级厌氧菌液，其中，每种一级厌氧菌液的接种量为其液体厌氧菌培养基质量的I?1.5%;
(3)配制混合发酵液体培养基，取所述4种二级厌氧菌液向所述混合发酵液体培养基中接种混匀，在30?37°C、光照2800?3200Ix条件下静置混合培养，得到混合的液体厌氧菌剂；
第三步，将6种液体好氧菌剂按上一个技术方案的配方比例缓慢注入到所述混合的液体厌氧菌剂中并搅拌均匀，静置，待均质稳定后，得到所述微生物液体菌剂。
[0008]上述技术方案中的有关内容解释如下:
1、上述方案中，在所述第三步中，同时加入微量元素，微量元素的添加量为所述微生物液体菌剂质量的0.1?0.2%，所述微量元素选自B、Zn、Mn、Cu、Co中任意一种或至少两种以上的混合物。
[0009]2、上述方案中，所述巨大芽孢杆菌的液体好氧菌培养基配方按照各组分所占的质量百分含量由以下组分组成:蔗糖1%，磷酸氢二钾0.1%，硫酸铵0.2%，可溶性淀粉2%，碳酸钙0.5%，? 油 0.5%，无菌水9 5.7%;
所述褐球固氮菌的液体好氧菌培养基配方按照各组分所占的质量百分含量由以下组分组成:蔗糖1%，磷酸氢二钾0.1%，酵母膏0.5%，硫酸镁0.05%，碳酸钙0.2%，钼酸钠0.001%，硼砂0.001%，硫酸亚铁0.001%，氯化钠0.002%，无菌水98.145% ；
所述胶质芽孢杆菌的液体好氧菌培养基配方按照各组分所占的质量百分含量由以下组分组成:蔗糖2%，磷酸氢二钾0.1%，硫酸镁0.04%，酵母膏0.2%，碳酸钙0.2%，硫酸亚铁0.001%,氯化钠 0.04%，无菌水97.419% ；
所述细黄链霉菌的液体好氧菌培养基配方按照各组分所占的质量百分含量由以下组分组成:可溶性淀粉2%，磷酸氢二钾0.05%，硝酸钾0.1%，硫酸镁0.05%，氯化钠0.005%，硫酸亚铁0.001%，无菌水97.794% ；
所述枯草芽孢杆菌的液体好氧菌培养基配方按照各组分所占的质量百分含量由以下组分组成:蔗糖1%，磷酸氢二钾0.05%，酵母膏0.05%，牛肉膏0.02%，蛋白胨0.05%，碳酸钙0.025%，氯化钠 0.02%，硫酸锰 0.001%，无菌水98.784% ；
所述地衣芽孢杆菌的液体好氧菌培养基配方按照各组分所占的质量百分含量由以下组分组成:蔗糖1%，磷酸氢二钾0.05%，酵母膏0.05%，牛肉膏0.02%，蛋白胨0.05%，碳酸钙0.025%，氯化钠 0.02%，硫酸锰 0.001%，无菌水98.784% ；
所述光合菌的液体厌氧菌培养基配方为:每I升无菌水里含乙酸钠3.3g，氯化铵0.6g，硫酸镁0.5g，酵母膏1.5g;
所述植物乳杆菌的液体厌氧菌培养基配方为:在每I升无菌水里含蔗糖20g，酵母膏25g，磷酸氢二钾2g;
所述嗜酸乳杆菌的液体厌氧菌培养基配方为:在每I升无菌水里含乙酸钠5g，柠檬酸铵2g，硫酸镁0.5g，酵母膏6g，牛肉膏12g，磷酸氢二钾2g，蛋白胨1g，硫酸猛0.05g ；
所述德氏乳杆菌的液体厌氧菌培养基配方为:在每I升无菌水里含乳清粉50g，碳酸钙2g，酵母膏I Og;
所述混合发酵液体培养基配方按照各组分所占的质量百分含量由以下组分组成:蔗糖4%，酵母膏0.4%，磷酸氢二钾0.2%，无菌水95.4%。
[0010]本发明的设计特点是:本发明的微生物液体菌剂是好氧菌群与厌氧菌群复合而成的微生物液体菌剂，其特点为先分别制备A和B两类复合微生物菌剂，A菌剂由6种好氧菌及兼性好氧菌组成，每种好氧菌采用好氧发酵工艺单独发酵。B菌剂由4种厌氧菌及兼性厌氧菌组成，4种厌氧菌采用厌氧发酵工艺分别接种，进行一级菌种培养，然后再按比例将4种厌氧菌混合，混合后的菌种进行二级菌种混合培养，即得复合B制剂。最后再将6种A菌剂分别按比例混入B菌剂中。该特点的好处在于，在好氧发酵阶段对6种菌株单独培养，可在保证菌种纯度和功能性的前提下，促进好氧菌快速增长繁殖。好氧发酵完成后，当6种液体好氧菌剂按比例混入厌氧发酵的B菌剂中之后，好氧菌群受到厌氧菌群及弱酸条件的抑制，增长繁殖变得缓慢下来，多数菌株形成了芽孢，菌株间形成互不拮抗的优良共生的环境条件，在常温下液体菌剂可以保存较长时间。
[0011 ]本发明与现有技术相比，具有以下有益效果:
(I)常规的微生物菌剂在液态条件下，菌株数分钟至数小时就繁殖一世代，由于不断快速繁殖生长，菌株很快就会畸形死亡，菌剂就会变黑发臭，这种菌剂在稀释后，多数菌群已经变得畸形乏力，无法发挥其有效功能，在常温条件下保存期很短，一般只有数月。而本发明的微生物液体菌剂中有效活菌数多，保存期长，A、B两种菌剂分别发酵然后再按比例复配，复配后在弱酸性的环境下，菌群的生长条件受到了抑制，同时养分与代谢能又得到了互补，菌群间形成了依存共生、互不拮抗的优良共生环境。由此，菌群的生长得到抑制，同样在液态常温的条件下，菌群变得缓慢生长，多数菌株形成芽孢状态，菌株活力得到保持并暂时处于休眠状态。在常温条件下，本发明的微生物液体菌剂保存有效期可以达到I年以上，稀释后，菌株又能很快恢复生长并发挥作用。
[0012](2)本发明的微生物液体菌剂中多菌种协同增效，功能全面。本发明采用A(即6种好氧菌群)、B(即4种厌氧菌群)两种菌剂分别发酵然后再按比例复配的方法，可以使更多的不同功能菌株复配共生。施用后肥效明显，不仅能起到固氮、解磷、解钾、抑菌、抗虫、促进生长的作用，还能够改善土壤结构，防治土传病害;能为作物实现高效生长、品质突出改善、为绿色、有机、生态种植创造有利条件。
【具体实施方式】
[0013]下面结合实施例对本发明作进一步描述:
实施例1: 一种好氧菌与厌氧菌复合的微生物液体菌剂及其制备方法所述微生物液体菌剂包括6种用液体培养基培养的液体好氧菌剂与4种用液体培养基培养的液体厌氧菌剂，所述液体好氧菌剂与液体厌氧菌剂的质量比为9:8;所述液体好氧菌剂由以下质量份的菌剂组成:
液体巨大芽孢杆菌剂2质量份，
液体褐球固氮菌剂2质量份，
液体胶质芽孢杆菌剂2质量份，
液体细黄链霉菌剂I质量份，
液体枯草芽孢杆菌剂I质量份，
液体地衣芽孢杆菌剂I质量份；
所述液体厌氧菌剂由以下质量份的菌剂组成:
液体光合菌剂I质量份，
液体植物乳菌剂I质量份，
液体嗜酸乳杆菌剂3质量份，
液体德氏乳杆菌剂3质量份；
其中，每一种液体好氧菌剂中的好养菌含量大于等于2亿个/毫升，每一种液体厌氧菌剂中的厌氧菌含量大于等于2亿个/毫升。
[0014]所述微生物液体菌剂还包括微量元素，微量元素的添加量为所述微生物液体菌剂质量的0.1 %，所述微量元素选自B、Zn、Mn三者的混合物。
[0015]制备方法包括以下步骤:
第一步，将6种好氧菌分别培养制成6种液体好氧菌剂，
(1)分别配制巨大芽孢杆菌、褐球固氮菌、胶质芽孢杆菌、细黄链霉菌、枯草芽孢杆菌以及地衣芽孢杆菌的液体好氧菌培养基，再分别向6种液体好氧菌培养基中接种各自对应的菌种，在30 0C，120r/min，pH值在6.5-7.5条件下培养48h，进行菌种的一级扩大培养，得到6种一级好氧菌液；
(2)再分别取6种一级好氧菌液向6种所述液体好氧菌培养基中接种各自对应的菌种，在30°C、120r/min条件下培养48h进行菌种的二级扩大培养，得到6种二级好氧菌液，其中，每种一级好氧菌液的接种量为其液体好氧菌培养基质量的1%;
(3)再取6种二级好氧菌液向6种所述液体好氧菌培养基中接种各自对应的菌种，在30°(:、12(^/1^11、？田直在6.5~7条件下培养7211进行菌种的三级扩大培养，得到6种液体好氧菌剂，其中，每种二级好氧菌液的接种量为其液体好氧菌培养基质量的1%;
第二步，将4种厌氧菌培养制成4种混合的液体厌氧菌剂，
(1)分别配制光合菌、植物乳杆菌、嗜酸乳杆菌以及德氏乳杆菌的液体厌氧菌培养基，再分别向4种液体厌氧菌培养基中接种各自对应的菌种，在30°C条件下静置培养3d，进行菌种的一级扩大培养，得到4种一级厌氧菌液；
(2)再分别取4种一级厌氧菌液向4种所述液体厌氧菌培养基中接种各自对应的菌种，在300C条件下静置培养6d，进行菌种的二级扩大培养，得到4种二级厌氧菌液，其中，每种一级厌氧菌液的接种量为其液体厌氧菌培养基质量的1%;
(3)配制混合发酵液体培养基，按权利要求1的配方比例取所述4种二级厌氧菌液向所述混合发酵液体培养基中接种混匀，在30°C、光照3000IX条件下静置混合培养6d，得到混合的液体厌氧菌剂，其中，4种二级厌氧菌液的总接种量为所述混合发酵液体培养基质量的1%；
第三步，将6种液体好氧菌剂按上述配方比例缓慢注入到所述混合的液体厌氧菌剂中并搅拌均匀，静置，待均质稳定后，得到所述微生物液体菌剂。
[0016]在所述第三步中，同时加入微量元素，微量元素的添加量为所述微生物液体菌剂质量的0.1 %，所述微量元素为B、Zn、Mn三者的混合物。
[0017]所述巨大芽孢杆菌的液体好氧菌培养基配方按照各组分所占的质量百分含量由以下组分组成:蔗糖1%，磷酸氢二钾0.1%，硫酸铵0.2%，可溶性淀粉2%，碳酸钙0.5%，豆油0.5%，无菌水 95.7% ；
所述褐球固氮菌的液体好氧菌培养基配方按照各组分所占的质量百分含量由以下组分组成:蔗糖1%，磷酸氢二钾0.1%，酵母膏0.5%，硫酸镁0.05%，碳酸钙0.2%，钼酸钠0.001%，硼砂0.001%，硫酸亚铁0.001%，氯化钠0.002%，无菌水98.145% ；
所述胶质芽孢杆菌的液体好氧菌培养基配方按照各组分所占的质量百分含量由以下组分组成:蔗糖2%，磷酸氢二钾0.1%，硫酸镁0.04%，酵母膏0.2%，碳酸钙0.2%，硫酸亚铁0.001%,氯化钠 0.04%，无菌水97.419% ；
所述细黄链霉菌的液体好氧菌培养基配方按照各组分所占的质量百分含量由以下组分组成:可溶性淀粉2%，磷酸氢二钾0.05%，硝酸钾0.1%，硫酸镁0.05%，氯化钠0.005%，硫酸亚铁0.001%，无菌水97.794% ；
所述枯草芽孢杆菌的液体好氧菌培养基配方按照各组分所占的质量百分含量由以下组分组成:蔗糖1%，磷酸氢二钾0.05%，酵母膏0.05%，牛肉膏0.02%，蛋白胨0.05%，碳酸钙0.025%，氯化钠 0.02%，硫酸锰 0.001%，无菌水98.784% ；
所述地衣芽孢杆菌的液体好氧菌培养基配方按照各组分所占的质量百分含量由以下组分组成:蔗糖1%，磷酸氢二钾0.05%，酵母膏0.05%，牛肉膏0.02%，蛋白胨0.05%，碳酸钙0.025%，氯化钠 0.02%，硫酸锰 0.001%，无菌水98.784% ；
所述光合菌的液体厌氧菌培养基配方为:每I升无菌水里含乙酸钠3.3g，氯化铵0.6g，硫酸镁0.5g，酵母膏1.5g;
所述植物乳杆菌的液体厌氧菌培养基配方为:在每I升无菌水里含蔗糖20g，酵母膏25g，磷酸氢二钾2g;
所述嗜酸乳杆菌的液体厌氧菌培养基配方为:在每I升无菌水里含乙酸钠5g，柠檬酸铵2g，硫酸镁0.5g，酵母膏6g，牛肉膏12g，磷酸氢二钾2g，蛋白胨1g，硫酸猛0.05g ；
所述德氏乳杆菌的液体厌氧菌培养基配方为:在每I升无菌水里含乳清粉50g，碳酸钙2g，酵母膏I Og;
所述混合发酵液体培养基配方按照各组分所占的质量百分含量由以下组分组成:蔗糖4%，酵母膏0.4%，磷酸氢二钾0.2%，无菌水95.4%。
[0018]实施例1的微生物液体菌剂在水稻种植中的对比实验:
实验地:广西武宣县东沟乡实验田150亩。
[0019]实施情况:实验在田间自然条件下进行，使用稻种为丝香I号，抛秧种植，时间7月中旬，为双季稻的晚稻。实验设A、B、C3个处理小区，每个小区50亩。小区水田相连，土壤基本相同。3个小区基肥均施用广西鹿寨化肥厂生产的鹿化牌复混肥50kg/亩，养分含量为45%(NPK3xl5)。在水稻分蘖期和孕穗期3个小区都做了 2次液体肥喷施，其中A小区喷施实施例1的微生物液体菌剂，每次10lm(这是什么单位)稀释150倍喷施I亩;B小区喷施市售微生物液体菌剂，每次100 Im稀释150倍喷施I亩;C小区喷施5%磷酸氢二钾溶液15kg。
[0020]实验结果:收割时B、C小区和周围的稻田一样稻穗和稻杆都变黄了，而A小区稻穗金黄稻杆还是绿色的，出现了绿杆成熟现象。每亩干谷产量A小区1180斤，B小区960斤，C小区920斤j小区比BC小区分别增产22.9%和28.2%。
[0021 ]实施例2: —种好氧菌与厌氧菌复合的微生物液体菌剂及其制备方法
所述微生物液体菌剂包括6种用液体培养基培养的液体好氧菌剂与4种用液体培养基培养的液体厌氧菌剂，所述液体好氧菌剂与液体厌氧菌剂的质量比为I: I;所述液体好氧菌剂由以下质量份的菌剂组成:
液体巨大芽孢杆菌剂3质量份，
液体褐球固氮菌剂3质量份，
液体胶质芽孢杆菌剂3质量份，
液体细黄链霉菌剂I质量份，
液体枯草芽孢杆菌剂2质量份，
液体地衣芽孢杆菌剂2质量份；
所述液体厌氧菌剂由以下质量份的菌剂组成:
液体光合菌剂2质量份，
液体植物乳菌剂2质量份，
液体嗜酸乳杆菌剂5质量份，
液体德氏乳杆菌剂5质量份；
其中，每一种液体好氧菌剂中的好养菌含量大于等于2亿个/毫升，每一种液体厌氧菌剂中的厌氧菌含量大于等于2亿个/毫升。
[0022]所述微生物液体菌剂还包括微量元素，微量元素的添加量为所述微生物液体菌剂质量的0.1 %，所述微量元素选自B、Cu、Co三者的混合物。
[0023]制备方法包括以下步骤:
第一步，将6种好氧菌分别培养制成6种液体好氧菌剂，
(1)分别配制巨大芽孢杆菌、褐球固氮菌、胶质芽孢杆菌、细黄链霉菌、枯草芽孢杆菌以及地衣芽孢杆菌的液体好氧菌培养基，再分别向6种液体好氧菌培养基中接种各自对应的菌种，在370C，140r/min，pH值在6.5-7.5条件下培养48h，进行菌种的一级扩大培养，得到6种一级好氧菌液；
(2)再分别取6种一级好氧菌液向6种所述液体好氧菌培养基中接种各自对应的菌种，在37°C、140r/min条件下培养48h进行菌种的二级扩大培养，得到6种二级好氧菌液，其中，每种一级好氧菌液的接种量为其液体好氧菌培养基质量的1.1%;
(3)再取6种二级好氧菌液向6种所述液体好氧菌培养基中接种各自对应的菌种，在30°(:、12(^/1^11、？田直在6.5~7条件下培养7211进行菌种的三级扩大培养，得到6种液体好氧菌剂，其中，每种二级好氧菌液的接种量为其液体好氧菌培养基质量的1.5%;
第二步，将4种厌氧菌培养制成4种混合的液体厌氧菌剂，
(1)分别配制光合菌、植物乳杆菌、嗜酸乳杆菌以及德氏乳杆菌的液体厌氧菌培养基，再分别向4种液体厌氧菌培养基中接种各自对应的菌种，在37°C条件下静置培养3d，进行菌种的一级扩大培养，得到4种一级厌氧菌液；
(2)再分别取4种一级厌氧菌液向4种所述液体厌氧菌培养基中接种各自对应的菌种，在370C条件下静置培养6d，进行菌种的二级扩大培养，得到4种二级厌氧菌液，其中，每种一级厌氧菌液的接种量为其液体厌氧菌培养基质量的1.5%;
(3)配制混合发酵液体培养基，按上述配方比例取所述4种二级厌氧菌液向所述混合发酵液体培养基中接种混匀，在37°C、光照3200Ix条件下静置混合培养6d，得到混合的液体厌氧菌剂，其中，4种二级厌氧菌液的总接种量为所述混合发酵液体培养基质量的1.5%;
第三步，将6种液体好氧菌剂按权利要求1的配方比例缓慢注入到所述混合的液体厌氧菌剂中并搅拌均匀，静置，待均质稳定后，得到所述微生物液体菌剂。
[0024]在所述第三步中，同时加入微量元素，微量元素的添加量为所述微生物液体菌剂质量的0.2%，所述微量元素为B、Cu、Co三者的混合物。
[0025]所述巨大芽孢杆菌的液体好氧菌培养基配方按照各组分所占的质量百分含量由以下组分组成:蔗糖1%，磷酸氢二钾0.1%，硫酸铵0.2%，可溶性淀粉2%，碳酸钙0.5%，豆油0.5%，无菌水 95.7% ；
所述褐球固氮菌的液体好氧菌培养基配方按照各组分所占的质量百分含量由以下组分组成:蔗糖1%，磷酸氢二钾0.1%，酵母膏0.5%，硫酸镁0.05%，碳酸钙0.2%，钼酸钠0.001%，硼砂0.001%，硫酸亚铁0.001%，氯化钠0.002%，无菌水98.145% ；
所述胶质芽孢杆菌的液体好氧菌培养基配方按照各组分所占的质量百分含量由以下组分组成:蔗糖2%，磷酸氢二钾0.1%，硫酸镁0.04%，酵母膏0.2%，碳酸钙0.2%，硫酸亚铁0.001%,氯化钠 0.04%，无菌水97.419% ；
所述细黄链霉菌的液体好氧菌培养基配方按照各组分所占的质量百分含量由以下组分组成:可溶性淀粉2%，磷酸氢二钾0.05%，硝酸钾0.1%，硫酸镁0.05%，氯化钠0.005%，硫酸亚铁0.001%，无菌水97.794% ；
所述枯草芽孢杆菌的液体好氧菌培养基配方按照各组分所占的质量百分含量由以下组分组成:蔗糖1%，磷酸氢二钾0.05%，酵母膏0.05%，牛肉膏0.02%，蛋白胨0.05%，碳酸钙
0.025%，氯化钠 0.02%，硫酸锰 0.001%，无菌水98.784% ；
所述地衣芽孢杆菌的液体好氧菌培养基配方按照各组分所占的质量百分含量由以下组分组成:蔗糖1%，磷酸氢二钾0.05%，酵母膏0.05%，牛肉膏0.02%，蛋白胨0.05%，碳酸钙0.025%，氯化钠 0.02%，硫酸锰 0.001%，无菌水98.784% ；
所述光合菌的液体厌氧菌培养基配方为:每I升无菌水里含乙酸钠3.3g，氯化铵0.6g，硫酸镁0.5g，酵母膏1.5g;
所述植物乳杆菌的液体厌氧菌培养基配方为:在每I升无菌水里含蔗糖20g，酵母膏25g，磷酸氢二钾2g;
所述嗜酸乳杆菌的液体厌氧菌培养基配方为:在每I升无菌水里含乙酸钠5g，柠檬酸铵2g，硫酸镁0.5g，酵母膏6g，牛肉膏12g，磷酸氢二钾2g，蛋白胨1g，硫酸猛0.05g ；
所述德氏乳杆菌的液体厌氧菌培养基配方为:在每I升无菌水里含乳清粉50g，碳酸钙2g，酵母膏I Og;
所述混合发酵液体培养基配方按照各组分所占的质量百分含量由以下组分组成:蔗糖4%，酵母膏0.4%，磷酸氢二钾0.2%，无菌水95.4%。
[0026]实施例2的微生物液体菌剂在黄桃种植中的对比实验:
实验时间及地点:2014年5月?10月，苏州市高新区镇湖金丝黄桃专业合作社实施情况:随机选择10年以上树龄的老桃树10棵作为A小区。其它150亩桃树作为B小区。
[0027]施肥情况:A、B区均在当年2、3月份施用基肥1kg/每株(总养分3x15复合肥)。5月份A小区每棵桃树用实施例2的微生物液体菌剂100ml，用100倍清水稀释后灌根及枝叶喷施。B小区施用5%磷酸氢二钾溶液喷施及灌根。
[0028]实验结果:A小区平均每棵结果410个，每个桃都硕大莹润，商品桃装箱率达969LB小区平均每棵结果322个，桃的个头比A小区明显偏小，商品桃装箱率不足80%。
[0029]上述实施例只为说明本发明的技术构思及特点，其目的在于让熟悉此项技术的人士能够了解本发明的内容并据以实施，并不能以此限制本发明的保护范围。凡根据本发明精神实质所作的等效变化或修饰，都应涵盖在本发明的保护范围之内。
【主权项】
1.一种好氧菌与厌氧菌复合的微生物液体菌剂，其特征在于:所述微生物液体菌剂包括6种用液体培养基培养的液体好氧菌剂与4种用液体培养基培养的液体厌氧菌剂，所述液体好氧菌剂与液体厌氧菌剂的质量比为3: 7-7: 3;所述液体好氧菌剂由以下质量份的菌剂组成: 液体巨大芽孢杆菌剂I?3质量份， 液体褐球固氮菌剂I?3质量份， 液体胶质芽孢杆菌剂I?3质量份， 液体细黄链霉菌剂I质量份， 液体枯草芽孢杆菌剂I?2质量份， 液体地衣芽孢杆菌剂I?2质量份； 所述液体厌氧菌剂由以下质量份的菌剂组成: 液体光合菌剂I?2质量份， 液体植物乳菌剂I?2质量份， 液体嗜酸乳杆菌剂I?5质量份， 液体德氏乳杆菌剂I?5质量份； 其中，每一种液体好氧菌剂中的好养菌含量大于等于2亿个/毫升，每一种液体厌氧菌剂中的厌氧菌含量大于等于2亿个/毫升。2.根据权利要求1所述的一种好氧菌与厌氧菌复合的微生物液体菌剂，其特征在于:所述微生物液体菌剂还包括微量元素，微量元素的添加量为所述微生物液体菌剂质量的0.1?0.2%，所述微量元素选自B、Zn、Mn、Cu、Co中任意一种或至少两种以上的混合物。3.一种根据权利要求1所述的好氧菌与厌氧菌复合的微生物液体菌剂的制备方法，其特征在于:所述制备方法包括以下步骤: 第一步，将6种好氧菌分别培养制成6种液体好氧菌剂， (1)分别配制巨大芽孢杆菌、褐球固氮菌、胶质芽孢杆菌、细黄链霉菌、枯草芽孢杆菌以及地衣芽孢杆菌的液体好氧菌培养基，再分别向6种液体好氧菌培养基中接种各自对应的菌种，在30~37°(:，120~14(^/1^11，？!1值在6.5~7.5条件下进行菌种的一级扩大培养，得到6种一级好氧菌液； (2)再分别取6种一级好氧菌液向6种所述液体好氧菌培养基中接种各自对应的菌种，在30?37°C、120?140r/min条件下进行菌种的二级扩大培养，得到6种二级好氧菌液，其中，每种一级好氧菌液的接种量为其液体好氧菌培养基质量的0.9-1.1%; (3)再取6种二级好氧菌液向6种所述液体好氧菌培养基中接种各自对应的菌种，在30?37°C、120?140r/min条件下进行菌种的三级扩大培养，得到6种液体好氧菌剂，其中，每种二级好氧菌液的接种量为其液体好氧菌培养基质量的I?1.5%; 第二步，将4种厌氧菌培养制成4种混合的液体厌氧菌剂， (1)分别配制光合菌、植物乳杆菌、嗜酸乳杆菌以及德氏乳杆菌的液体厌氧菌培养基，再分别向4种液体厌氧菌培养基中接种各自对应的菌种，在30?37 °C条件下静置，进行菌种的一级扩大培养，得到4种一级厌氧菌液； (2)再分别取4种一级厌氧菌液向4种所述液体厌氧菌培养基中接种各自对应的菌种，在30?37°C条件下静置，进行菌种的二级扩大培养，得到4种二级厌氧菌液，其中，每种一级厌氧菌液的接种量为其液体厌氧菌培养基质量的I?1.5%; (3)配制混合发酵液体培养基，按权利要求1的配方比例取所述4种二级厌氧菌液向所述混合发酵液体培养基中接种混匀，在30?37 °C、光照2800?3200Ix条件下静置混合培养，得到混合的液体厌氧菌剂，其中，4种二级厌氧菌液的总接种量为所述混合发酵液体培养基质量的I?1.5%; 第三步，将6种液体好氧菌剂按权利要求1的配方比例缓慢注入到所述混合的液体厌氧菌剂中并搅拌均匀，静置，待均质稳定后，得到所述微生物液体菌剂。4.根据权利要求3所述的好氧菌与厌氧菌复合的微生物液体菌剂的制备方法，其特征在于:在所述第三步中，同时加入微量元素，微量元素的添加量为所述微生物液体菌剂质量的0.1?0.2%，所述微量元素选自B、Zn、Mn、Cu、Co中任意一种或至少两种以上的混合物。5.根据权利要求3所述的好氧菌与厌氧菌复合的微生物液体菌剂的制备方法，其特征在于:所述巨大芽孢杆菌的液体好氧菌培养基配方按照各组分所占的质量百分含量由以下组分组成:蔗糖1%，磷酸氢二钾0.1%，硫酸铵0.2%，可溶性淀粉2%，碳酸钙0.5%，豆油0.5%，无菌水9 5.7%; 所述褐球固氮菌的液体好氧菌培养基配方按照各组分所占的质量百分含量由以下组分组成:蔗糖1%，磷酸氢二钾0.1%，酵母膏0.5%，硫酸镁0.05%，碳酸钙0.2%，钼酸钠0.001%，硼砂0.001%，硫酸亚铁0.001%，氯化钠0.002%，无菌水98.145% ； 所述胶质芽孢杆菌的液体好氧菌培养基配方按照各组分所占的质量百分含量由以下组分组成:蔗糖2%，磷酸氢二钾0.1%，硫酸镁0.04%，酵母膏0.2%，碳酸钙0.2%，硫酸亚铁.0.001%,氯化钠 0.04%，无菌水97.419% ； 所述细黄链霉菌的液体好氧菌培养基配方按照各组分所占的质量百分含量由以下组分组成:可溶性淀粉2%，磷酸氢二钾0.05%，硝酸钾0.1%，硫酸镁0.05%，氯化钠0.005%，硫酸亚铁0.001%，无菌水97.794% ； 所述枯草芽孢杆菌的液体好氧菌培养基配方按照各组分所占的质量百分含量由以下组分组成:蔗糖1%，磷酸氢二钾0.05%，酵母膏0.05%，牛肉膏0.02%，蛋白胨0.05%，碳酸钙.0.025%，氯化钠 0.02%，硫酸锰 0.001%，无菌水98.784% ； 所述地衣芽孢杆菌的液体好氧菌培养基配方按照各组分所占的质量百分含量由以下组分组成:蔗糖1%，磷酸氢二钾0.05%，酵母膏0.05%，牛肉膏0.02%，蛋白胨0.05%，碳酸钙.0.025%，氯化钠 0.02%，硫酸锰 0.001%，无菌水98.784% ； 所述光合菌的液体厌氧菌培养基配方为:每I升无菌水里含乙酸钠3.3g，氯化铵0.6g，硫酸镁0.5g，酵母膏1.5g; 所述植物乳杆菌的液体厌氧菌培养基配方为:在每I升无菌水里含蔗糖20g，酵母膏.25g，磷酸氢二钾2g; 所述嗜酸乳杆菌的液体厌氧菌培养基配方为:在每I升无菌水里含乙酸钠5g，柠檬酸铵.2g，硫酸镁0.5g，酵母膏6g，牛肉膏12g，磷酸氢二钾2g，蛋白胨1g，硫酸猛0.05g ； 所述德氏乳杆菌的液体厌氧菌培养基配方为:在每I升无菌水里含乳清粉50g，碳酸钙.2g，酵母膏I Og; 所述混合发酵液体培养基配方按照各组分所占的质量百分含量由以下组分组成:蔗糖.4%，酵母膏0.4%，磷酸氢二钾0.2%，无菌水95.4%。
【文档编号】C12R1/11GK106047771SQ201610640006
【公开日】2016年10月26日
【申请日】2016年8月8日 公开号201610640006.4, CN 106047771 A, CN 106047771A, CN 201610640006, CN-A-106047771, CN106047771 A, CN106047771A, CN201610640006, CN201610640006.4
【发明人】刘 文, 韩莉华, 刘海龙
【申请人】江苏春语生物科技有限公司