用于治疗或预防高尿酸血症或痛风的化合物的制作方法
【专利摘要】本发明公开了用于治疗或预防高尿酸血症或痛风的化合物，其为式(I)或式(II)所述的化合物或其药学上可接受的盐。本发明的化合物或其药学上可接受的盐可应用于促尿酸排泄以治疗或预防高尿酸血症或痛风。
【专利说明】
用于治疗或预防高尿酸血症或痛风的化合物
技术领域
[0001] 本发明属于药物化学领域，具体设及用于治疗或预防高尿酸血症或痛风的化合物 及其组合物和应用。
【背景技术】
[0002] 痛风是由于机体长期嚷岭代谢素乱和(或)尿酸排泄减少，造成尿酸盐结晶在机体 组织内沉积而引起的代谢性疾病，其最重要的生化基础是高尿酸血症。痛风患者易患急性 尿酸结晶关节炎、痛风石性慢性关节炎、尿酸盐肾病和尿酸性尿路结石等高尿酸血症相关 疾病。目前我国痛风发病率逐年增加，到2008年我国痛风患病率在一般人群中达1.1 % (Robert G,Beth Noe.Intra-Osseous Gout in a Diabetic Patient[J].The Journal of Foot and Ankle Surgery，2009,48(l):70-73)。发达国家发病率较高，其中美国大约有3-5 百万人罹患痛风，且男性的发作率通常是女性的6-9倍。（Terkeltaub，R.A.Gout[J].The New England Journal of Medicine.2003,349:1647-1655)
[0003] 引发高尿酸血症的一个十分重要的原因是尿酸排泄减少。尿酸的排泄过程较为复 杂，须经过肾小球滤过、肾近曲小管重吸收、分泌及分泌后再吸收四个过程。肾近曲小管重 吸收增加或分泌障碍将引起尿酸滞留，导致血尿酸升高。因此，肾近曲小管对机体内血尿酸 浓度的平衡调节起着非常重要的作用。肾近曲小管细胞的刷状缘侧膜和基底外侧膜上存在 着多种尿酸转运相关蛋白，人尿酸阴离子转运蛋白Uhuman urate anion transporter 1， hURATl)在肾近曲小管细胞刷状缘上表达，为有机阴离子转运蛋白家族(OATS)成员。hURATl 负责尿酸的重吸收，通过有机阴离子交换，将尿酸盐特异性的由肾管腔转运入细胞，从而起 到了调控血尿酸浓度的作用。因此，WJRATl是痛风与高尿酸血症药物治疗的重要祀点。
[0004] WJRATl基因首先是由化omoto从人肾脏克隆出来的，由化C22A12基因编码，位于染 色体llql3,其CDNA全长2642bp，编码区长1659bp，编码含有555个氨基酸的蛋白质。 化C22A12基因存在多种突变，易引起尿酸代谢异常，一项Meta分析表明化C22A12基因对血 尿酸水平有0.13%的变量贡献。（So A,Thorens B.Uric acid hansport and disease
[J] .J.Clin. Invest. ,2010,120(6): 1791-1799)另据研究表明，SLC22A12基因单核巧酸的 多态性rs893006位点GG、GT基因型与男性患者高血尿酸水平密切相关，提示该序列的多态 性可能是高尿酸血症的基因风险因素。（王琪.男性高尿酸血症与URATl基因多态性的关系 [J].检验医学，2012,27(1) :30-33)
[0005] Makoto化soyamada等发现了hURATl的鼠源同系物小鼠肾脏特异性转运蛋白 (Mouse Renal-specific transpo;rte;r，RST)，该蛋白固定在小鼠肾小管上皮细胞刷状缘 侦U，其cDNA和氨基酸水平上均与WJRATl有较高的同源性化osoyamada MJchida K，Enomoto A，et al.Function and Localizationof Urate Transporter Iin Mouse Kidney[J] .Am. Soc.化P虹01.2004,15(2) :261-8. KRST的发现，为WURATl为祀点的高尿酸血症治疗 药物的研究，提供了取材方便的体内外实验模型来源。
[0006] 在痛风与高尿酸血症的治疗中，促尿酸排泄药占有十分重要的地位。此类药物作 用机理为抑制尿酸在近曲小管的重吸收，增加尿酸的排泄而降低血尿酸浓度，促进尿酸盐 溶解。主要包括苯漠马隆（Benzbromarone)、丙横舒（Probenecid)、横[I比酬 (Sulfinpyrazone)等。
[0007]苯漠马隆为一种苯并巧喃衍生物，化学名称为3,5-二漠-4-径苯基-2-乙基-3-苯 并巧喃基-甲酬，可用于治疗痛风。
[0008；
[0009] 举俱与隆是t^UKATl刃视点治疗高尿酸血症的典型促尿酸排泄药物，它不仅能抑 审IJURAT1对于尿酸盐的转运，还能够降低URATl的基因表达。据国家药品不良反应监测数据 库分析显示，苯漠马隆的严重不良反应中肝损害问题比较突出，肝功能异常及谷草转氨酶、 谷丙转氨酶及碱性憐酸酶升高。研究发现，苯漠马隆经肝脏CYP2C9氧化代谢成6-径基苯漠 马隆，再进一步被P450S酶系代谢成两种邻苯二酿类产物。此类物质化学性质活泼，可通过 与蛋白质的半脫氨酸残基上的琉基共辆加成，使蛋白质变性失活，运是导致其肝毒性的直 接原因 （Matthew G.McDonald,Allan E.Rettie. Sequential Metabolism and Bioactivation of the Hepatotoxin Benzbromarone:Formation of Glutathione Adducts from a Catechol Intermediate[J].Chemical Research in Toxicology.2007, 20(12): 1833-1842)。苯漠马隆目前已发现的多种不良反应还包括:腹泻、胃部不适、恶屯、等 消化系统症状;斑疹、潮红、痊痒等皮肤过敏症。偶然会呈现肠胃不适感，极少呈现等麻疹 (风疹）。在个别环境下还会呈现眼结膜发炎(结膜炎），短时候的阳瘦，反常性的部分皮肤湿 疹(皮疹），头疼和尿意频增感。据报道，服用苯漠马隆也有痊痒感，颜面发红，红斑，光过敏 症，浮肿，屯、窝部不适感等不良反应的产生。苯漠马隆因其毒副作用，尤其是肝脏毒性已被 欧洲一些国家限制使用，但国内由于其突出的疗效，仍作为主要的促尿酸排泄药物用于临 床。
【发明内容】
[0010] 本发明的目的是提供新的能抑制URATl转运尿酸的(4-径基-3-腊基苯基)-3-苯并 巧喃基-甲酬或(4-径基-3-S氣甲基苯基)-3-苯并巧喃基-甲酬类衍生物，它们是WURATl 为祀点的用于治疗或预防高尿酸血症或痛风的新型高效促尿酸排泄药物。通过对(4-径基- 3-腊基苯基)-3-苯并巧喃基-甲酬或(4-径基-3-S氣甲基苯基)-3-苯并巧喃基-甲酬类化 合物进行合理的结构修饰，改变其理化性质，影响该类化合物在哺乳动物(包括人)体内的 代谢途径，在保持或增强其促尿酸排泄活性的同时，降低它们的毒副作用，提高其在高尿酸 血症或痛风等相关疾病的临床治疗或预防方面的应用安全性。
[0011] 本发明的目的可W通过W下措施达到：
[0012] 本发明提供了式(I)或式(II)所述的化合物或其药学上可接受的盐，
[0013]
[0014] 其中，
[0015] Ri选自氨、気、面素、径基、腊基、取代或非取代的Ci-4烷基、取代或非取代的Ci-4烧 氧基中的一种，其取代基选自氣、径基、Cl-4烷氧基或氨基中的一种或几种；
[00W R2选自氨、気、面素、Cl-3烷基、面代Cl-3烷基、腊基中的一种；
[0017] R3 选自 Ci-4 烷基；
[001引 n或m分别独立地为1或2;
[0019] R4选自氨、気、面素、径基、腊基、取代或非取代的Ci-4烷基、取代或非取代的Ci-4烧 氧基中的一种，其取代基选自氣、径基、Cl-4烷氧基或氨基中的一种或几种；
[0020 ] R5选自氨、気、面素、Ci-3烷基、面代Ci-3烷基、腊基中的一种；
[002U 护选自Ci-4烷基；
[0022] X或y分别独立地为1或2。
[0023] 在一种优选方案中，r1选自氨、気、面素、径基、腊基、Ci-3烷基、取代的Ci-3烷基、Ci-3 烷氧基、氣代Cl-3烷氧基中的一种，其取代基选自氣、径基、Cl-3烷氧基或氨基中的一种或几 种。
[0024] 在另一种优选方案中，Ri选自氨、気、氣、氯、径基、腊基、甲基、乙基、氣代甲基、氣 代乙基、甲氧基甲基、乙氧基甲基、甲氧基乙基、乙氧基乙基、径甲基、径乙基、氨基甲基、氨 基乙基、甲氧基、乙氧基、氣代甲氧基、氣代乙氧基中的一种。
[0025] 在一种方案中，当Ri为一个或两个基团时，Ri优选在苯并巧喃的5位或/和6位。
[0026] 在一种优选方案中，R2选自氨、気、氣、氯、漠、舰、甲基、乙基、氣代甲基、氣代乙基、 腊基中的一种。
[0027] 在一种优选方案中，R3选自Ci-3烷基，更优选为乙基。
[00%]在一种优选方案中，n或m分别独立地为1或2,更优选的，n或m分别为1。
[0029] 在一种优选方案中，R4选自氨、気、面素、径基、腊基、Ci-3烷基、取代的Ci-3烷基、Ci-3 烷氧基、氣代Cl-3烷氧基中的一种，其取代基选自氣、径基、Cl-3烷氧基或氨基中的一种或几 种。
[0030] 在另一种优选方案中，R4选自氨、気、氣、氯、径基、腊基、甲基、乙基、氣代甲基、氣 代乙基、甲氧基甲基、乙氧基甲基、甲氧基乙基、乙氧基乙基、径甲基、径乙基、氨基甲基、氨 基乙基、甲氧基、乙氧基、氣代甲氧基、氣代乙氧基中的一种。
[0031] 在一种优选方案中，R5选自氨、気、氣、氯、漠、舰、甲基、乙基、氣代甲基、氣代乙基 中的一种。
[0032] 在一种优选方案中，R6选自Ci-3烷基，更优选为乙基。
[0033] 在一种优选方案中，X或y分别独立地为1或2,更优选的，X或y分别为1。
[0034] -些具体的式(I)或式(II)化合物，例如：
[00；
[0036]本发明的式(I)化合物可通过如下方法制得：
[0037]
[0038] 取代水杨醒跟氯丙酬在一定条件下反应生成取代的苯并巧喃，然后跟取代的苯甲 酷氯反应，所得化合物再依次脱去甲基，舰化和腊化反应得到目标化合物。
[0039] 苯并巧喃2位其它烷基取代基类似化合物可通过其它方法制备。具体的制备方法 参见实施例。
[0040] 本发明的式(II)化合物可通过如下方法制得：
[0041]
[0042] 通过化合物E的合成方法可制备化合物G，按上述方法得到目标化合物。
[0043] 除非另外说明，在说明书和权利要求中使用的W下术语具有下面讨论的含义：
[0044] "烷基"用于表示饱和控基，Ci-4烷基是指含有1~4个碳原子的饱和控基，其包括甲 基、乙基、正丙基、异丙基、正下基、异下基和新下基。本发明中的烷基优选为Cl-4烷基，进一 步优选Ci-3烷基。取代烷基是指具有一个或大于一个取代基的烷基，当取代基的数目为2个 W上(包含2个)时，各取代基可W相同，也可W不同。取代的Ci-4烷基是指具有一个或多个(2 个或2个W上)取代基的含有1~4个碳原子的饱和控基;例如"氣代甲基"是指具有一个、两 个或=个氣取代基的甲基，"氣代乙基"是指具有1~5个氣取代基的乙基。
[0045] "面代Ci-4烷基"是指具有一个或多个（即2个或2个W上）面素取代基的含有1~4个 碳原子的饱和控基，其中各面素取代基可W相同，也可W不同。"氣代Cl-3烷氧基"是指具有 一个或多个(即2个或2个W上)氣取代基的含有1~3个碳原子的饱和控基。本发明中的面代 Cl-4烷基包括但不限于面代甲基、面代乙基、面代正丙基、面代异丙基、面代正下基、面代异 下基、面代新下基等，更具体的基团包括但不限于=氣甲基、二氣甲基、一氣甲基、=氯甲 基、二氯甲基、一氯甲基、四氣乙基、=氣乙基、二氣乙基、一氣乙基、=氯乙基、=氯乙基、二 氯乙基、一氯乙基等。
[0046] "面素'包括氣(F)、氯(Cl)、漠他)和舰(I)。
[0047] "烷氧基"是指烷基"基团，其碳原子数一般为1~10个。Ci-4烷氧基是指该烧氧 基中含有1~4个碳原子。本发明中的烷氧基优选为Cl-4烷氧基，进一步优选Cl-3烷氧基。取代 烷氧基是指具有一个或大于一个取代基的烷氧基，当取代基的数目为2个W上（包含2个） 时，各取代基可W相同，也可W不同。取代的Cl-4烷氧基是指具有一个或多个（即2个或2个W 上）取代基的含有1~4个碳原子的烷氧基。本发明中的烷氧基包括但不限于甲氧基、乙氧 基、正丙氧基、异丙氧基、正下氧基、异下氧基和新下氧基等。
[004引"径堂'是指"-OH"基团。
[0049]"腊基"是指"-CN"基团。
[0050]"氨堂'是指"-N出"基团。
[0051] 。気"尉旨。-护基团。
[0052] "药学上可接受的盐"表示保留母体化合物的生物有效性和性质的那些盐。运类盐 包括：
[0053] (1)与酸成盐，通过母体化合物的游离碱与无机酸或有机酸的反应而得，无机酸例 如(但不限于)盐酸、氨漠酸、硝酸、憐酸、偏憐酸、硫酸、亚硫酸和高氯酸等，有机酸例如(但 不限于）乙酸、丙酸、丙締酸、草酸、（D)或化)苹果酸、富马酸、马来酸、径基苯甲酸、丫-径基 下酸、甲氧基苯甲酸、邻苯二甲酸、甲横酸、乙横酸、糞-1-横酸、糞-2-横酸、对甲苯横酸、水 杨酸、酒石酸、巧樣酸、乳酸、扁桃酸、班巧酸或丙二酸等，优选盐酸或化)苹果酸
[0054] (2)存在于母体化合物中的酸性质子被金属离子代替或者与有机碱配位化合所生 成的盐，金属离子例如碱金属离子、碱±金属离子或侣离子，有机碱例如乙醇胺、二乙醇胺、 S乙醇胺、氨下S醇、N-甲基葡糖胺等。
[0055] 本发明的式(I)或式(II)化合物或其药学上可接受的盐可应用于制备促尿酸排泄 药物方面，特别是应用于治疗或预防高尿酸血症或痛风药物的制备。
[0056] 本发明还包括一种药物组合物，其W本发明所指出的化合物为活性成分或主要活 性成分，辅W药学上可接受的辅料。该药物组合物中的其他活性成分可W为具有促尿酸排 泄的药物化合物，也可W为具有其他治疗效果的药物化合物。本药物组合物可W依据现有 方法制成多种制剂，例如口服制剂、液体制剂等，更具体的制剂包括但不限于散剂、颗粒剂、 片剂、胶囊剂、滴丸剂、膜剂等。
[0057] 本发明通过对(4-径基-3-腊基苯基)-3-苯并巧喃基-甲酬或(4-径基-3-=氣甲基 苯基)-3-苯并巧喃基-甲酬类衍生物进行合理的结构修饰，改变其理化性质，影响该类化合 物在哺乳动物(包括人)体内的代谢途径，在保持或增强其促尿酸排泄活性的同时，降低它 们的毒副作用，提高其在高尿酸血症或痛风等相关疾病的临床治疗或预防方面的应用安全 性。
【具体实施方式】
[0058] 给出下列制备实施例和生物学实施例，使本领域技术人员能够更清楚地理解和实 施本发明。它们不应被解释为限制本发明的范围，仅仅是其例证和代表。
[0059] 制备实施例
[0060] 实施例1:5-(2-乙基苯并巧喃-3-幾基)-2-径基-3-舰苯甲腊(5)和5-(2-乙基苯并 巧喃-3-幾基)-2-径基间苯二甲腊(6)的合成
[00
[0062] 步骤A:在室溫下向氨氧化钟（6.13g，109mmo 1)的乙醇（SOmL)溶液中加入水杨醒 (12.2g，IOOmmol )，升溫到回流并继续揽拌2小时。然后在该溫度下滴加氯丙酬（10 . Og， IOSmmol)，滴加完毕，保溫继续揽拌2小时。冷却到室溫，过滤除去不溶物，收集滤液。减压蒸 除溶剂，然后向剩余物中加入乙二醇(40mL)和85%水合阱(6.7g，178mmo 1)，回流揽拌10分 钟。冷却到80~100°C，分批加入氨氧化钟（13.Og，232mmol)，有大量气体产生，然后缓慢升 溫到回流，直到没有气体放出为止。冷却到室溫，加入水(400mL)，用甲基叔下基酸（120血X 3)萃取，无水硫酸钢干燥。减压蒸除溶剂，产物经柱层析纯化(200~300目硅胶，石油酸洗 脱），得2-乙基苯并巧喃（1) (13. Og)。收率为78.7 %。
[0063] 步骤B:在冰水浴下将4-甲氧基苯甲酯氯(2.3g，13.5mmol)加入到化合物1 (2. Og， 13.6mmo 1)的氯仿(50血)溶液中，然后向该混合物中滴加四氯化锡(3.56g，13.6mmo 1)，滴加 完毕，自然升溫到室溫揽拌过夜。将反应物倒入适量冰水中，用二氯甲烧(40mLX2)萃取，无 水硫酸钢干燥。减压蒸除溶剂，产物经柱层析纯化(200~300目硅胶，乙酸乙醋:石油酸=1: 30~1:15洗脱），得（2-乙基苯并巧喃-3-基）（4-甲氧基苯基）甲酬（2)(3. Og)。收率为 78.7%。
[0064] 步骤C:在冰水浴下将乙硫醇（SmL)滴加到氨化钢（640mg，16 . Ommol)的无水THF (15mL)悬浊液中，揽拌5分钟，有大量固体析出。减压蒸除溶剂，然后向剩余物中加入DMF (20mL)，得反应液A。再将化合物2(3.Og, 10.7mmol)的DMF(20mL)溶液滴加到反应液A中，然 后在110°C揽拌3小时。冷却到室溫，加入水（120mL)，用乙酸乙醋(60mLX3)萃取，合并的有 机相用饱和食盐水（30mL X 2)洗涂，无水硫酸钢干燥。减压蒸除溶剂，产物经柱层析纯化 (200~300目硅胶，乙酸乙醋巧油酸=1:50~1:6洗脱），得(2-乙基苯并巧喃-3-基）（4-? 基苯基）甲酬(3)(2.2g)。收率为77.2%。
[0065] 步骤D :将化合物3 (1. Og，3.76mmol)溶解于甲醇（30mL)，加入硝酸银（1.4g， 8.28mmol)和舰(2. Ig，8.27mmol)，所得混合物在室溫下揽拌3小时。减压蒸除溶剂，向产物 中加入乙酸乙醋(60mL )，过滤除去不溶物，用水（1 OmL X 2)洗涂，无水硫酸钢干燥。减压蒸除 溶剂，产物经柱层析纯化(200~300目硅胶，乙酸乙醋:石油酸=1:20~1:10洗脱），得(2-乙 基苯并巧喃-3-基）（4-径基-3，5-二舰苯基）甲酬(4) (900mg)。收率为46.2 %。
[0066] Ih NMR(DMS0-d6,400MHz)S8.12(s，2H)，7.66(d，J = 8.4Hz，lH)，7.45-7.43(m，lH)， 7.38-7.：M(m，lH)，7.31-7.27(m，lH)，2.79(q，J = 7.Wz，2H)，1.26(t，J = 7.6Hz，3H)〇MS 化I，m/z):517.0[M-扣-。
[0067] 步骤E:将含有化合物4(700mg，1.35mmol)、氯化亚铜（360mg，4.02mmol)和DMF (5mL)的混合物在100°C揽拌5小时。冷却到室溫，加入水（30mL)，用乙酸乙醋（20mLX 3)萃 取，合并的有机相用饱和食盐水（IOmL)洗涂，无水硫酸钢干燥。减压蒸除溶剂，产物经柱层 析纯化(200~300目硅胶，乙酸乙醋：石油酸= 1:1~30:1洗脱），得5-(2-乙基苯并巧喃-3- 幾基)-2-径基-3-舰苯甲腊(5)和5-(2-乙基苯并巧喃-3-幾基)-2-径基间苯二甲腊(6)。
[006引 化合物5:4 NMR(DMS0-d6,400MHz)S8.21(s，lH)，7.74(d，J = 2.4Hz，lH)，7.62(d，J =8. OHz，1H) ,7.43-7.41 (m，lH) ,7.35-7.25(m，2H)，2.81 (q，J = 7.細Z，2H) ,1.25( t，J = 7.細z，3H)eMS化I，m/z):416.1[M-H]-。
[0069] 化合物6:1h Mffi(DMS0-d6,400MHz)S7.86(s，2H)，7.62(d，J = 8.0Hz，lH)，7.42- 7.39(m，lH)，7.35-7.25(m，2H)，2.83(q，J = 7.細z，2H)，1.25(t，J = 7.6Hz，3H)。MS(EI，m/ z):315.2[M-H]-。
[0070] 实施例2:5-(2-乙基苯并巧喃-3-幾基)-2-径基苯甲腊(7)
[0071：
[0072] 将化合物5 (SOmg，0.192mmo 1)溶解在乙酸乙醋（15mL)中，加入5 %钮碳（20mg)，所 得混合物在常溫常压下氨化揽拌反应过夜。过滤除去钮碳，减压蒸除溶剂，产物经柱层析纯 化（200~300目硅胶，乙酸乙醋：石油酸=1:10~1: 5洗脱），得5-(2-乙基苯并巧喃-3-幾 基)-2-径基苯甲腊(7)。
[007；3] Ih NMR(DMS0-d6,400MHz)Sl2.16(s，lH)，8.06(d，J = 2.0Hz，lH)，7.94(dd，J = 2.0， 8.4Hz，lH)，7.66(d，J = 8.0Hz，1H) ,7.40-7. ：34(m，2H) ,7.30-7.26 (m，lH)，7.15(d，J = 8.4Hz，lH)，2.81(q，J = 7.細z，2H)，1.26(t，J = 7.6Hz，3H)。MS(EI，m/z):290.2[M-H]-。
[0074] 实施例3:3-漠-5-(2-乙基苯并巧喃-3-幾基)-2-径基苯甲腊(8)的合成
[0075：
[0076] 将化合物7 (170mg，0.584mmoI)溶解于DMF(5mL)，加入NBS(135mg，0.758mmoI)，所 得混合物在室溫下揽拌过夜。加入水(25mL)，用乙酸乙醋（20mLX3)萃取，合并的有机相用 饱和食盐水（IOmL)洗涂，无水硫酸钢干燥。减压蒸除溶剂，产物经柱层析纯化(200~300目 硅胶，乙酸乙醋:石油酸=1:1洗脱），得3-漠-5-(2-乙基苯并巧喃-3-幾基)-2-径基苯甲腊 (8)。
[0077] Ih NMR(DMS0-d6,300MHz)S8.13(d，J=l.細z，lH)，7.86(d，J=l.細z，lH)，7.52(d， J = 7.細z，lH)，7.41(dJ = 7.細z，lH)，7.：M-7.22(m，2H)，2.88(qJ = 7.5Hz，2H)，1.33(t，J =7.甜Z，3H) eMS化I，m/z): 368.0[M-H]-。
[007引实施例4: (2-乙基苯并巧喃-3-基）[4-径基-3-舰-5-(S氣甲基)苯基]甲酬（11)和 5-(2-乙基苯并巧喃-3-幾基)-2-径基-3-(=氣甲基)苯甲腊(12)的合成
[0079
[0080]步骤A:将化合物4(848111旨，1.64111111〇1)溶解于醋酸酢（31111^)，加入014?(2〇111邑， 0.164mmol)和化晚(3mL)，所得混合物在室溫下揽拌2小时。向反应液中加入水(50mL)，用二 氯甲烧(25血X 3)萃取，无水硫酸钢干燥。减压蒸除溶剂，产物经柱层析纯化(200~300目娃 胶，乙酸乙醋：石油酸= 1:5洗脱），得乙酸[4-(2-乙基苯并巧喃-3-幾基)-2,6-二舰]苯醋 (9)(930mg)。收率为 100%。
[0081 ] 步骤B:将化合物9(780mg，1.39mmol)溶解于DMF( 15mL)，加入氣横酷基二氣乙酸甲 醋（1.95血)和舰化亚铜(663mg，3.48mmol)，所得混合物在90°C及氮气下揽拌1小时。冷却到 室溫，加入水(60mL)，用乙酸乙醋(30mLX3)萃取，合并的有机相用饱和食盐水(20mL)洗涂， 无水硫酸钢干燥。减压蒸除溶剂，产物经柱层析纯化(200~300目硅胶，石油酸洗脱），得乙 酸[4-( 2-乙基苯并巧喃-3-幾基)-2-舰-6-( S氣甲基）]苯醋（10) (150mg)。收率为23.5 %。
[0082] 步骤C:将化合物10 (140mg，0.279mmo 1)溶解于甲醇（5mL)，加入碳酸钟（115mg， 0.833mmo 1)，所得混合物在室溫下揽拌2小时。加入水(25血），用石油酸（10血)洗涂，收集水 相。水相用稀盐酸调节pH值至5~6，用乙酸乙醋（15mL X 3)萃取，无水硫酸钢干燥。减压蒸除 溶剂，产物用石油酸重结晶，得(2-乙基苯并巧喃-3-基）[4-?基-3-舰-5-(S氣甲基)苯基] 甲酬（11)(12〇111邑）。收率为93.5%。
[0083] Ih NMR(DMS0-d6，300MHz)S8.36(S，1H)，7.93(S，1H)，7.68-7.65(m，1H)，7.44-7.42 (m，lH)，7.38-7.33(m，lH)，7.31-7.26(m，lH)，2.80(q，J = 7.5Hz，2H)，1.27(t，J = 7.5Hz， 3H)dMS化I，m/z):459.0[M-H]-。
[0084] 步骤D:将含有化合物11 (I IOmg，0.239mmoI)、氯化亚铜（32mg，0.357mmoI)和DMF (5血)的混合物在100°C揽拌过夜。冷却到室溫，加入水(25血），用乙酸乙醋（20血X 3)萃取， 合并的有机相用饱和食盐水(IOmL)洗涂，无水硫酸钢干燥。减压蒸除溶剂，产物经柱层析纯 化(200~300目硅胶，乙酸乙醋巧油酸= 1:5~1:1洗脱），得5-(2-乙基苯并巧喃-3-幾基)- 2- 径基-3-(=氣甲基)苯甲腊（12)。
[0085] Ih 匪R(DMS0-d6,500MHz)S7.95(s，lH)，7.82-7.81(m，lH)，7.62-7.61(m，lH)， 7.42-7.40(m，lH)，7.33-7.30(m，lH)，7.27-7.24(m，lH)，2.81(q，J=7.5Hz，2H)，1.26(t，J =7.甜z，3H)dMS 化I，m/z):360.2[M+扣+。
[0086] 实施例5:5-(2-乙基苯并巧喃-3-幾基)-2-径基-3-甲基苯甲腊(16)的合成 [0087；
[0088] 步骤A和B的实验操作分别参见实施例1步骤B和C，其中实施例1步骤B中的氯仿用 二氯甲烧替代。
[0089] 化合物 13 Ih NMR(DMS0-d6，，300MHz)S7.68-7.62(m，3H)，7.41(d，J = 7.5Hz，lH)， 7.36-7.31(m，lH)，7.28-7.23(m，lH)，7.08(d，J = 9.0Hz，lH)，3.91(s，3H)，2.81(q，J = 7.5Hz，2H)，2.21(s，3H)，1.25(t J = 7.5Hz，3H)〇MS(EI，m/z):317.1[M+Na] +。
[0090] 步骤C:将化合物14(650mg，2.44mmol)溶解于DMF(15mL)，加入NIS(678mg， 3.0ImmoI)，所得混合物在室溫下揽拌30分钟。加入水(75mL)，用乙酸乙醋（30mL X 3)萃取， 合并的有机相用饱和食盐水(20mL)洗涂，无水硫酸钢干燥。减压蒸除溶剂，产物经柱层析纯 化(200~300目硅胶，乙酸乙醋巧油酸=1: 30洗脱），得(2-乙基苯并巧喃-3-基）（4-径基- 3- 舰-5-甲基苯基）甲酬（15) (420mg)。收率为42.4%。
[0091] Ih 醒R(DMS0-d6,，500MHz)Sl0.03(s，lH)，7.96(s，lH)，7.63(d，J = 8.0Hz，lH)， 7.59(s，lH)，7.42(d，J = 8.0Hz，lH)，7.36-7.33(m，lH)，7.28-7.25(m，lH)，2.78(q，J = 7.5Hz，2H)，2.28(s，3H)，1.25(t，J = 7.甜z，3H)。MS化I，m/z):405.0[M-H]-。
[0092] 步骤D:将含有化合物15 (360mg，0.886mmoI)、氯化亚铜（119mg，1.329mmoI)和DMF (1 OmL)的混合物在11 (TC揽拌3小时。冷却到室溫，加入水(50mL)，用乙酸乙醋（20mL X 3)萃 取，合并的有机相用饱和食盐水（IOmL)洗涂，无水硫酸钢干燥。减压蒸除溶剂，产物经柱层 析纯化(200~300目硅胶，二氯甲烧:石油酸= 1:1洗脱），得5-(2-乙基苯并巧喃-3-幾基)- 2-径基-3-甲基苯甲腊(16)。
[0093] Ih 醒R(DMS0-d6,，300MHz)Sll.24(s，lH)，7.88-7.86(m，2H)，7.65(d，J = 7.8Hz， lH)，7.42-7.25(m，3H)，2.80(q，J = 7.5Hz，2H)，2.29(s，3H)，1.25(t，J = 7.甜z，3H)。MS巧I， m/z):304.1[M-扣-。
[0094] 实施例6:5-(2-乙基-5-氣苯并巧喃-3-幾基)-2-径基-3-甲基苯甲腊(21)的合成
[0095]
[0096] 步骤A :在室溫下将氨氧化钟（1 . 22g，21 . 74mmol)加入5-氣水杨醒（2.5g， 17.84mmo 1)的乙醇（50mL)溶液，然后升溫到回流，再在回流下滴加氯丙酬（1 . 82g， 19.67mmol)，所得混合物在回流下揽拌过夜。冷却到室溫，过滤除去不溶物，收集滤液。减压 蒸除溶剂，然后向剩余物中加入乙二醇(20mL)和85%水合阱（1.22g，32.36mmol)，回流揽拌 20分钟。冷却到室溫，加入氨氧化钟(2.23肖，39.74皿〇1)，有大量气体产生，然后缓慢升溫到 回流，直到没有气体放出为止。冷却到室溫，加入水(200mL)，用二氯甲烧（1 OOmL X 3)萃取， 无水硫酸钢干燥。减压蒸除溶剂，产物经柱层析纯化(200~300目硅胶，二氯甲烧:石油酸= 1:5洗脱），得2-乙基-5-氣苯并巧喃（17) (1.84g)。收率为62.8 %。
[0097] 步骤B:将3-甲基-4-甲氧基-苯甲酸（500mg，3 . Ommo 1)悬浮在氯化亚讽（1 OmL)中， 加入DMF(2滴），所得混合物在回流下揽拌2小时。减压蒸除溶剂，加入化合物17(500mg， 3.OSmmol)和无水二氯甲烧（15mL)，再在水浴下滴加四氯化锡（1.59g，6. IOmmol)，加完后， 室溫下揽拌过夜。将反应物倒入适量冰水中，用乙酸乙醋(25mLX3)萃取，无水硫酸钢干燥。 减压蒸除溶剂，产物经柱层析纯化（200~300目硅胶，乙酸乙醋：石油酸=1:40~1: 20洗 脱），得（2-乙基-5-氣苯并巧喃-3-基）（4-甲氧基-3-甲基苯基）甲酬（18)(909mg)。收率为 97.0%。
[009引步骤C:在水浴下将4MS漠化棚(0.83mL)滴加到化合物18(690mg，2.21mmol)的无 水二氯甲烧（15mL)溶液中，所得混合物在室溫下揽拌2小时。将反应物倒入适量冰水中，用 乙酸乙醋(40mL X 2)萃取，合并的有机相用饱和食盐水(20mL)洗涂，无水硫酸钢干燥。减压 蒸除溶剂，得(2-乙基-5-氣苯并巧喃-3-基）（4-径基-3-甲基苯基）甲酬（19)(730mg)粗品。 该化合物不经纯化直接用于下一步反应。
[0099] 步骤D:将化合物19粗品（730mg)溶解于DMF(IOmL)，然后分批加入NIS(645mg， 2.87mmoI)，加完后，所得混合物在室溫下揽拌30分钟。加入水(50mL)，用乙酸乙醋（25mL X 3)萃取，合并的有机相依次用硫代硫酸钢水溶液（IOmL)和饱和食盐水（IOmL)洗涂，无水硫 酸钢干燥。减压蒸除溶剂，产物经柱层析纯化(200~300目硅胶，乙酸乙醋:石油酸=1:20洗 脱），得(2-乙基-5-氣苯并巧喃-3-基）（4-径基-3-舰-5-甲基苯基）甲酬(20)(640mg)。步骤C 和D两步反应总收率为68.3%。
[0100] Ih NMR(DMS0-d6，，500MHz)Sl0.06(s，lH)，7.96(s，lH)，7.70-7.67(m，lH)，7.59(s， lH)，7.22-7.16(m，2H)，2.76(q，J = 7.5Hz，2H)，2.29(s，3H)，1.24(t，J = 7.甜z，3H)。MS巧I， m/z):423.0[M-扣-。
[OW]步骤 E:将含有化合物 20 (590mg，1.39mmol)、氯化亚铜（187mg，2.09mmol)和 DMF (1 OmL)的混合物在115 °C揽拌2.5小时。冷却到室溫，加入水(50mL)，用乙酸乙醋（20mL X 3) 萃取，合并的有机相用饱和食盐水（IOmL)洗涂，无水硫酸钢干燥。减压蒸除溶剂，产物经柱 层析纯化(200~300目硅胶，乙酸乙醋巧油酸=1:10~3:5洗脱），得5-(2-乙基-5-氣苯并 巧喃-3-幾基)-2-径基-3-甲基苯甲腊(21)。
[0102] Ih NMR(DMS0-d6，，500MHz)Sll.l9(s，lH)，7.89(s，lH)，7.85(s，lH)，7.71-7.68(s， lH)，7.22-7.16(m，2H)，2.76(q，J = 7.5Hz，2H)，2.29(s，3H)，1.23(t，J = 7.甜z，3H)。MS巧I， m/z):322.1[M-扣-。
[0103] 实施例7:5-(2-乙基-5-氣苯并巧喃-3-幾基)-2-径基-3-舰苯甲腊(25)的合成
[0105] 步骤A:在室溫下将4-甲氧基苯甲酯氯(680mg，3.99mmol)加入到化合物17(600mg， 3.65mmo 1)的二氯甲烧（15mL)溶液中，然后加入四氯化锡（1.90g，7.29mmo 1)，所得混合物在 室溫下揽拌过夜。将反应物倒入适量冰水中，用二氯甲烧(30mLX2)萃取，无水硫酸钢干燥。 减压蒸除溶剂，产物经柱层析纯化（200~300目硅胶，乙酸乙醋：石油酸=1: 30~1: 20洗 脱），得(2-乙基-5-氣苯并巧喃-3-基K4-甲氧基苯基）甲酬(22)(1.05g)。收率为96.4%。
[0106] 步骤B:在水浴下将IMS漠化棚(6.7mL)滴加到化合物22( 1.0g，3.35mmol)的无水 二氯甲烧（15mL)溶液中，所得混合物在室溫下揽拌2小时。将反应物倒入适量冰水中，用乙 酸乙醋（30mLX3)萃取，合并的有机相用饱和食盐水(20mL)洗涂，无水硫酸钢干燥。减压蒸 除溶剂，得灰白色固体(2-乙基-5-氣苯并巧喃-3-基）(4-径基苯基）甲酬(23)粗品（1.03g)。 该化合物不经纯化直接用于下一步反应
[0107] 步骤C:将化合物23粗品（1.03g)溶解于甲醇（30mL)，加入无水乙酸钢（660mg， 8. OSmmol)和舰(2.04g，8.20mmol)，所得混合物在回流下揽拌1.5小时。然后加入含有氨氧 化钢（28Omg，7mmo 1)的水（40mL)溶液，继续回流0.5小时。冷却到室溫，加入饱和食盐水 (40mL)，用乙酸乙醋(30mLX3)萃取，合并的有机相依次用稀硫代硫酸钢溶液（15mL)和饱和 食盐水（IOmL)洗涂，无水硫酸钢干燥。减压蒸除溶剂，产物经石油酸/乙酸乙醋重结晶，得 (2-乙基-5-氣苯并巧喃-3-基）（4-径基-3，5-二舰苯基）甲酬(24) (1.30g)。步骤B和C两步反 应总收率为72.4%。
[010 引步骤 D:将含有化合物 24(1.26g，2.35mmol)、氯化亚铜（115mg，2.34mmol)和DMF (20mL)的混合物在100°C揽拌4小时。冷却到室溫，加入水(50mL)，用乙酸乙醋（30mLX 3)萃 取，合并的有机相用饱和食盐水(20mL)洗涂，无水硫酸钢干燥。减压蒸除溶剂，产物经柱层 析纯化（200~300目硅胶，乙酸乙醋：石油酸=2 : 5~3 :1洗脱），得5-(2-乙基-5-氣苯并巧 喃-3-幾基)-2-径基-3-舰苯甲腊(25)。
[0109] Ih NMR(DMS0-d6,300MHz)S8.15(s，lH)，7.95(s，lH)，7.64(s，lH)，7.16-7.13(m， 2H)，2.79(q，J = 7.細z，2H)，1.25(t，J = 7.細z，3H)。MS化I，m/z):434.0[M-H]-。
[0110] 实施例8:5-(5-氯2-乙基苯并巧喃-3-幾基)-2-径基-3-甲基苯甲腊(26)的合成
[0111
[0112」化合物26的制备方法参见实施例6。
[0113] Ih NMR(DMS0-d6,300MHz)S7.89-7.85(m，2H)，7.71(d，J = 8.7Hz，lH)，7.45(d，J = 2.1Hz，lH)，7.39(dd，J = 2.1，8.7Hz，lH)，2.75(q J = 7.5Hz，2H)，2.28(s，3H)，1.23(t J = 7.5Hz，3H)〇MS(EI，m/z):338.1[M-H]-。
[0114] 实施例9:5-( 5-氯-2-乙基苯并巧喃-3-幾基)-2-哲基-3-舰苯甲腊(27)的合成
[0115
[0116] 化合物27的制备方法参见实施例7。
[0117] Ih NMR(DMS0-d6,300MHz)S8.15(d，J = 2.4Hz，lH)，7.67-7.64(m，2H)，7.41(d，J = 2.1Hz，lH)，7.34(dd J = 2.1，8.7Hz，lH)，2.78(q J = 7.甜z，2H)，1.25(tJ = 7.甜z，3H)。MS (El，m/z):450.0[M-H]-。
[011引实施例10:(2-乙基-苯并巧喃-3-基）-[4-径基-3,5-二（^氣甲基）-苯基]-甲酬 (29)的合成
[0119]
[0120]化合物29的制备方法参见实施例4中的步骤B和C。
[01 別]Ih 匪R(DMS0-d6,300MHz)S8.15(s，2H)，7.68-7.65(m，lH)，7.44-7.42(m，lH)， 7.38-7.33(m，lH)，7.31-7.26(m，lH)，2.81(q，J = 7.5Hz，2H)，1.26(t，J = 7.5Hz，3H)〇MS 化I，m/z):401.1[M-扣-。
[0122] 实施例11:5-( 2-乙基-5-氣-苯并巧喃-3-幾基)-2-径基-3-S氣甲基-苯甲腊(30) 的合成
[0123]
[0124] I 实施例4〇MS(EI，m/z): 376.0[M-H]-。
[0125] 基-5-氣-苯并巧喃-3-幾基)-2-径基-苯甲腊(31)的合成
[0126]
[0127] 化合物31的制备方法参见实施例巧日实施例3eMS化I，m/z):386.1[M-W-。
[012引实施例13: (2-乙基-5-氣苯并巧喃-3-基）[4-径基-3,5-二(S氣甲基）苯基]甲酬 (35)和(2-乙基-5-氣苯并巧喃-3-基）[4-径基-3-舰-5-(S氣甲基)苯基]甲酬(36)的合成
[0
[0130] 化合物35和36的制备方法参见实施例4中的步骤A、B和C。
[0131] 化合物35:1h NMR(DMS0-d6,300MHz)S8.12(s，2H)，7.73-7.68(m，lH) ,7.23-7.18 (m，2H)，2.77(q，J = 7.甜z，2H)，1.25(t，J = 7.甜z，3H)。MS化I，m/z):419.1[M-H]-。
[0132] 化合物 36: Ih 醒 R(DMS0-d6,300MHz )58.37( S，1H)，7.93(s，lH) ,7.73-7.69(m， lH)，7.24-7.19(m，2H)，2.77(q J = 7.5Hz，2H)，I. 25(t，J = 7.5Hz，3H)〇MS(EI，m/z) :477.0 [M-扣 _。
[0133] 实施例14:5-(2-乙基-5-氣苯并巧喃-3-幾基)-2-径基苯甲腊(41)的合成 LOUS」步骤A:将3-鹏-4-辉基苯甲酸甲鹏（4
. Ig，14.75mmol)溶解于DMF(25mL)，加入碳酸 钟(2.65g，19.20mmo 1)和舰甲烧(3.14g，22.12mmo 1)，所得混合物在60°C揽拌2小时。冷却到 室溫，加入水(SOmL)，用乙酸乙醋(40mL X 3)萃取，合并的有机相依次用水(30mL X 2)和饱和 食盐水(20mL)洗涂，无水硫酸钢干燥。减压蒸除溶剂，产物用石油酸重结晶，得3-舰-4-甲氧 基苯甲酸甲醋(37)(3.81g)。收率为88.4%。
[0136] 步骤B:将化合物37(3.Og, 10.27mmol)溶解在THF(IOmL)和乙醇（IOmL)中，加入2M 氨氧化钢溶液(20mL)，所得混合物在55°C揽拌1小时。减压蒸除约一半溶剂，加入水(60mL)， 用稀盐酸调pH值至1~2，乙酸乙醋（40mL X 3)萃取，合并的有机相用饱和食盐水（20mL)洗 涂，无水硫酸钢干燥。减压蒸除溶剂，得3-舰-4-甲氧基苯甲酸(38)(2.76g)。收率为96.7%。
[0137] 步骤C:将化合物38(2.74g，9.85mmol)悬浮在氯化亚讽（IOmL)中，加入DMF(3滴）， 所得混合物在65 °C揽拌5小时。减压蒸除溶剂，加入化合物17 (1.62g，9.86mmol)和无水二氯 甲烧(54mL)，再在水浴下加入四氯化锡(5.14g，19.73mmo 1)。加完后，所得混合物在室溫下 揽拌过夜。将反应物倒入适量冰水中，用乙酸乙醋(50mLX3)萃取，无水硫酸钢干燥。减压蒸 除溶剂，产物经柱层析纯化（200~300目硅胶，乙酸乙醋：石油酸=1:100~1:20洗脱），得 (2-乙基-5-氣苯并巧喃-3-基）（3-舰-4-甲氧基苯基）甲酬(39) (2.96g)。收率为70.8 %。
[0138] 步骤D:将含有化合物39 (2.48g，5.85mmo 1)、氯化亚铜（785mg，8.77mmo 1)和DMF (30mL)的混合物在130°C揽拌过夜。冷却到室溫，加入乙酸乙醋(40mL)，经过娃藻±过滤除 去不溶物。加入水(90mL)，分层，收集有机层。水层用乙酸乙醋(40mLX2)萃取，合并的有机 相依次用水(30mLX2)和饱和食盐水(20mL)洗涂，无水硫酸钢干燥。减压蒸除溶剂，产物经 柱层析纯化(200~300目硅胶，乙酸乙醋巧油酸=1: 20~1:10洗脱），得5-(2-乙基-5-氣苯 并巧喃-3-幾基）-2-甲氧基苯甲腊(40)(1.62g)。收率为85.6% c/H NMR(CDCl3,300MHz)S 8.06-8.03(m，2H)，7.45-7.41(m，lH)，7.09-7.05(m，lH)，7.02-6.98(m，2H)，4.05(s，3H)， 2.90(q J = 7.甜z，2H)，l.：M(tJ = 7.5Hz，3H)〇MS(EI，m/z):322.1[M-H] -。
[0139] 步骤E:在水浴下将IMS漠化棚(7.5mL)加入到化合物40(830mg，2.57mmol)的无水 二氯甲烧（15mL)溶液中，所得混合物在室溫下揽拌72小时。将反应物倒入适量冰水中，用乙 酸乙醋(40mLX2)萃取，合并的有机相用饱和食盐水(20mL)洗涂，无水硫酸钢干燥。减压蒸 除溶剂，产物经柱层析纯化（200~300目硅胶，乙酸乙醋：石油酸=1:10~1:5洗脱），得5- (2-乙基-5-氣苯并巧喃-3-幾基)-2-?基苯甲腊(41)。Ih NMR(DMS0-d6，500MHz) S12.17 (S， lH)，8.08(s，lH)，7.93(d，J = 8.甜z，lH)，7.72-7.70(m，lH)，7.23-7.15(m，3H)，2.77(q，J = 7.5Hz，2H)，1.24( t，J = 7.5Hz，3H) 〇MS(EI，m/z): 308.1 [M-H]-。
[0140] 实施例15: [3-気-4-?基-5-(S氣甲基)苯基](2-乙基-5-氣苯并巧喃-3-基）甲酬 (43) 的合成
L0142J 步徽A:将化合物％(340mg，0.654mmo 1)浴解在乙酸乙鹏（20血）中，加入童水（1血） 和5%钮碳(20mg)，所得混合物在気气下揽拌过夜。过滤除去钮碳，减压蒸除溶剂，产物经柱 层析纯化(200~300目硅胶，乙酸乙醋巧油酸=1:30洗脱），得[2-気-4-(2-乙基-5-氣苯并 巧喃-3-幾基)-6-( S氣甲基）]乙酸苯醋(42) (90mg)。收率为34.8 %。
[0143] 步骤B:将化合物42(90111旨，0.228111111〇1)溶解于甲醇（51111^)，加入碳酸钟（95111邑， 0.688mmol)，所得混合物在室溫下揽拌0.5小时。加入水(25mL)，用稀盐酸调节pH值至3~4， 乙酸乙醋（25mL X 2)萃取，合并的有机相用饱和食盐水（15mL)洗涂，无水硫酸钢干燥。减压 蒸除溶剂，产物用石油酸重结晶，得[3-気-4-径基-5-(=氣甲基)苯基](2-乙基-5-氣苯并 巧喃-3-基）甲酬（43)。lHNMR(DMS0-d6,500MHz)Sll.68(s，lH)，7.95-7.93(m，2H)，7.71- 7.69(m，lH)，7.22-7.15(m，2H)，2.78(q，J = 7.5Hz，2H)，1.24(t，J = 7.5Hz，3H)〇MS(EI，m/ z):352.0[M-扣-。
[0144] 实施例16: [3-漠-4-径基-5-(S氣甲基)苯基](2-乙基-5-氣苯并巧喃-3-基）甲酬 (44) 的合成
[0145
[0146] 将漠(41mg，0.257mmol)的醋酸（1血)溶液滴加到化合物43(60mg，0.170mmol)的醋 酸巧mU溶液中，所得混和物在室溫下揽拌2小时。向混和物中滴加稀亚硫酸氨钢水溶液，直 到颜色稱去。然后加入适量水，用乙酸乙醋（20mLX 2)萃取，合并的有机相用饱和食盐水 (IOmL)洗涂，无水硫酸钢干燥。减压蒸除溶剂，产物经柱层析纯化(200~300目硅胶，乙酸乙 醋：石油酸=1:5~3:5洗脱），得[3-漠-4-?基-5-(S氣甲基）苯基](2-乙基-5-氣苯并巧 喃-3-基）甲酬（44)。lH匪R(DMS0-d6,300MHz)S8.10(s，lH)，7.84(s，lH)，7.71-7.66(m， lH)，7.20-7.17(m，2H)，2.76(q J = 7.5Hz，2H)，1.25(t，J = 7.5Hz，3H)〇MS(EI，m/z):429.0 [M-扣-。
[0147]实施例17:3-氯-5-(2-乙基-5-氣-苯并巧喃-3-幾基)-2-径基-苯甲腊(45)的合成 [014 引
[0149] 化合物45的制备方法参见实施例6中的步骤B、C、D和E。其中实施例6步骤B中的3- 甲基-4-甲氧基苯甲酸用3-氯-4-甲氧基苯甲酸替代。Ih NMR化MS0-d6，500MHz)S8.04-8.02 (m，2H)，7.71-7.68(m，lH)，7.20-7.19(m，2H)，2.80(q，J = 7.5Hz，2H)，1.24(t，J = 7.5Hz， 3H)〇MS(EI，m/z):342.0[M-H]-。
[0150] 生物学实施例
[0151] 实施例17:实施例化合物对HEK293转染细胞株中hURATl转运尿酸的抑制试验：
[0152] 1.包被24孔板:按20化L/孔加入0.1 mg/mL多聚赖氨酸(poly-D-Lysin),放置过夜。 移去多聚赖氨酸，用无菌水清洗并彻底惊干，待用。
[0153] 2.将肥K293-WJRAT1稳转细胞按2X 1〇5个/孔接入包被过的24孔板中，37°C，5%C02 解箱培养3天。
[0154] 3.实验当天，用溫浴过的皿SS( 125mM葡萄糖酸钢、4. SmM葡萄糖酸钟、1.3mM葡萄糖 酸巧、1.2mMK出P04、1.2mMMgS04、5.6mM葡萄糖、25mM肥阳S，pH7.4)清洗2遍细胞并吸净， 再按16化L/孔加入皿SS，并按20化/孔加入终浓度为SOOnM待测化合物，做为试验化合物孔 (CPM(试验化合物））；按18化L/孔加入皿SS但不加试验化合物，做为空白对照孔(CPM(空白 对照））。放置室溫下1 Omin。
[01对 4.按20化/孔加入终浓度为SOiiM的I4C尿酸，放置室溫下20min。
[0156] 5.吸净每孔溶液，用预冷的皿SS清洗细胞并吸净。最后加入0.2M化OH溶解细胞， 收集细胞碎片并加入适量闪烁液，在化rkin Elmer MicroBe化Trilux 1450型液体闪烁分 析仪上检测同位素1化的放射强度(CPM值）。
[0157] 6.通过对1化标记尿酸的测定，按W下公式可计算出试验化合物对WJRATl转运尿酸 的抑制效果。试验化合物均设=次重复，试验结果取平均值，并计算标准偏差sd。
[015 引
[0159] 7.实施例化合物对皿K293转染细胞株中WJRATl转运巧酸抑制率的试验结果见表 Io
[0160] 表1.试验化合物对HEK293转染细胞株中WJRATl转运尿酸的抑制率
[0161]
[0162] 试验结果显示，在5(K)nM浓度下，运些化合物对肥K293转染细胞中hURATl转运尿酸 均有较好的抑制效果，其中，化合物5，11，25,29,44和45的抑制效果优于苯漠马隆。
[0163] 实施例18:化合物25对人正常肝细胞心02和WRk68生长的抑制作用
[0164] 1.人正常肝细胞k02(购自武汉普诺赛生物科技有限公司）和WRL-68(由南京大学 生命科学研究院惠赠），均用DMEM培养液(含10%胎牛血清，lOOU/mL青霉素，0.1 mg/mL链霉 素)在37°C、5 %C〇2解箱培养至细胞汇合度达90 %左右。按1 X IO^孔的细胞数接种于96孔板 中，置37 °C、5 % C〇2解箱培养2地。
[0165] 2.用DMEM培养液配制不同浓度梯度的试验化合物25和对照药物苯漠马隆，并按 10化L/孔加入，作为试验化合物孔和对照药物孔;按10化L/孔加入DMEM培养液，做为阴性对 照孔。置37°C、5%C02解箱中，L-02细胞和WRL-68细胞各培养96h。
[0166] 3.将 Resazu;rin(15mg/50mL) 'Methylene Blue(25mg/10mL) 'Potassium fGiricyanide(C). 329g/1OOmL) 'Potassium fGirocyanide(C). 422g/1OOmL)溶于PBS(0.1 M、 抑=7.4)中，配制成Alamar Blue溶液，待用。
[0167] 4.细胞用PBS(0.1M、抑=7.4)清洗2次，按100化/孔加入Alamar Blue溶液;在无细 胞的孔中加入100化/孔Alamar Blue溶液，做为空白对照孔。将96孔板置37 °C、5 % C〇2解箱 中培养化。
[0168] 5.用酶标仪Victor X4(I^rkin Elmer)在530/590nm处检测细胞巧光值。每个浓度 重复测定3次，得出平均值和标准偏差。按W下公式计算细胞存活率：
[0169]
[0170] 6.根据细胞存活率，利用Prism Graph软件计算得出药物对细胞的半数抑制浓度 (ICsq)。结果显示，化合物25对正常肝细胞k02和WRk68的ICsq值分别为153.20測和145.82 yM，苯漠马隆对应肝细胞的ICso值为70.95iiM和56.03測。
[0171] 上述实验数据表明化合物25对正常肝细胞的毒性显著低于苯漠马隆。部分实施例 化合物也具有类似效果。
【主权项】
1. 式(I)或式(II)所述的化合物或其药学上可接受的盐，其中， R1选自氢、氖、卤素、羟基、腈基、取代或非取代的Cl-4烷基、取代或非取代的Cl-4烷氧基中 的一种，其取代基选自氟、羟基、Cl-4烷氧基或氨基中的一种或几种； R2选自氛、気、?'素、Cl-3烷基、?'代Cl-3烷基、臆基中的一种； R3选自烷基； η或m分别独立地为1或2; R4选自氢、氖、卤素、羟基、腈基、取代或非取代的Cl-4烷基、取代或非取代的Cl-4烷氧基中 的一种，其取代基选自氟、羟基、Cl-4烷氧基或氨基中的一种或几种； R5选自氛、気、?'素、Cl-3烷基、?'代Cl-3烷基、臆基中的一种； R6选自烷基； X或y分别独立地为1或2。2. 根据权利要求1所述的化合物或其药学上可接受的盐，其中R1选自氢、氘、卤素、羟基、 臆基、Cl-3烷基、取代的Cl-3烷基、Cl-3烷氧基、氣代Cl-3烷氧基中的一种，其取代基选自氣、轻 基、&-3烷氧基或氨基中的一种或几种。3. 根据权利要求2所述的化合物或其药学上可接受的盐，其中R1选自氢、氘、氟、氯、羟 基、腈基、甲基、乙基、氟代甲基、氟代乙基、甲氧基甲基、乙氧基甲基、甲氧基乙基、乙氧基乙 基、羟甲基、羟乙基、氨基甲基、氨基乙基、甲氧基、乙氧基、氟代甲氧基、氟代乙氧基中的一 种。4. 根据权利要求1所述的化合物或其药学上可接受的盐，其中R2选自氢、氘、氟、氯、溴、 碘、甲基、乙基、正丙基、异丙基、氟代甲基、氟代乙基、腈基中的一种;R 3选自Cn烷基;η或m 分别独立地为1。5. 根据权利要求1所述的化合物或其药学上可接受的盐，其中R4选自氢、氘、卤素、羟基、 臆基、Cl-3烷基、取代的Cl-3烷基、Cl-3烷氧基、氣代Cl-3烷氧基中的一种，其取代基选自氣、轻 基、&-3烷氧基或氨基中的一种或几种。6. 根据权利要求1所述的化合物或其药学上可接受的盐，其中R5选自氢、氘、氟、氯、溴、 碘、甲基、乙基、正丙基、异丙基、氟代甲基、氟代乙基中的一种;R 6选自Cn烷基;X或y分别独 立地为1。7. 根据权利要求1所述的化合物或其药学上可接受的盐，其中化合物选自：8. 权利要求1~7中任一项所述的化合物或其药学上可接受的盐在制备促尿酸排泄药 物方面的应用。9. 权利要求1~7中任一项所述的化合物或其药学上可接受的盐在制备治疗或预防高 尿酸血症或痛风药物方面的应用。10. -种药物组合物，其以权利要求1~8中任一项所述的化合物或其药学上可接受的 盐为活性成分或主要活性成分，辅以药学上可接受的辅料。
【文档编号】C07D307/80GK106065010SQ201610258184
【公开日】2016年11月2日
【申请日】2016年4月22日 公开号201610258184.0, CN 106065010 A, CN 106065010A, CN 201610258184, CN-A-106065010, CN106065010 A, CN106065010A, CN201610258184, CN201610258184.0
【发明人】史东方, 傅长金, 承曦
【申请人】镇江新元素医药科技有限公司