紫苏叶抗高尿酸血症有效部位及其制备方法和应用
【技术领域】
[0001] 本发明属于医药领域，涉及紫苏叶抗高尿酸血症有效部位及其制备方法，还涉及 紫苏叶抗高尿酸血症有效部位在制备治疗高尿酸血症产品中的用途。
【背景技术】
[0002] 高尿酸血症是嘌呤代谢紊乱或(和）尿酸排泄减少所引起的一组异质性疾病，是引 发痛风的重要生化基础，与心血管疾病、慢性肾脏病及代谢综合征，如糖尿病、肥胖等密切 相关，是一种严重影响公共健康的疾病。高尿酸血症不仅严重影响病人的生活质量，甚至威 胁患者生命，严重威胁到公共卫生健康状态，给社会带来沉重的经济负担。黄嘌呤氧化酶作 为尿酸生成关键酶是降低尿酸药物的作用靶点，别嘌呤醇和非布索坦是在临床上使用的黄 嘌呤氧化酶抑制剂，但皮肤过敏、肝炎、超敏反应综合征等不良反应在一定程度上限制了其 使用。2013年国家食品药品监督管理总局发布第57期《药品不良反应信息通报》，提示别 嘌呤醇引起重症药疹的安全问题。因此，从天然产物探寻成分清楚、疗效确切、安全可靠的 抗高尿酸血症有效物质具有重要意义。
[0003] 紫苏/feriWa/ri/ksceas(L. )Britt.是唇形科紫苏属植物，入药始载于《名医 别录》，中国药典2010年版一部收载其不同药用部位紫苏叶、紫苏梗和紫苏子。紫苏叶味辛， 性温，归肺、脾经，具有解表散寒，行气和胃的功能，用于风寒感冒、咳嗽呕吐、妊娠呕吐、鱼 蟹中毒。现代药理研究结果表明紫苏叶具有抗过敏[MakinoT.，etal.Phytother.Res.， 2003，17,240-243.]、抗炎[1^1181^11^11.，厶111.丄？1^8101.-6&8钍.，2014,308,632-641.]、 抗肿瘤[1^^1<:￥.6七31.他1：1\1^8.?抑(31:.，2015,9，11-16.]、抗氧化[]111111.1.，6七&1. FoodChem.，2014,148, 367-372.]、降血脂[FengL.J.，etal.FoodRes.Int.，2011，44， 404-409.]、保肝[YangS.Y.，etal.FoodChem.，2012,133, 337-343.]、减肥[KimM.J.， etal.Phytother.Res.，2009, 23,1685-1690.]作用。在对药食同源植物资源黄噪呤氧化 酶抑制活性筛选中发现紫苏叶水提取物具有潜在活性。经对现有技术文献检索，未见紫苏 叶水提取物抗高尿酸血症有效部位的文献报道。
【发明内容】
[0004] 本案发明人在发现紫苏叶水提取物潜在黄嘌呤氧化酶抑制活性并优于乙醇提取 物的基础上，采用黄嘌呤氧化酶抑制活性指标指导下的导向分离模式确定有效部位和无效 部位，研究了有效部位的主要化学成分和含量，因而完成了本发明。
[0005] 本发明目的是克服现有技术的不足，提供一种有效物质明确、活性与机制清晰且 副作用小的紫苏叶抗高尿酸血症有效部位，本发明另一目的是提供紫苏叶抗高尿酸血症有 效部位的制备方法和在制备治疗尚尿酸血症广品中的应用。
[0006] 为了实现以上目的，本发明采取的技术方案为： 本发明的紫苏叶抗高尿酸血症有效部位是从紫苏叶中提取分离的有效部位，其中咖啡 酸、咖啡酸乙烯酯、迷迭香酸和迷迭香酸甲酯的重量之和50%~70%，含有5%~10%重量的野黄 芩苷，通过以下方法制备得到：紫苏叶加水煎煮三次，每次用量为紫苏叶重量的35倍体积 量，每次2小时，滤过，滤液合并，浓缩至紫苏叶重量的0. 5倍体积量，加80 %乙醇调节醇浓 度至60 %，静置24小时，滤过，减压回收乙醇得提取物，提取物加水使溶解，用量为紫苏叶 重量的〇. 5倍体积量，用正丁醇振摇提取4次，用量为紫苏叶重量的0. 5倍体积量，提取液 合并，减压回收，得正丁醇分离部位，正丁醇分离部位加水溶解，经大孔吸附树脂柱HPD-600 色谱，填充大孔吸附树脂HPD-600体积为紫苏叶重量的0. 5倍体积，用水洗脱至洗脱液近无 色，弃去洗脱液，用70%乙醇洗脱至洗脱液近无色，收集洗脱液，洗脱液减压浓缩、干燥得紫 苏叶抗高尿酸血症有效部位。
[0007] 本发明采用黄嘌呤氧化酶抑制活性指标指导下的导向分离模式确定有效部位和 无效部位，紫苏叶水提醇沉提取物100 #g/ml对黄嘌呤氧化酶的抑制率为58. 06% ;采用液 液分配法将紫苏叶水提醇沉提取物分离为正丁醇分离部位和水分离部位，正丁醇分离部位 100 #g/ml对黄嘌呤氧化酶的抑制率为76. 02%，而水分离部位100 #g/ml对黄嘌呤氧化 酶的抑制率为25. 84%，故将正丁醇分离部位进一步分离；采用大孔吸附树脂HPD-600技术 将正丁醇分离部位分离为水洗脱部位和70%乙醇洗脱部位，70%乙醇洗脱部位100 #g/ml 对黄嘌呤氧化酶的抑制率为82. 58%，而水洗脱部位对黄嘌呤氧化酶无抑制作用。
[0008] 本发明的紫苏叶抗高尿酸血症有效部位中主要成分包括咖啡酸、咖啡酸乙烯酯、 迷迭香酸、迷迭香酸甲酯、反式对羟基桂皮酸、野黄芩苷、8, 4' -二羟基-5, 7-二甲氧基二氢 黄酮、黄芩素-7-甲醚、木犀草素和芹菜素。
[0009] 本发明采用现代分离鉴定技术对紫苏叶抗高尿酸血症有效部位化学成分进一步 分离鉴定，包括咖啡酸[庞维荣，等.中国实验方剂学杂志，2011，17(20)，118-121.]，咖啡 酸乙烯酯[牛雪梅，等?中草药，2003,34(4)，300-303.]，迷迭香酸[1 &即^，6七&1.01111. J.Nat.Med.，2007,5 (1)，27-30.]、迷迭香酸甲酯[高俊峰，等.中国中药杂志，2013,38
[10] :1556-1559.]，反式对羟基桂皮酸[付琛，等?中草药，2011，42 (12)，2410-2412.]， 野黄芩苷[刘红丽，等?中药材，2011，34(5)，718 -720. ]，8, 4'-二羟基-5, 7-二甲氧基二 氢黄酮[新化合物]，黄苳素 _7_ 甲醚[HyukY.，etal.Bull.KoreanChem.Soc.，2011， 32,2101-2104.]，木犀草素[刘红丽，等?中药材，2011，34(5)，718 -720.]，芹菜素[邹忠 杰，等?中草药，2006, 37 (9)，1303 - 1304.]。
[0010] 化学结构如下：
本发明采用高效液相色谱法测定咖啡酸、咖啡酸乙烯酯、迷迭香酸、迷迭香酸甲酯和野 黄芩苷的含量。
[0011] 本发明提供紫苏叶抗高尿酸血症有效部位的制备方法，该方法包括以下步骤：紫 苏叶加水煎煮三次，每次用量为紫苏叶重量的35倍体积量，每次2小时，滤过，滤液合并，浓 缩至紫苏叶重量的〇. 5倍体积量，加80 %乙醇调节醇浓度至60 %，静置24小时，滤过，减压 回收乙醇得提取物，提取物加水使溶解，用量为紫苏叶重量的0. 5倍体积量，用正丁醇振摇 提取4次，用量为紫苏叶重量的0. 5倍体积量，提取液合并，减压回收，得正丁醇分离部位， 正丁醇分离部位加水溶解，经大孔吸附树脂柱HPD-600色谱，填充大孔吸附树脂HPD-600体 积为紫苏叶重量的〇. 5倍体积，用水洗脱至洗脱液近无色，弃去洗脱液，用70%乙醇洗脱至 洗脱液近无色，收集洗脱液，洗脱液减压浓缩、干燥得紫苏叶抗高尿酸血症有效部位。
[0012] 本发明提供的紫苏叶抗高尿酸血症有效部位的制备方法是从紫苏叶中提取分离 有效部位，其中咖啡酸、咖啡酸乙烯酯、迷迭香酸和迷迭香酸甲酯的重量之和50%~70%，含有 5%~10%重量的野黄芩苷。
[0013]本发明提供的紫苏叶抗高尿酸血症有效部位的制备方法是从紫苏叶中提取分离 有效部位，主要成分包括咖啡酸、咖啡酸乙烯酯、迷迭香酸、迷迭香酸甲酯、反式对羟基桂皮 酸、野黄芩苷、8, 4' -二羟基-5, 7-二甲氧基二氢黄酮、黄芩素-7-甲醚、木犀草素和芹菜素。 [0014]本发明的紫苏叶抗高尿酸血症有效部位在制备治疗高尿酸血症产品中应用，特别 是在制备黄嘌呤氧化酶抑制剂产品中应用。
[0015] 本发明采用以黄嘌呤为底物，HPLC法测定尿酸生成量的黄嘌呤氧化酶抑制活性评 价体系测定紫苏叶抗高尿酸血症有效部位抑制作用，避免紫外分光光度法反应体系中化学 成分、黄嘌呤和尿酸紫外吸收相互干扰，影响测定结果的准确性。紫苏叶抗高尿酸血症有效 部位 100 #g/mL的抑制率 81. 35~88. 26%，50 #g/mL的抑制率 69. 25~73. 38%，25 #g/mL 的抑制率 40. 12~44. 44%。
[0016] 本发明采用氧嗪酸盐诱导的动物模型评价紫苏叶抗高尿酸血症有效部位降尿酸 作用，连续给药7天，紫苏叶抗高尿酸血症有效部位具有明显地降低血尿酸的作用。上述结 果表明紫苏叶抗高尿酸血症有效部位可在制备治疗高尿酸血症产品中应用，特别是作为黄 噪吟氧化酶抑制剂在制备治疗尚尿酸血症广品中应用。也可以含有紫苏叶抗尚尿酸血症有 效部位的药物组合物在制备治疗高尿酸血症产品中应用，特别是作为黄嘌呤氧化酶抑制剂 在制备治疗尚尿酸血症广品中应用。
[0017] 本发明的紫苏叶抗高尿酸血症有效部位优点为以现代分离手段和药理活性筛选 相结合的方法确定最佳有效部位，所得有效部位成分更清楚，活性成分含量高，且经体内外 实验结果表明，本发明提供的紫苏叶抗高尿酸血症有效部位明显抑制黄嘌呤氧化酶活性达 到降尿酸作用，且用药剂量低，不良反应低，本发明提供的紫苏叶抗高尿酸血症有效部位可 以方便和药学上可接受的载体制备成各种剂型的药物，方便临床服用。
[0018] 本发明的紫苏叶抗高尿酸血症有效部位制备方法优点为工艺简单，操作方便，技 术易掌握，能耗小，溶剂可回收循环使用，生产成本低。
[0019] 本发明的紫苏叶抗高尿酸血症有效部位可用于制备治疗高尿酸血症产品优点为 作用机制明确，基于抑制尿酸生成关键酶黄嘌呤氧化酶活性。
[0020] 本发明还提供用本发明的紫苏叶抗高尿酸血症有效部位以及药学上可接受的载 体或赋形剂制备的药物制剂。这些药物制剂选自以下剂型：片剂、糖衣片剂、薄膜衣片剂、 肠溶衣片剂、泡腾片剂、舌下片剂、胶囊剂、硬胶囊剂、软胶囊剂、微囊剂、微球剂、颗粒剂、丸 剂、滴丸剂、散剂、膏剂、口服液、混悬剂、溶液剂、气雾剂、注射剂，注射乳剂、冻干粉针，还可 以根据需要制备成缓释或控释制剂。