g/ Kg)，别嘌呤醇对照组(别嘌呤10mg/Kg)。每天AM9:00分别灌胃给药，给药周期7天，正常 对照组和模型对照组灌胃给予等量生理盐水。末次给药前1小时给予模型对照组和各给药 组氧嗪酸钾250mg/Kg，给药后1小时，小鼠眼球后静脉丛取血(取血前1血小时禁食)，在 10000Xg件下离心5分钟，取血清。采用磷钨酸还原法测定血清尿酸水平。结果见表3。
[0049] 表3紫苏叶抗高尿酸血症有效部位对实验性高尿酸血症模型小鼠血清尿酸水平 的影响
同正常对照组比较：#P〈〇.〇l同模型对照组比较：*P〈〇. 01 同正常对照组比较，模型对照组大鼠血清尿酸水平明显增高。别嘌呤醇l〇mg/Kg组、紫 苏叶抗高尿酸血症有效部位250mg/Kg、500mg/Kg和1000mg/Kg组同模型组比较显著降 低模型小鼠血清尿酸水平。
[0050] 实施例10 紫苏叶抗高尿酸血症有效部位毒理研究 取昆明种小鼠30只，饥饿16小时，按40ml/Kg(最大体积）一次灌胃给予实施例3制 备的紫苏叶抗高尿酸血症有效部位28. 57g/Kg(最大浓度)一周内死亡10%，给药24. 28g/ Kg-周内无死亡。由于28.57g/Kg已经为最大体积，最大浓度，因此无法测出半数致死量， 按0. 85组距稀释到24. 28g/Kg无死亡，由此判断紫苏叶抗高尿酸血症有效部位最大不致 死量为：28. 57g/Kg>最大不致死量多24. 28g/kg。上述实验证明紫苏叶抗高尿酸血症有效 部位安全，毒性小。
[0051] 实施例11 紫苏叶抗高尿酸血症有效部位化学成分黄嘌呤氧化酶抑制活性测定HPLC测定方法：Diamonsil0DS色谱柱（250mmX4.6mm，5jwm);流动相：100mmol/L 磷酸二氢钠溶液（pH=3. 5);检测波长：290nm;流速：1. 0mL/min。
[0052] 测定体系：不同浓度测试品溶液(含0. 25%DMS0的0. 07mol/L磷酸盐缓冲液）200 加入0. 07mol/L磷酸盐缓冲液140 #L，黄嘌呤氧化酶溶液120 (0. 02unit/mL， 0. 07mol/L磷酸盐缓冲液)，25°C保温15min，加入黄嘌呤溶液240 #L(300 #m〇l/L， 0.07mol/L磷酸盐缓冲液)，25°C保温15min，加入1mol/L盐酸100 终止反应。空白 对照测定，供试品溶液用含1 %DMS0的0. 07mol/L磷酸盐缓冲液代替。HPLC法测定尿酸 生成量，每组浓度平行三次，计算抑制率。以测试品浓度为横坐标，抑制剂对黄嘌呤氧化酶 抑制率为纵坐标绘制IC5。曲线，通过SPSS统计学软件计算出咖啡酸的1C5。为121. 22 #M、 咖啡酸乙烯酯的IC5。为31. 26 #M、迷迭香酸的IC5。为91. 72 #M、迷迭香酸甲酯的1(：5。为 26. 59 #M、反式对羟基桂皮酸的IC5。为>200 #M、野黄芩苷的IC5。为>200 #M、8, 4' -二 羟基-5, 7-二甲氧基二氢黄酮的IC5。为18.44 #M、黄芩素-7-甲醚的IC5。为21.56 #M、 木犀草素的IC5。为2. 18 和芹菜素的IC5。为0. 44 ;临床治疗药物别嘌呤醇的IC5。 为2.07夕M。
[0053] 实施例12 紫苏叶抗高尿酸血症有效部位化学成分对黄嘌呤氧化酶抑制作用类型测定HPLC测定方法：Diamonsil0DS色谱柱（250mmX4.6mm，5jwm);流动相：100mmol/L 磷酸二氢钠溶液（pH=3. 5);检测波长：290nm;流速：1. 0mL/min。
[0054]测定体系：不同浓度测试品溶液(含0. 25%DMS0的0. 07mol/L磷酸盐缓冲液）200 #L，加入0. 07mol/L磷酸盐缓冲液140 #L，加入黄嘌呤溶液240 #L(100 #m〇l/L、 50 #m〇l/L、37.5ymol/L、25#m〇l/L，0.07mol/L磷酸盐缓冲液)，黄嘌呤氧化酶溶液 120 々L(0.05unit/mL，0.07mol/L磷酸盐缓冲液)，25°C保温 1min，加入 1mol/L盐酸 100 终止反应。HPLC法测定尿酸生成量，每组浓度平行三次，按Lineweaver-Burk双倒数 图法确定抑制作用类型。不同浓度咖啡酸、咖啡酸乙烯酯、迷迭香酸、迷迭香酸甲酯和木犀 草素Lineweaver-Burk双倒数直线均相交于Y轴，表示咖啡酸、咖啡酸乙烯酯、迷迭香酸、 迷迭香酸甲酯和木犀草素的抑制类型为竞争性抑制；不同浓度8, 4' -二羟基-5, 7-二甲氧 基二氢黄酮和黄苳素-7-甲醚Lineweaver-Burk双倒数直线均相交于X轴，表示8, 4' -二 羟基-5, 7-二甲氧基二氢黄酮和黄芩素-7-甲醚的抑制类型为非竞争性抑制；不同浓度芹 菜素Lineweaver-Burk双倒数直线均相交于第二象限，表示芹菜素的抑制类型为混合型抑 制；不同浓度临床治疗药物别噪呤醇Lineweaver-Burk双倒数直线均相交于Y轴，表示别噪 呤醇的抑制类型为竞争性抑制。
[0055] 实施例13 虎紫苏叶抗高尿酸血症有效部位用药学上可接受的载体或赋形剂制备的药物制剂。这 些药物制剂选自以下剂型：片剂、糖衣片剂、薄膜衣片剂、肠溶衣片剂、泡腾片剂、舌下片剂、 胶囊剂、硬胶囊剂、软胶囊剂、微囊剂、微球剂、颗粒剂、丸剂、滴丸剂、散剂、膏剂、□服液、混 悬剂、溶液剂、气雾剂、注射剂，注射乳剂、冻干粉针，还可以根据需要制备成缓释或控释制 剂，在制备药物制剂时可加入药物可接受的载体，所述药物可接受的载体来自：抗氧剂、鏊 合剂、表面活性剂、填充剂、崩解剂、湿润剂、溶剂、缓释材料、肠溶材料、pH调节剂、矫味剂、 色素等，常用载体如：甘露糖醇、右旋糖苷、乳糖、葡萄糖、山梨醇、木糖醇、注射用水、注射用 乙醇、氯化钠、硅衍生物、纤维素、纤维素衍生物、明胶、聚乙烯吡咯烷酮、甘油、吐温80、琼 月旨、碳酸钙、聚乙二醇、环糊精、磷脂类材料、滑石粉、硬脂酸镁、硬脂酸钙。上述制备工艺均 为本领域常规操作，在此不加赘述。
[0056] 实施例14 紫苏叶抗高尿酸血症有效部位为原料制得的药物制剂不仅包括单独使用紫苏叶抗高 尿酸血症有效部位的药物制剂，还包括添加紫苏叶抗高尿酸血症有效部位作为活性成分的 药物制剂。
【主权项】
1. 一种紫苏叶抗高尿酸血症有效部位，其特征在于从紫苏叶中提取分离的有效部位， 其中咖啡酸、咖啡酸乙烯酯、迷迭香酸和迷迭香酸甲酯的重量之和50%~70%，含有5%~10%重 量的野黄芩苷，通过以下方法制备得到：紫苏叶加水煎煮三次，每次用量为紫苏叶重量的 35倍体积量，每次2小时，滤过，滤液合并，浓缩至紫苏叶重量的0. 5倍体积量，加80 %乙 醇调节醇浓度至60 %，静置24小时，滤过，减压回收乙醇得提取物，提取物加水使溶解，用 量为紫苏叶重量的〇. 5倍体积量，用正丁醇振摇提取4次，用量为紫苏叶重量的0. 5倍体积 量，提取液合并，减压回收，得正丁醇分离部位，正丁醇分离部位加水溶解，经大孔吸附树脂 柱HPD-600色谱，填充大孔吸附树脂HPD-600体积为紫苏叶重量的0. 5倍体积，用水洗脱至 洗脱液近无色，弃去洗脱液，用70%乙醇洗脱至洗脱液近无色，收集洗脱液，洗脱液减压浓 缩、干燥得紫苏叶抗高尿酸血症有效部位。2. 根据权利要求1所述的紫苏叶抗高尿酸血症有效部位，其特征在于主要成分包括 咖啡酸、咖啡酸乙烯酯、迷迭香酸、迷迭香酸甲酯、反式对羟基桂皮酸、野黄芩苷、8, 4' -二羟 基-5, 7-二甲氧基二氢黄酮、黄芩素-7-甲醚、木犀草素和芹菜素。3. -种紫苏叶抗高尿酸血症有效部位的制备方法，其特征在于包括以下步骤：紫苏叶 加水煎煮三次，每次用量为紫苏叶重量的35倍体积量，每次2小时，滤过，滤液合并，浓缩至 紫苏叶重量的〇. 5倍体积量，加80 %乙醇调节醇浓度至60 %，静置24小时，滤过，减压回 收乙醇得提取物，提取物加水使溶解，用量为紫苏叶重量的0. 5倍体积量，用正丁醇振摇提 取4次，用量为紫苏叶重量的0. 5倍体积量，提取液合并，减压回收，得正丁醇分离部位，正 丁醇分离部位加水溶解，经大孔吸附树脂柱HPD-600色谱，填充大孔吸附树脂HPD-600体积 为紫苏叶重量的〇. 5倍体积，用水洗脱至洗脱液近无色，弃去洗脱液，用70%乙醇洗脱至洗 脱液近无色，收集洗脱液，洗脱液减压浓缩、干燥得紫苏叶抗高尿酸血症有效部位。4. 根据权利要求3所述的紫苏叶抗高尿酸血症有效部位的制备方法，其特征在于其中 咖啡酸、咖啡酸乙烯酯、迷迭香酸和迷迭香酸甲酯的重量之和50%~70%，含有5%~10%重量的 野黄芩苷。5. 根据权利要求4所述的紫苏叶抗高尿酸血症有效部位的制备方法，其特征在于主要 成分包括咖啡酸、咖啡酸乙烯酯、迷迭香酸、迷迭香酸甲酯、反式对羟基桂皮酸、野黄芩苷、 8, 4' -二羟基-5, 7-二甲氧基二氢黄酮、黄芩素-7-甲醚、木犀草素和芹菜素。6. 权利要求1所述的紫苏叶抗高尿酸血症有效部位在制备治疗高尿酸血症产品中的 应用。7. 根据权利要求6所述的应用，其特征在于该有效部位在制备黄嘌呤氧化酶抑制剂产 品中的应用。8. 含有权利要求1所述的紫苏叶抗高尿酸血症有效部位的药物组合物在制备治疗高 尿酸血症产品中的应用。
【专利摘要】本发明提供了一种紫苏叶抗高尿酸血症有效部位及其制备方法和应用。该有效部位以紫苏叶为原料，经水提取、浓缩、醇沉、减压回收乙醇得提取物，提取物经正丁醇-水液液分配得正丁醇分离部位，正丁醇分离部位经大孔吸附树脂纯化得到。该有效部位中咖啡酸、咖啡酸乙烯酯、迷迭香酸和迷迭香酸甲酯的重量之和50%~70%，含有5%~10%重量的野黄芩苷。本发明以现代分离手段和药理活性筛选相结合的方法确定最佳有效部位，所得有效部位成分更清楚，活性成分含量高，且经体内外实验结果表明，本发明提供的紫苏叶抗高尿酸血症有效部位明显抑制黄嘌呤氧化酶活性达到降尿酸作用。
【IPC分类】A61K31/192, A61P19/06, A61K31/7048, A61K31/353, A61K31/216, A61K36/535
【公开号】CN105055510
【申请号】CN201510580696
【发明人】王威, 韩立春, 师海波, 刘小红, 刘洋
【申请人】青岛大学
【公开日】2015年11月18日
【申请日】2015年9月14日