本发明涉及一种以4-氨基吡咯并[3,2-d]嘧啶为功能配基的层析介质，属于生物化工领域中的蛋白层析分离技术。
背景技术：
免疫球蛋白(immunoglobulin，ig)即抗体(antibody，ab)，是血液和组织液中的一类糖蛋白，是由b细胞接受抗原刺激后增殖分化为浆细胞所产生，是体液免疫的重要效应分子。
抗体的制备技术多种多样，但无论采用何种技术制备的抗体，都需要后期采用不同的分离纯化手段，获得符合要求的抗体产品，抗体的分离纯化应该遵循在满足要求的情况下尽可能减少纯化步骤，提高每一步分离效率，从而提高产率，节约成本。抗体产品往往纯度要求较高，同时还必须保持生物活性，因此传统的分离过程往往难以满足要求。蛋白a或蛋白g亲和层析介质能够特异性结合抗体，但蛋白类亲和配基易被料液中蛋白酶降解脱落，污染产品，且重复使用次数低，介质价格昂贵，操作成本极高，限制了其大规模应用。而传统的离子交换层析和疏水相互作用层析等方法虽然能够结合抗体，但是特异性和选择性较差，分离步骤多，纯化效果有限。因此，开发具有抗体选择性的非蛋白类配基成为研究热点。
技术实现要素：
针对现有技术中存在的技术问题，本案提供一种以4-氨基吡咯并[3,2-d]嘧啶为功能配基的层析介质。
为实现上述目的，本案通过以下技术方案实现：
一种以4-氨基吡咯并[3,2-d]嘧啶为功能配基的层析介质，其中，包括层析基质和配基，所述的层析基质为带有羟基的亲水性多孔微球，配基为经3-氯苯基环氧乙烷活化后偶联的4-氨基吡咯并[3,2-d]嘧啶。
优选的是，所述的以4-氨基吡咯并[3,2-d]嘧啶为功能配基的层析介质，其中，所述的层析基质为羟基化甲基丙烯酸亲水聚合物微球为基质。
优选的是，所述的以4-氨基吡咯并[3,2-d]嘧啶为功能配基的层析介质，其中，所述的层析介质的配基密度为30-100μmol/ml。
一种以4-氨基吡咯并[3,2-d]嘧啶为功能配基的层析介质的制备方法，其其中，包括如下步骤：
1)将层析基质抽干后，加入0.1-0.5倍层析基质质量的30％(v/v)二甲基亚砜、0.5-1.0倍层析基质质量的3-氯苯基环氧乙烷和0.2-0.6倍层析基质质量的氢氧化钠，25℃下200rpm摇床中活化10-40小时，抽滤，用去离子水洗涤得到活化层析基质；
2)将活化层析基质和0.1-0.4倍层析基质质量的6-氨基乙酸混合进行反应，30℃下200rpm摇床中反应3-10小时，抽滤，用去离子水洗涤得到氨基活化的基质；
3)将氨基活化的基质和0.3-0.6倍层析基质质量的4-氨基吡咯并[3,2-d]嘧啶以及0.5-1m碳酸钠缓冲液混合，碳酸钠缓冲液的ph为10-12，30℃下200rpm摇床中反应10-30小时，得到4-氨基吡咯并[3,2-d]嘧啶偶联后的介质；
4)将4-氨基吡咯并[3,2-d]嘧啶偶联后的介质抽滤，去离子水洗涤，加入到含有1-10倍层析基质质量的三乙胺中，30℃下200rpm摇床中反应1-5小时，去离子水洗涤，得到以4-氨基吡咯并[3,2-d]嘧啶为功能配基的疏水性电荷诱导层析介质。
本发明的有益效果是：
本发明研制的以4-氨基吡咯并[3,2-d]嘧啶为功能配基的层析介质，可以用于疏水性电荷诱导层析分离，具有以下优点：(1)抗体吸附容量大，饱和吸附容量可达150mg/ml湿介质，处理能力强；(2)吸附过程不受盐影响，在很宽的电导率范围(0-100ms/cm)内，吸附容量基本保持不变，无需对料液进行稀释或加盐处理，可以直接捕获蛋白，减少了操作步骤；(3)配基密度高，电荷诱导效应强，通过配基上的伯氨基位点偶联配基，偶联效率高；(4)介质性质稳定，采用3-氯苯基环氧乙烷活化并偶联配基，所得介质的配基稳定，清洗再生方便；本发明所研制的新型层析介质，以4-氨基吡咯并[3,2-d]嘧啶为功能配基，具有显著的疏水性电荷诱导层析分离特点，对抗体具有很高的吸附能力，可以用于抗体的规模化制备。
具体实施方式
下面结合实施例对本发明做进一步的详细说明，以令本领域技术人员参照说明书文字能够据以实施。
实施例1
一种以4-氨基吡咯并[3,2-d]嘧啶为功能配基的层析介质的制备方法，其其中，包括如下步骤：取羟基化甲基丙烯酸亲水聚合物微球10g，加入3g30％(v/v)二甲基亚砜、5g3-氯苯基环氧乙烷和2g的氢氧化钠，25℃下200rpm摇床中活化15小时，抽滤，用去离子水洗涤得到活化层析基质；将活化层析基质和2g6-氨基乙酸混合进行反应，30℃下200rpm摇床中反应3-10小时，抽滤，用去离子水洗涤得到氨基活化的基质；将氨基活化的基质和3g4-氨基吡咯并[3,2-d]嘧啶以及0.5m碳酸钠缓冲液混合，碳酸钠缓冲液的ph为10，30℃下200rpm摇床中反应15小时，得到4-氨基吡咯并[3,2-d]嘧啶偶联后的介质；将4-氨基吡咯并[3,2-d]嘧啶偶联后的介质抽滤，去离子水洗涤，加入到含有20g的三乙胺中，30℃下200rpm摇床中反应2小时，去离子水洗涤，得到以4-氨基吡咯并[3,2-d]嘧啶为功能配基的疏水性电荷诱导层析介质，层析介质的配基密度为50μmol/ml。
实施例2
一种以4-氨基吡咯并[3,2-d]嘧啶为功能配基的层析介质的制备方法，其其中，包括如下步骤：取羟基化甲基丙烯酸亲水聚合物微球10g，加入2g的30％(v/v)二甲基亚砜、6g的3-氯苯基环氧乙烷和4g的氢氧化钠，25℃下200rpm摇床中活化25小时，抽滤，用去离子水洗涤得到活化层析基质；将活化层析基质和1g的6-氨基乙酸混合进行反应，30℃下200rpm摇床中反应6小时，抽滤，用去离子水洗涤得到氨基活化的基质；将氨基活化的基质和5g的4-氨基吡咯并[3,2-d]嘧啶以及0.5m碳酸钠缓冲液混合，碳酸钠缓冲液的ph为10，30℃下200rpm摇床中反应20小时，得到4-氨基吡咯并[3,2-d]嘧啶偶联后的介质；将4-氨基吡咯并[3,2-d]嘧啶偶联后的介质抽滤，去离子水洗涤，加入到含有30g的三乙胺中，30℃下200rpm摇床中反应4小时，去离子水洗涤，得到以4-氨基吡咯并[3,2-d]嘧啶为功能配基的疏水性电荷诱导层析介质，层析介质的配基密度为80μmol/ml。
实施例3
一种以4-氨基吡咯并[3,2-d]嘧啶为功能配基的层析介质的制备方法，其其中，包括如下步骤：取羟基化甲基丙烯酸亲水聚合物微球10g，加入5g的30％(v/v)二甲基亚砜、8g的3-氯苯基环氧乙烷和4g的氢氧化钠，25℃下200rpm摇床中活化40小时，抽滤，用去离子水洗涤得到活化层析基质；将活化层析基质和3g的6-氨基乙酸混合进行反应，30℃下200rpm摇床中反应8小时，抽滤，用去离子水洗涤得到氨基活化的基质；将氨基活化的基质和6g的4-氨基吡咯并[3,2-d]嘧啶以及0.5m碳酸钠缓冲液混合，碳酸钠缓冲液的ph为10，30℃下200rpm摇床中反应20小时，得到4-氨基吡咯并[3,2-d]嘧啶偶联后的介质；将4-氨基吡咯并[3,2-d]嘧啶偶联后的介质抽滤，去离子水洗涤，加入到含有40g的三乙胺中，30℃下200rpm摇床中反应1小时，去离子水洗涤，得到以4-氨基吡咯并[3,2-d]嘧啶为功能配基的疏水性电荷诱导层析介质，层析介质的配基密度为100μmol/ml。
尽管本发明的实施方案已公开如上，但其并不仅仅限于说明书和实施方式中所列运用，它完全可以被适用于各种适合本发明的领域，对于熟悉本领域的人员而言，可容易地实现另外的修改，因此在不背离权利要求及等同范围所限定的一般概念下，本发明并不限于特定的细节。