以四肽胃泌素为功能配基的亲和层析介质的制作方法

文档序号:13945744阅读:153来源:国知局

本发明涉及一种以四肽胃泌素为功能配基的亲和层析介质,属于生物化工领域中的蛋白层析分离技术。



背景技术:

抗体被喻为“生物导弹”,具有专一性强、疗效好、毒副作用小等优点,主要用于治疗恶性肿瘤、重大传染性和免疫系统疾病。预计2011年全球抗体销售额将突破500亿美元,占生物技术药物市场的1/3以上,抗体产业己成为各国生物制药的竞争焦点。不过,我国的抗体产业才刚刚起步。

治疗性抗体的临床剂量大,治疗周期长,高昂的治疗费用让普通患者望而却步,全面降低抗体价格的社会需求十分迫切。随着抗体工程的发展,动物细胞表达水平逐年提高,已达到10g/l以上,培养规模也逐步扩大,大规模培养的生产成本已经大大降低。可是,抗体生产成本的70~80%在分离过程,而分离成本难以通过原有技术的规模放大来解决。当前抗体分离的核心技术是proteina亲和层析,分离效果好,但也存在一些固有局限,造成分离成本居高不下,成为抗体生产的瓶颈所在。世界各大生物技术公司和研究机构都在积极探索,寻求proteina亲和层析的替代方法。



技术实现要素:

针对现有技术中存在的技术问题,本案提供一种以四肽胃泌素为功能配基的亲和层析介质。

为实现上述目的,本案通过以下技术方案实现:

一种以四肽胃泌素为功能配基的亲和层析介质,其中,包括层析基质和配基,所述的层析基质为聚壳聚糖,配基为经二乙烯基亚砜活化后偶联的四肽胃泌素。

优选的是,所述的以四肽胃泌素为功能配基的亲和层析介质,其中,所述的层析介质的配基密度为30-120μmol/m3

优选的是,所述的以四肽胃泌素为功能配基的亲和层析介质,其中,包括如下步骤:

1)将层析基质抽干后,加入0.1-0.6倍层析基质质量的25%(v/v)二甲基亚砜、0.5-1.5倍层析基质质量的二乙烯基亚砜和0.3-0.6倍层析基质质量的氢氧化钠,25℃下200rpm摇床中活化5-20小时,抽滤,用去离子水洗涤得到活化层析基质;

2)将活化层析基质和1-3倍层析基质质量的3-巯基丙酸、0.1-0.3倍过硫酸铵混合进行醇化,50℃下200rpm摇床中反应3-7小时,抽滤,用去离子水洗涤,得到醇化的基质;

3)将醇化的基质和0.1-0.3倍层析基质质量的四肽胃泌素以及0.5-1m碳酸钠缓冲液混合,30℃下200rpm摇床中反应5-20小时,得到四肽胃泌素偶联后的介质;

4)将四肽胃泌素偶联后的介质抽滤,去离子水洗涤,加入到环己胺中,30℃下200rpm摇床中反应4-10小时,去离子水洗涤,得到以四肽胃泌素为功能配基的疏水性电荷诱导层析介质。

优选的是,所述的以四肽胃泌素为功能配基的亲和层析介质的制备方法,其中,所述环己胺质量和层析基质质量比为1-5:1。

优选的是,所述的以四肽胃泌素为功能配基的亲和层析介质的制备方法,其中,所述碳酸钠缓冲液的ph为10-12。

本发明的有益效果是:

(1)抗体吸附容量大,饱和吸附容量可达150mg/ml湿介质,处理能力强;

(2)吸附过程不受盐影响,在很宽的电导率范围(0-100ms/cm)内,吸附容量基本保持不变,无需对料液进行稀释或加盐处理,可以直接捕获蛋白,减少了操作步骤;

(3)配基密度高,电荷诱导效应强,通过配基上的伯氨基位点偶联配基,偶联效率高,且该氨基位点也可质子化,可提供辅助的静电排斥作用;

(4)介质性质稳定,采用二乙烯基亚砜活化并偶联配基,所得介质的配基稳定,清洗再生方便;

(5)本发明所研制的新型层析介质,以四肽胃泌素为功能配基,具有显著的疏水性电荷诱导层析分离特点,对抗体具有很高的吸附能力,可以用于抗体的规模化制备。

具体实施方式

下面结合实施例对本发明做进一步的详细说明,以令本领域技术人员参照说明书文字能够据以实施。

实施例1

取聚壳聚糖10g,加入2g的25%(v/v)二甲基亚砜、5g的二乙烯基亚砜和3g的氢氧化钠,25℃下200rpm摇床中活化10小时,抽滤,用去离子水洗涤得到活化层析基质;将活化层析基质和10g的3-巯基丙酸、2g过硫酸铵混合进行醇化,50℃下200rpm摇床中反应3小时,抽滤,用去离子水洗涤,得到醇化的基质;将醇化的基质和1g的四肽胃泌素以及0.5m碳酸钠缓冲液混合,碳酸钠缓冲液的ph为10,30℃下200rpm摇床中反应10小时,得到四肽胃泌素偶联后的介质;将四肽胃泌素偶联后的介质抽滤,去离子水洗涤,加入到含有50g的环己胺中,30℃下200rpm摇床中反应5小时,去离子水洗涤,得到以四肽胃泌素为功能配基的疏水性电荷诱导层析介质。配基密度为50μmol/m3

实施例2

取聚壳聚糖10g,加入5g的25%(v/v)二甲基亚砜、10g的二乙烯基亚砜和5g的氢氧化钠,25℃下200rpm摇床中活化12小时,抽滤,用去离子水洗涤得到活化层析基质;将活化层析基质和10g的3-巯基丙酸、2g过硫酸铵混合进行醇化,50℃下200rpm摇床中反应3小时,抽滤,用去离子水洗涤,得到醇化的基质;将醇化的基质和1g的四肽胃泌素以及0.5m碳酸钠缓冲液混合,碳酸钠缓冲液的ph为10,30℃下200rpm摇床中反应8小时,得到四肽胃泌素偶联后的介质;将四肽胃泌素偶联后的介质抽滤,去离子水洗涤,加入到含有10g的环己胺中,30℃下200rpm摇床中反应7小时,去离子水洗涤,得到以四肽胃泌素为功能配基的疏水性电荷诱导层析介质。配基密度为100μmol/m3

实施例3

取聚壳聚糖10g,加入2g的25%(v/v)二甲基亚砜、10g的二乙烯基亚砜和5g的氢氧化钠,25℃下200rpm摇床中活化10小时,抽滤,用去离子水洗涤得到活化层析基质;将活化层析基质和10g的3-巯基丙酸、3g过硫酸铵混合进行醇化,50℃下200rpm摇床中反应6小时,抽滤,用去离子水洗涤,得到醇化的基质;将醇化的基质和2g的四肽胃泌素以及0.5m碳酸钠缓冲液混合,碳酸钠缓冲液的ph为10,30℃下200rpm摇床中反应20小时,得到四肽胃泌素偶联后的介质;将四肽胃泌素偶联后的介质抽滤,去离子水洗涤,加入到含有10g的环己胺中,30℃下200rpm摇床中反应10小时,去离子水洗涤,得到以四肽胃泌素为功能配基的疏水性电荷诱导层析介质。配基密度为120μmol/m3

尽管本发明的实施方案已公开如上,但其并不仅仅限于说明书和实施方式中所列运用,它完全可以被适用于各种适合本发明的领域,对于熟悉本领域的人员而言,可容易地实现另外的修改,因此在不背离权利要求及等同范围所限定的一般概念下,本发明并不限于特定的细节。



技术特征:

技术总结
本案设计一种以四肽胃泌素为功能配基的亲和层析介质,包括层析基质和配基,所述的层析基质为聚壳聚糖,配基为经二乙烯基亚砜活化后偶联的四肽胃泌素。本发明所研制的新型层析介质,以四肽胃泌素为功能配基,具有显著的疏水性电荷诱导层析分离特点,对抗体具有很高的吸附能力,可以用于抗体的规模化制备。

技术研发人员:瞿欢欢;朱至放
受保护的技术使用者:苏州博进生物技术有限公司
技术研发日:2017.12.06
技术公布日:2018.03.16
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